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摘要GydF4y2Ba

使用高压电势（HELP）装置产生电场（EF）的医疗是日本常用的替代疗法。然而，潜在健康益处的潜在机制尚未完全了解。为了解决这个问题，我们使用液相色谱结合串联质谱（LC－MS/MS）进行血浆脂质组学研究。9-羟基十八碳二烯酸（HODE）HELP（18 kV，30 min）暴露后，13-HODE和13-氢过氧十八碳二烯酸（HpODE）水平显著上调。但是，HODE相关的二醇代谢物、环氧化物代谢物、酮代谢物或前列腺素（PGs）没有影响我们进一步用酶联免疫吸附试验（ELISA）/酶免疫分析（EIA）检测了接触HELP对血浆介质浓度的影响。免疫反应物质P（SP）和脑源性神经营养因子（BDNF）在这些情况下，接触HELP对血管活性肠肽（VIP）、缓激肽、降钙素基因相关肽（CGRP）的免疫反应水平没有影响我们的研究结果为深入了解EF暴露对神经介质和HODEs的药理学调节之间可能存在的关系提供了依据。它们可能在电化学的发展中也很重要。GydF4y2Ba

关键词GydF4y2Ba

HODE，P物质，脑源性神经营养因子，TRPV1，电场疗法GydF4y2Ba

缩写GydF4y2Ba

α-MSH：GydF4y2Ba阿尔法GydF4y2Ba-黑素细胞刺激素；AA:花生四烯酸；BDNF:脑源性神经营养因子；CGRP:降钙素基因相关肽；COX:环氧合酶；CYP4A:细胞色素P450氧化酶4A；DiHOME:二羟基十八烯酸；EF:电场；EIA:酶免疫分析；ELISA:酶联免疫吸附分析；EpOME:环氧十八烯酸；GPR：G蛋白质偶联受体；帮助：高压电势；HETE:羟基二十碳四烯酸；HODE:羟基十八碳二烯酸；HOTrE:羟基十八碳三烯酸；HpODE:氢过氧十八碳二烯酸；LA:亚油酸；LC-MS/MS:液相色谱与串联质谱联用；LOX:脂氧合酶；NGF:神经生长th因子；OEA：油酰乙醇酰胺；羰基：氧代十八碳二烯酸；PG：前列腺素；15-PGDH:15-羟基前列腺素脱氢酶；PLAGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba：磷脂酶AGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba；解放军GydF4y2Ba_2.GydF4y2BaGGydF4y2Ba_2.GydF4y2BaD组：IID分泌型磷脂酶AGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba;PPAR-γ：过氧化物体增殖物激活的受体 -GydF4y2Ba伽玛GydF4y2BaSP: P物质;TRPV1:瞬时受体电位香草醛1;VIP:血管活性肠肽。GydF4y2Ba

介绍GydF4y2Ba

一种旨在将人体暴露于高压电势（帮助）的治疗装置已被日本的卫生，劳动和福利部批准[1-9]。据报道，高压电场（EF）疗法是对抗肩部，便秘，失眠和头痛的有效治疗方法[1-9]。然而，EF暴露诱导其各种健康益处的机制很差。已经提出了关键介质，例如神经肽和内源性代谢物，作为代表症状和电化靶蛋白之间的界面的候选分子[10-16]。我们以前试图使用非靶向血浆代谢组学的发现EF暴露诱导的生物标志物导致在内源性脂质衍生的信号传导分子油酰氨基（OEA）中的变化检测，以及不饱和脂肪酸如油酸，亚油酸（LA）那GydF4y2Ba顺式GydF4y2Ba-11二十碳烯酸，GydF4y2Ba顺式GydF4y2Ba-11,14-二十碳二烯酸，GydF4y2Ba顺式GydF4y2Ba-8,11,14-己二烯酸，GydF4y2Ba顺式GydF4y2Ba-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸，GydF4y2Ba顺式GydF4y2Ba-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸，和花生酸（AA）[15]。特别是，OEA在血管外感觉神经上激活瞬态受体潜在的香草醇1（TRPV1）[17]。在我们以前的研究中，我们发现OEA在IID分泌磷脂酶A组中诱导标记上调GydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba（解放军）GydF4y2Ba_2.GydF4y2BaGGydF4y2Ba_2.GydF4y2BaD） 在人皮下培养脂肪细胞中的表达[15]。解放军中LA或AA的释放GydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba该反应被认为是导致生物活性脂质介质形成的级联反应的限速步骤GydF4y2Ba等GydF4y2Ba.报道称解放军的激活GydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba-催化的水解反应由EF[18]诱导。因此，我们假设EF暴露后LA和AA等不饱和脂肪酸的增加可能会影响血浆中脂氧合酶(LOX)衍生代谢物的变化。在本研究中，我们使用LC-MS/MS对健康受试者暴露于单一HELP刺激前后的血浆样本中LA和aa衍生的脂质代谢物的水平进行了研究。我们报道了la衍生的脂质介质9-HODE和13-HODE可通过HELP (18 kV, 30分钟)暴露上调。因为9-HODE处理培养的三叉神经节神经元通过激活TRPV1[19]诱导感觉神经肽的释放，我们也研究了HELP (18 kV, 30分钟)暴露在几种介质上的影响。GydF4y2Ba

材料和方法GydF4y2Ba

EF exposure　

用于EF暴露的系统已在前面描述过[8,9,15,16]。EF系统配有一个变压器、一个座椅和两个绝缘体覆盖电极。一个电极放在受试者脚所在的底板上，另一个电极放在受试者头部上方。HELP装置（Healthtron PRO-18T、H9000或HES-A30；日本东京白驹健康科学研究所有限公司）产生的EF是通过在18 kV下转换50 Hz交流电均匀产生的。日本政府于1963年建立了供人类使用的安全系统。GydF4y2Ba

主题　

35名健康成年人（12名男性和23名女性；平均年龄46.3±1.1岁；平均体重指数（BMI）22.3±0.5 kg/m）GydF4y2Ba^2.GydF4y2Ba)参与实验1（暴露条件：18 kV，30 min）。10名健康成人（3名男性和7名女性；平均年龄46.8±2.9岁；平均体重指数22.5±1.0 kg/m）GydF4y2Ba^2.GydF4y2Ba)参与实验二(暴露条件:18 kV, 30分钟)。10名健康成人(5男5女;平均年龄42.4±2.8岁;平均BMI, 23.6±1.0 kg/mGydF4y2Ba^2.GydF4y2Ba)参与实验3（暴露条件：18 kV，15 min）。10名健康成人（5名男性和5名女性；平均年龄42.5±2.9岁；平均体重指数21.4±1.0 kg/m）GydF4y2Ba^2.GydF4y2Ba)参与实验4（暴露条件：9kV，15min）。10名健康成人（6名男性和4名女性；平均年龄45.9±2.9岁；平均体重指数22.9±1.0 kg/mGydF4y2Ba^2.GydF4y2Ba)参与实验5（暴露条件：30kV，15min）。所有实验均在上午进行，所有参与者在收到有关研究的口头和书面信息后签署知情同意书。所有实验均按照赫尔辛基宣言进行，研究方案经白驹健康科学研究所人类伦理委员会批准o、 有限公司（日本东京）。GydF4y2Ba

等离子体准备　

在涂有乙二胺四乙酸（VP-NA070K；日本东京Terumo公司）的真空采集器管中采集血样，并立即以800 x的速度离心GydF4y2BaGGydF4y2Ba5分钟将血浆从其他细胞物质中分离出来。然后将血浆转移到一个新鲜的Eppendorf管中，并在-80°C下储存，直至加工。GydF4y2Ba

LC－MS/MS分析GydF4y2Ba

脂质代谢物的测量如前所述[20]。使用配备ACQUITY UPLC分离模块（美国马萨诸塞州米尔福德沃特斯公司）的API 4000质谱仪（美国加利福尼亚州福斯特市AB SCIEX）对脂质代谢物进行LC－MS/MS分析。在40°C条件下，在梯度条件下，以0.153ml/min的流速在HSS T3柱（1.8µm，2.1 x 150 mm，Waters Corporation，Milford，MA，USA）上进行色谱分离。Mobille相由0.1%乙酸/乙腈（7:3，v/v）和乙腈/2-丙醇（1:1，v/v）组成。涡轮离子喷射界面在负离子模式下运行。使用Analyst 1.5.2（美国加利福尼亚州福斯特市AB SCIEX）进行定量。多反应监测（MRM）m/z转变为9-HODE=295/171；13-HODE=295/195；9-HOTrE=293/171；13 HOTrE=293/195；9,10-DiHOME=313/201；12,13-DiHOME=313/183；9（10）-EpOME=295/277；12（13）-EpOME=295/171；9-HpODE=293/185；13 HpODE=293/113；9-OxoODE=293/185；13 OxoODE=293/113；5-HETE=319/301；12-HETE=319/301；15-HETE=319/219；20-HETE=319/301；PGDGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba=351/315；PGEGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba=351/271；PGFGydF4y2Ba_2αGydF4y2Ba=353/309；13,14-二氢-15-酮基-PGDGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba= 351/333;13,14-二氢-15-keto-pgeGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba= 351/333;13、14-dihydro-15-keto-PGFGydF4y2Ba_2αGydF4y2Ba=353/182.GydF4y2Ba

ELISA /环境影响评价分析　

血浆SP、VIP、缓激肽、CGRP、胃动素、BDNF和NGF的免疫反应水平，使用Cayman Chemical公司(Ann Arbor, MI)的人SP EIA试剂盒、LifeSpan BioSciences公司(Seattle, WA)的人VIP和NGF ELISA试剂盒、Cloud-Clone公司(Houston, TX)的人缓激肽ELISA试剂盒、人CGRP ELISA试剂盒来自Bertin Pharma (Montigny le Bretonneux，法国)，人motilin ELISA试剂盒来自Cusabio Biotech(武汉，湖北)，人BDNF ELISA试剂盒来自Phoenix Pharmaceuticals (Belmont, CA)。GydF4y2Ba

统计分析　

使用welch分析数据GydF4y2BaTGydF4y2Ba-测试。可能性(GydF4y2BaPGydF4y2Ba)值<0.05被认为具有统计学意义。GydF4y2Ba

结果GydF4y2Ba

接触HELP对健康人血浆脂质代谢产物的影响GydF4y2Ba

我们使用LC－MS/MS对35名健康参与者血浆中的LA衍生脂质代谢物进行了评估。HELP（18 kV，30 min）暴露显示9-HODE的血浆浓度显著升高（2307±142与1956±136 pg/mL），GydF4y2Bap=GydF4y2Ba0.004），13-HODE（4419±264对3762±272 pg/mL，GydF4y2Bap=GydF4y2Ba0.001）和13-hpode（486±50与427±47 pg / ml，GydF4y2Bap=GydF4y2Ba在这些条件下，帮助暴露对9-羟基十八碳三烯酸（HOTrE）、13-羟基十八碳三烯酸（HOTrE）、9,10-二羟基十八碳烯酸（DiHOME）、12,13-二HOME、9（10）-环氧十八碳烯酸（EpOME）、12（13）-EpOME、9-HpODE、9-氧代十八碳二烯酸（OxoODE）或13-氧代（图1；表1）没有影响。GydF4y2Ba

代谢物GydF4y2Ba	之前GydF4y2Ba（微克/毫升）GydF4y2Ba	后GydF4y2Ba（微克/毫升）GydF4y2Ba	比率GydF4y2Ba
	平均值±SEGydF4y2Ba	平均值±SEGydF4y2Ba	前/后GydF4y2Ba	PGydF4y2Ba价值GydF4y2Ba
LA衍生GydF4y2Ba（n=35）GydF4y2Ba
醇GydF4y2Ba
9-HODEGydF4y2Ba	1956 ± 136GydF4y2Ba	2307 ± 142GydF4y2Ba	1.18GydF4y2Ba	0.004 **GydF4y2Ba
13-HODEGydF4y2Ba	3762±272.GydF4y2Ba	4419 ± 264GydF4y2Ba	1.17GydF4y2Ba	0.001 * *GydF4y2Ba
9号酒店GydF4y2Ba	80.4±12.7GydF4y2Ba	89.7±14.3GydF4y2Ba	1.12GydF4y2Ba	0.221GydF4y2Ba
13号酒店GydF4y2Ba	432 ± 66GydF4y2Ba	428 ± 52GydF4y2Ba	0.99GydF4y2Ba	0.929GydF4y2Ba
二醇GydF4y2Ba
9,10-DiHOMEGydF4y2Ba	293 ± 30GydF4y2Ba	326 ± 32GydF4y2Ba	1.11GydF4y2Ba	0.163GydF4y2Ba
12,13-DiHOMEGydF4y2Ba	1136±140GydF4y2Ba	1150 ± 76GydF4y2Ba	1.01GydF4y2Ba	0.898GydF4y2Ba
环氧化物GydF4y2Ba
9（10）-epomeGydF4y2Ba	514 ± 127GydF4y2Ba	560 ± 69GydF4y2Ba	1.09GydF4y2Ba	0.627GydF4y2Ba
12（13）-EpOMEGydF4y2Ba	3829 ± 421GydF4y2Ba	4338 ± 297GydF4y2Ba	1.13GydF4y2Ba	0.171GydF4y2Ba
过氧化氢GydF4y2Ba
9-HpODEGydF4y2Ba	15.3±2.0GydF4y2Ba	16.9±2.0GydF4y2Ba	1.10GydF4y2Ba	0.182GydF4y2Ba
13 HpODEGydF4y2Ba	427 ± 47GydF4y2Ba	486±50GydF4y2Ba	1.14GydF4y2Ba	0.016 *GydF4y2Ba
酮GydF4y2Ba
9-羰基GydF4y2Ba	1131±91GydF4y2Ba	1080 ± 76GydF4y2Ba	0.96GydF4y2Ba	0.554GydF4y2Ba
13奥克苏德GydF4y2Ba	756 ± 47GydF4y2Ba	791 ± 55GydF4y2Ba	1.05GydF4y2Ba	0.351GydF4y2Ba
AA衍生GydF4y2Ba（n=10）GydF4y2Ba
5-HETEGydF4y2Ba	530 ± 58GydF4y2Ba	491±25GydF4y2Ba	0.93GydF4y2Ba	0.351GydF4y2Ba
12-HETEGydF4y2Ba	568 ± 139GydF4y2Ba	433 ± 86GydF4y2Ba	0.76GydF4y2Ba	0.391GydF4y2Ba
15-HETEGydF4y2Ba	268±35.GydF4y2Ba	245 ± 16GydF4y2Ba	0.91GydF4y2Ba	0.445GydF4y2Ba
20-HETEGydF4y2Ba	250±54GydF4y2Ba	259 ± 14GydF4y2Ba	1.04GydF4y2Ba	0.882GydF4y2Ba
13,14-二氢-15-酮基-PGDGydF4y2Ba2.GydF4y2Ba	4.60±0.55.GydF4y2Ba	4.16 ± 0.39GydF4y2Ba	0．90GydF4y2Ba	0.272GydF4y2Ba
13,14-二氢-15-keto-pgeGydF4y2Ba2.GydF4y2Ba	13.8 ± 2.4GydF4y2Ba	12.8 ± 1.9GydF4y2Ba	0.93GydF4y2Ba	0.689GydF4y2Ba
13,14-二氢-15-酮基-PGFGydF4y2Ba2.GydF4y2BaA.GydF4y2Ba	13.0 ± 2.5GydF4y2Ba	11.3 ± 1.9GydF4y2Ba	0.87GydF4y2Ba	0.521GydF4y2Ba
PGDGydF4y2Ba2.GydF4y2Ba	4.26 ± 1.32GydF4y2Ba	4.26 ± 1.19GydF4y2Ba	1GydF4y2Ba	0.998GydF4y2Ba
铂族元素GydF4y2Ba2.GydF4y2Ba	6.18 ± 1.12GydF4y2Ba	8.33 ± 1.11GydF4y2Ba	1.35GydF4y2Ba	0.220GydF4y2Ba
PGFGydF4y2Ba2.GydF4y2BaA.GydF4y2Ba	13.1±2.4GydF4y2Ba	10.2±1.8GydF4y2Ba	0.78GydF4y2Ba	0.384GydF4y2Ba

表1。GydF4y2Ba暴露于HELP（18千伏；30分钟）之前和之后人类健康血浆中的脂质代谢物谱。GydF4y2Ba

*表明存在显著差异（*p<0.05，**p<0.01，t检验）。GydF4y2Ba

图1。GydF4y2Ba人类健康血浆在接触HELP（18 kV）30分钟前后的脂质组学分析。GydF4y2Ba

（a） 健康人血浆样品中9-HODE和13-HODE的典型MS/MS光谱。（b）健康人血浆中的典型9-HODE峰。（c）健康人血浆中的典型13-HODE峰。GydF4y2Ba

为了研究HELP暴露是否会影响其他羟基代谢物，我们测试了HELP（18 kV，30 min）暴露对AA衍生HETE和PGs的影响。如表1所示，HELP暴露对5-HETE；12-HETE；15-HETE；20-HETE；13,14-二氢-15-keto-PGD没有影响GydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba；13,14-二氢-15-酮基-PGEGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba；13,14-二氢-15-酮基-PGFGydF4y2Ba_2αGydF4y2Ba；PGDGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba；PGEGydF4y2Ba_2.GydF4y2Ba; 或PGFGydF4y2Ba_2αGydF4y2Ba．GydF4y2Ba

帮助暴露在EF后时分点血浆中血浆中免疫反应性SP水平的影响　

免疫反应性SP的EIA分析结果如图2a所示。与接触前水平（0分钟，1.83倍，GydF4y2Bap=GydF4y2Ba0.111；30分钟，2.37倍，GydF4y2BaPGydF4y2Ba= 0.032)。在18 kV下处理15 min，研究HELP对免疫反应性SP水平的影响。后/前的比率为1.43 (GydF4y2Bap=GydF4y2Ba0.136), 1.72 (GydF4y2Bap=GydF4y2Ba0.007)和2.37 (GydF4y2Bap=GydF4y2Ba0.003），分别适用于0分钟时间点（A0）、15分钟时间点（A15）和45分钟时间点（A45）（图2b）。GydF4y2Ba

图2。GydF4y2Ba在多个时间点，接触帮助对健康人血浆中免疫反应性SP水平的影响。GydF4y2Ba

（a） 在多个时间点，接触HELP（18千伏；30分钟）对血浆免疫反应性SP水平的影响。（b） 接触HELP（18kV，15min）对多个时间点血浆免疫反应性SP水平的影响。结果以平均值±扫描电镜（n=10）表示*GydF4y2BaPGydF4y2Ba< 0.05与以前相比，**GydF4y2BaPGydF4y2Ba与之前相比<0.01。GydF4y2Ba

然后使用15分钟的治疗来研究负责EF强度的免疫反应性SP的性质。在45分钟时间点（A45）/之前，9和30 kV时，免疫反应性SP水平的比率分别为1.04（p＝0.792）和1.29（p＝0.011）。GydF4y2Ba

Effect of HELP exposure on mediators in plasma from healthy humans at different time points following EF　

鉴于SP的释放被认为有助于调节介质的调节[21,22]，我们评估了30分钟的有助于暴露于18kV的血浆中的蛋白质和肽激素的影响。如表2所示，在有助于暴露水平（1.39倍，139倍）后，在有助于暴露后，血浆免疫反应性BDNF浓度明显增加。GydF4y2Bap=GydF4y2Ba相反，与接触前相比，接触HELP后血浆免疫反应性NGF浓度立即显著降低（0.88倍，GydF4y2Bap=GydF4y2Ba0.017)。在这些条件下，HELP暴露不影响VIP、缓激肽、CGRP或胃动素的免疫反应水平(表2)。GydF4y2Ba

调解员GydF4y2Ba	之前GydF4y2Ba 平均值±SEGydF4y2Ba	0分钟GydF4y2Ba	30分钟GydF4y2Ba
		求救GydF4y2Ba 平均值±SEGydF4y2Ba	求救GydF4y2Ba 平均值±SEGydF4y2Ba
	n=10GydF4y2Ba	n=10GydF4y2Ba	n=10GydF4y2Ba
肽类激素GydF4y2Ba
VIP（pg/mL）GydF4y2Ba	221 ± 27GydF4y2Ba	197±27GydF4y2Ba	227±18.GydF4y2Ba
Bradykinin (pg/mL)	11.0±3.0GydF4y2Ba	8.7±2.1GydF4y2Ba	7.1±1.5GydF4y2Ba
降钙素基因相关肽（pg/mL）GydF4y2Ba	51.2 ± 13.8GydF4y2Ba	46.6 ± 10.4GydF4y2Ba	38.4 ± 7.5GydF4y2Ba
胃动素（pg/mL）GydF4y2Ba	28.3±3.6GydF4y2Ba	25.4 ± 1.7GydF4y2Ba	27.4±2.6GydF4y2Ba
神经营养素GydF4y2Ba
脑源性神经营养因子(ng / mL)GydF4y2Ba	21.3±1.8GydF4y2Ba	23.9 ± 3.0GydF4y2Ba	29.7 ± 4.4 *GydF4y2Ba
NGF（pg/mL）GydF4y2Ba	19.9±3.6GydF4y2Ba	17.5 ± 3.9 *GydF4y2Ba	20.1±4.1GydF4y2Ba

表2。GydF4y2BaHELP(18千伏，30分钟)暴露在多个时间点对健康人血浆中介质的影响GydF4y2Ba

*GydF4y2BaPGydF4y2Ba与之前相比<0.05。GydF4y2Ba

然后使用15分钟的治疗研究负责EF强度的免疫反应性BDNF的性质。45分钟后时间点（A45）/之前的相对比率分别为1.39（p＝0.031）和1.26（p＝0.006），持续9和30 kV。GydF4y2Ba

讨论GydF4y2Ba

在这项研究中，我们发现健康人体受试者中的LA（18:2n-6）衍生羟基-（9-HODE和13-HODE）和氢过氧-（13-HpODE）脂肪酸对急性EF暴露敏感。然而，AA（20:4n-6）衍生羟基脂肪酸（20-HETE、15-HETE、12-HETE和5-HETE）AA衍生的13,14-二氢-15-酮-PGs不受EF暴露的影响，可产生9-HODE和13-HODEGydF4y2Ba通过GydF4y2Ba巨噬细胞和血管细胞中的15-LOX[23]。然而，UpstonGydF4y2Ba等GydF4y2Ba．已经证明LA的非酶氧化会产生大约相等的9-HODE和13-HODE[24]混合物。因此，EF暴露可通过非酶氧化产生至少部分9-HODE和13-HODE，而不能通过5-LOX、12-LOX、细胞色素P450氧化酶4A (CYP4A)和环氧化酶(COX)/15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)。但ef诱导9-HODE、13-HODE和13-HpODE变化的具体机制尚不清楚。GydF4y2Ba

我们的研究结果表明，急性EF暴露可上调免疫反应性SP。EF暴露似乎不会对生理肽激素水平产生不利影响，至少对VIP、缓激肽、CGRP或胃动素水平没有影响。EF暴露后免疫反应性SP浓度变化的分子机制是复杂的，可以用几种方式进行解释。最近，发现了速激肽家族的一个新成员，该家族与SP具有高度序列一致性[25]。为了更好地了解免疫反应性SP的特性，阐明SP对新的速激肽家族（包括血球激肽1）的特异性非常重要。进一步的研究可能阐明免疫反应性SP的特性。TRPV1是一种存在于感觉神经元上的非选择性阳离子通道，由热（>43°C）、质子、辣椒素和内香草醛激活[26-28]。OEA是一种内香草醛，被认为是TRPV1的内源性激动剂[17,29]。肯德尔GydF4y2Ba等GydF4y2Ba. 最近报道，OEA和LA衍生的羟基脂肪酸，如9-和13-HODE，在人体皮肤中高浓度存在[30]。神经肽，如SP和CGRP，存在于人类皮肤中[31]。有趣的是，帕特沃汉GydF4y2Ba等GydF4y2Ba．报道称，在40-55°C[19]温度范围的有害热暴露后，动物皮肤活检中形成了9-HODE和13-HODE作为TRPV1的内源性配体。值得注意的是，9-HODE应用于培养的三叉神经节神经元可刺激神经肽如CGRP[19]的释放。内森GydF4y2Ba等GydF4y2Ba据报道，TRPV1介导初级感觉神经元释放SP[32]。此外，米兰达·莫拉莱斯GydF4y2Ba等GydF4y2Ba最近有报道称，TRPV1激活引起的轴突反射是由河豚毒素抗性电压门控钠介导的GydF4y2Ba^+GydF4y2Ba肠传入神经中的通道[33]。还有证据表明，电刺激对皮肤周围神经末梢释放SP有刺激作用[34]。因此，TRPV1的几种内源性配体可能发挥作用GydF4y2Ba通过GydF4y2Ba人体肠道或皮肤周围感觉神经元神经末梢轴突反射诱导的SP释放[35]。通过服用辣椒素改善吞咽反射的研究，已经获得了大量关于预防吞咽障碍的证据[36]。蛯原GydF4y2Ba等GydF4y2Ba．报道辣椒素通过增加SP水平改善吞咽反射[37,38]。在未来的临床试验中，评价EF暴露对吞咽困难的缓解作用将是重要的。GydF4y2Ba

SP、LA、13-HODE和13-HpODE诱导猪冠状动脉内皮介导的血管舒张[39,40]。有趣的是，OEA还导致大鼠肠系膜小动脉内皮依赖性血管舒张[41]。OEA激活血管周围感觉神经并诱导神经肽释放[41].Tochio报道了类似的血管扩张GydF4y2Ba等GydF4y2Ba。在一项研究中，研究了EF暴露对大鼠肠系膜小动脉的影响[42]。因此，可以想象，血浆中9-HODE、13-HODE、13-HpODE、OEA和免疫反应性SP水平的增加，至少在一定程度上是导致接受EF治疗的肩关节僵硬患者出现改善的原因[7]。GydF4y2Ba

Capsaicin用于慢性疼痛缓解作为伤残效果的抗官能化诱导剂[27,28,43]。例如，辣椒素皮肤贴剂可用于治疗外周神经病疼痛[44]。我们以前的研究表明，急性EF（18kV，30分钟）曝光诱导血浆OEA水平的增加[15]。Shinba的实验预防疫层设计研究GydF4y2Ba等GydF4y2Ba.表明EF暴露的重复刺激降低了无明显潜在疾病的慢性疼痛患者的疼痛视觉模拟量表[8]。尽管本研究中未进行重复EF治疗，但EF暴露可缓解疼痛，至少部分缓解疼痛，GydF4y2Ba通过GydF4y2Ba用9-HODE、13-HODE或OEA使TRPV1脱敏。然而，9-HODE和13-HODE也能激活过氧化物酶体增殖物激活的受体-GydF4y2Ba伽玛GydF4y2Ba（PPAR-γ）[45]，提高这些受体在EF暴露期间，这些受体也用作9-HODE / 13-HODE的靶标。进一步的研究正在进行中。GydF4y2Ba

本研究的结果还表明急性EF暴露会影响健康人受试者中的血浆BDNF水平。受到BDNF监管的相当大的证据GydF4y2Ba阿尔法GydF4y2Ba-黑素细胞刺激素（α-MSH）是从BDNF表达的研究中获得的[46]。NicholsonGydF4y2Ba等GydF4y2Ba．据报道，刺激黑素皮质激素4受体[47]可诱导BDNF的释放。我们已经报道，EF暴露可诱导血浆[16]中非选择性黑素皮质激素受体激动剂α-MSH水平的增加。因此，我们有理由推测，EF暴露通过上调α-MSH激活BDNF的释放/分泌或生产。然而，目前尚不清楚BDNF水平的变化是否可归因于神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞、肥大细胞、成纤维细胞、白细胞、血小板或角化细胞。EF暴露诱导的BDNF信号通路有待进一步研究。值得注意的是，外周血循环中完整的BDNF可以穿过血脑屏障GydF4y2Ba通过GydF4y2Ba一种高容量、可饱和的转运系统[48]。在大鼠和猪中观察到血液BDNF和海马BDNF水平之间存在正相关[49]。海马中的神经营养活性被认为在空间学习和记忆功能中起着关键作用[50,51]。有趣的是，YanamotoGydF4y2Ba等GydF4y2Ba．有报道称，EF暴露(5小时/天，3周)诱导小鼠海马BDNF水平升高，并改善小鼠[52]梗死灶Morris水迷宫任务。相比之下,CampolongoGydF4y2Ba等GydF4y2Ba.报道说，训练后给大鼠服用OEA可增强Morris水迷宫表现中的记忆巩固[53]。因此，有理由推测EF暴露促进空间学习和记忆功能GydF4y2Ba通过GydF4y2BaOEA和BDNF的上调。最近的一项研究表明，血浆BDNF水平与耳鸣严重程度的客观评估呈负相关[54]。在未来，评估EF暴露对耳鸣的可能影响将是有意义的。GydF4y2Ba

总之，急性EF暴露对健康受试者的血浆9-HODE、13-HODE、SP和BDNF水平产生显著影响。我们的研究结果揭示了帮助装置（PRO-18T）对健康有益的分子机制在吞咽困难、慢性疼痛、轻度认知障碍和耳鸣的治疗方面也可能很重要。GydF4y2Ba

竞争利益GydF4y2Ba

YN-Y、HH和AH受雇于Hakuju健康科学研究所有限公司，FN受雇于CMIC制药科学有限公司，MS受雇于Acel有限公司。所有其他作者均无竞争利益。GydF4y2Ba

Authors’ contributions　

YN-Y设计并监督研究，并撰写手稿。FN进行LC－MS/MS。YN-Y、MS、HH和AH进行EF暴露和生化实验。所有作者均已阅读并批准了手稿的最终版本。GydF4y2Ba

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