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摘要gydF4y2Ba

使用高压电势(HELP)装置产生电场(EF)的医疗是日本常用的替代疗法。然而，人们还没有完全了解这种潜在健康益处的潜在机制。为了解决这一问题，我们使用选择性反应监测(SRM)分析从健康人体受试者获得的血浆样本中，在单一HELP暴露(9 kV/电极+ 9 kV/电极，30分钟)之前和之后，研究溶素型磷脂的水平。HELP暴露后溶血磷脂酰胆碱(lysoPC)-22:4显著上调。然而，对溶血磷脂酸(溶血酶a)或其他溶血酶c的水平没有影响。LysoPC被认为是一种瞬时受体势香草素2 (TRPV2)的内源性激活因子，可以加速肠道运动。我们进一步研究了gydF4y2Ba在网上gydF4y2BalysoPC-22:4与TRPV2对接模拟。对接结果表明，lysoPC-22:4具有良好的结合能(-8.2 kcal/mol)。我们的发现为EF治疗缓解便秘的分子机制提供了新的见解。gydF4y2Ba

关键字gydF4y2Ba

溶血磷脂酰胆碱，溶血磷酯-22:4,TRPV2，脂质组学，电场治疗gydF4y2Ba

缩写gydF4y2Ba

英孚:电场;费尔南多-阿隆索:脂肪酸;GPR119: G蛋白偶联受体119;帮助:高压电位;lysoPA: lysophosphatidic酸;lysoPC: lysophosphatidylcholine;lysoPC-22:4:(2 - {((2 r) 3 - [(7 z, 10 z, 13个z, 16 z) -docosa-7, 10日13日16-tetraenoyloxy] 2-hydropropyl phosphonato)氧}乙基)trimethylazanium;PA:磷脂酸;PC:磷脂酰胆碱;RTx: resiniferatoxin; SRM: selected reaction monitoring; TRPM8: transient receptor potential　melastatin 8; TRPV1: transient receptor potential vanilloid 1; and TRPV2: transient receptor potential vanilloid 2.

简介gydF4y2Ba

日本厚生劳动省(Ministry of Health, labor and Welfare)批准了一种使人体暴露于高压电势(HELP)下的治疗装置[1-15]。据报道，高压电场(EF)疗法可有效治疗肩硬、头痛、失眠和慢性便秘[1-15]。在便秘的情况下，从一些功能性便秘和慢性便秘的临床研究中得到了相当多的疗效证据[16-17]。综合来看，这些研究的结果表明，HELP暴露可能为几种情况提供了一种替代疗法，尽管其作用机制仍不清楚。我们之前尝试使用血浆代谢组学来寻找HELP暴露诱导的生物标志物，结果发现了脂源性信号分子，如油酰乙醇酰胺(OEA)，gydF4y2Ba独联体gydF4y2Ba-8,11,14-二十碳三烯酸，9-羟基十八碳二烯酸(9-HODE)， 13-HODE, 13-氢过氧十八碳二烯酸(13-HpODE)， 3-羟基丁酸[18-21]。内源性脂源性信号分子被认为是表征症状和电催化靶蛋白之间界面的候选分子[18-21]。目前，更多的脂源性信号分子定量方法利用了SRM分析[22-26]。因此，我们假设EF暴露后血浆脂肪酸水平的升高可能与血浆中溶素型磷脂的变化有关。Mihara最近的一项研究gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba胃肠道转运报告gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba由溶素型磷脂lysoPC[27]加速。Mihara的观察gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba通过对健康受试者暴露于单一HELP刺激[27]前后的血浆样本进行SRM分析，使我们研究溶血多糖的变化。在此，我们报道了HELP暴露(9 kV/电极+ 9 kV/电极，30分钟)可上调lysoPC-22:4。由于lysoPC对分离肌肠神经元的处理诱导瞬时受体电位vanilloid 2 (TRPV2)介导的应答[27]，我们使用AutoDock Vina对接软件进行了一项结合研究，以探索lysoPC-22:4与TRPV2活性位点的相互作用。gydF4y2Ba

材料和方法gydF4y2Ba

EF暴露gydF4y2Ba

用于EF暴露的系统先前已经描述过[18-21]。EF系统配备了一个变压器，一个座椅和两个绝缘体覆盖的电极。一个电极被放置在受试者脚所在的地板上，另一个被放置在受试者头部上方。HELP仪(Healthtron PRO-18T;白州健康科学研究所有限公司，东京，日本)是由18kv (9kv /电极+ 9kv /电极)转换50hz交流电统一创建的。1963年，日本政府确立了该系统对人类使用的安全性。gydF4y2Ba

主题gydF4y2Ba

50名健康成人[男性21名，女性29名;平均年龄46.5±0.9岁;平均体重指数(BMI)为21.9±0.4 kg/mgydF4y2Ba^2gydF4y2Ba]参加实验一(暴露条件:9kv /电极+ 9kv /电极，30分钟)。25名健康成人(9名男性和16名女性;平均年龄46.1±1.1岁;BMI: 22.2±0.5 kg/mgydF4y2Ba^2gydF4y2Ba)参加实验二(暴露条件:9kv /电极+ 9kv /电极，30min)。所有实验都在上午进行，所有参与者在收到关于研究的口头和书面信息后签署了知情同意书。所有实验均按照《赫尔辛基宣言》进行，研究方案由白州健康科学研究所有限公司(日本东京)人类伦理委员会批准。gydF4y2Ba

等离子体的准备gydF4y2Ba

血液样本收集在涂有乙二胺四乙酸(VP-NA070K;Terumo Corporation, Tokyo, Japan)，并立即以800倍的速度离心gydF4y2BaggydF4y2Ba将血浆与其他细胞物质分离5分钟。然后将血浆转移到新鲜的Eppendorf管中，在-80℃保存直到加工。gydF4y2Ba

磷脂制备gydF4y2Ba

对磷脂的综合分析基本上与前面描述的方法相同[28-29]。简单地说，用Bligh-Dyer法从血浆中提取总磷脂[30]。低/有机相的等分在NgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba，并将残渣溶解在甲醇中进行LC-MS/MS测定磷脂酰胆碱(PC)。为了分析磷脂酸(PA)，在装载到与氯仿预平衡的DEAE纤维素柱(Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA)上之前，将另一份相同的脂质提取物添加到等量的甲醇中。经氯仿/甲醇(1:1,v/v)连续洗涤后，用氯仿/甲醇/盐酸/水(12:12:1∶1,v/v)洗脱酸性磷脂，蒸发至干燥形成残渣，再溶于甲醇中。在LC-MS/MS分析[31]之前，合成部分与tms -重氮甲烷进行甲基化反应。gydF4y2Ba

质谱分析gydF4y2Ba

LC-电喷雾电离-质谱/质谱分析采用UltiMate 3000 LC系统(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)，配备HTC PAL自动采样器(CTC Analytics AG, Lake Elmo, MN, USA)。将10µL的脂质样品注入Waters x - bridge C18(3.5µm, 150 mm x 1.0 mm id .， Waters Corporation, Milford, MA, USA)中，在室温(25℃)下，采用如下梯度溶剂体系:流动相A[异丙醇/甲醇/水(5:1:4,v/v/v)，添加5mm甲酸铵和0.05%氢氧化铵];流动相B(异丙醇添加5mm甲酸铵和0.05%氢氧化铵)的比例为70%/30% (0 min)、50%/50% (2 min)、20%/80% (13 min)、5%/95% (15-30 min)、95%/5% (31-35 min)、70%/30% (35-45 min)。流速为20µL/min。使用TSQ Vantage AM质谱计(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)在正离子模式下选择反应监测(SRM)来测定脂质种类。产品离子扫描(MS/MS)检测单个磷脂的特征片段。色谱峰面积用于比较定量的每个分子物种(如，38:6,40:6)在磷脂的特定类别(如，PA, PC)。使用多重反应监测对单个脂类进行特异性检测。多反应监测(MRM)的m/z跃迁为:lysoPC-22:4 = 572.4 /184.1。gydF4y2Ba

分子建模与对接研究gydF4y2Ba

全长TRPV2通道(5HI9;蛋白质数据库日本)用于分子对接研究。使用AutoDock Vina对接软件(Oleg Trott博士，The Scripps Research Institute, CA, USA)[32]完成了lysoPC-22:4与TRPV2结合的对接研究。对接实验进行了5次，产生了100个候选构象。gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

数据分析采用Welch 'sgydF4y2BatgydF4y2Ba以及。一个概率(gydF4y2BapgydF4y2Ba)值< 0.05认为有统计学意义。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

HELP暴露对健康人血浆溶血酶c和PC的影响gydF4y2Ba

我们通过SRM分析评估了来自50名健康受试者血浆中的溶血素c(图1和图2)。HELP暴露(9 kV/电极+ 9 kV/电极，30分钟)导致血浆中溶血素c -22:4水平显著高于暴露前水平(1.47倍;gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.027)。在这些条件下，HELP暴露不影响lysoPC-14:0, lysoPC-16:0, lysoPC-16:1, lysoPC-18:0, lysoPC-18:1, lysoPC-18:2, lysoPC-20:0, lysoPC-20:1, lysoPC-20:2, lysoPC-20:3, lysoPC-20:4, lysoPC-20:5, lysoPC-22:5，或lysoPC-22:6的水平(图2)。gydF4y2Ba

图1所示。gydF4y2BaHELP暴露30分钟前后健康人血浆的脂质组学分析。典型的溶血多糖-22:4在健康人血浆中达到峰值。SRM法检测LysoPC-22:4蛋白。gydF4y2Ba

图2。gydF4y2BaHELP暴露(9千伏/电极+ 9千伏/电极，30分钟)对健康人血浆溶血多糖的影响EF暴露前后血浆溶血多糖的相对比值(前后)。结果以平均值±SEM (n = 50)表示。＊gydF4y2BapgydF4y2Ba与前比较< 0.05。gydF4y2Ba

我们使用SRM分析对50名健康受试者血浆中的PC进行了评估。HELP暴露(9kv /电极+ 9kv /电极，30分钟)对PC-32:0、PC-34:0、PC-34:1、PC-34:2、PC-36:0、PC-36:1、PC-36:2、PC-36:3、PC-36:4、PC-38:4、PC-38:5、PC-40:4、PC:40:5、PC-40:6水平无影响(图3)。gydF4y2Ba

图3。gydF4y2BaHELP暴露(9 kV/电极+ 9 kV/电极，30 min)对健康人血浆PC的影响EF暴露前后血浆中PC的相对比值(前后)。结果以平均值±SEM (n = 50)表示。gydF4y2Ba

HELP暴露对健康人血浆中溶血酶a和PA的影响gydF4y2Ba

我们使用SRM分析评估了25名健康受试者血浆中的溶血素a(图4)。HELP暴露不影响溶血素a -16:0、溶血素a -18:0、溶血素a -18:1、溶血素a -18:2、溶血素a 20:4或溶血素a 22:6的水平(图4)。gydF4y2Ba

图4。gydF4y2BaHELP暴露(9千伏/电极+ 9千伏/电极，30分钟)对健康人血浆中溶血酶a的影响EF暴露前后血浆中溶血酶a的相对比值(前后)。结果以平均值±SEM (n = 25)表示。gydF4y2Ba

我们使用SRM分析评估了25名健康受试者血浆中的PA。HELP暴露(9kv /电极+ 9kv /电极，30 min)对PA-32:0、PA-32:1、PA-34:0、PA-34:1、PA-34:2、PA-34:2、PA-36:0、PA-36:1、PA-36:2、PA-36:3、PA-36:4、PA-38:3、PA-38:4、PA-38:5、PA-38:6、PA-40:4、PA-40:5、PA-40:6水平无影响(图5)。gydF4y2Ba

图5。gydF4y2BaHELP暴露(9 kV/电极+ 9 kV/电极，30分钟)对健康人血浆中PA的影响EF暴露前后血浆中PA的相对比值(前后)。结果以平均值±SEM (n = 25)表示。gydF4y2Ba

lysoPC-22:4与TRPV2对接gydF4y2Ba

LysoPC作为TRPV2[27]的激活物可诱导胃肠道转运。因此，我们假设HELP暴露后血浆溶血多糖-22:4水平的增加可能与缓解人类便秘有关。我们检查了gydF4y2Ba在网上gydF4y2Ba利用AutoDock Vina软件在TRPV2活性位点对接lysoPC-22:4。我们将输出姿势的数量设置为20，总共有100个候选构象。采用KNIME[33]软件进行聚类分析，将结果分为32个构象组。表1显示了得到的对接评分和集群ID。如表1所示，集群ID-31的构象组最大。接下来，比较了结合能低于-7.85 kcal/mol的8种簇ID-31构象。如图6a所示，观察到类似的结合位姿。在这些姿势中，簇ID-31是最佳构象(种子:101，模式1)，结合能最低-8.2 kcal/mol(表1，图6b)。LysoPC-22:4与Ser526、Gln530和Asn639形成氢键(图6c)。结果表明，lysoPC-22:4与TRPV2通道结合。gydF4y2Ba

图6。gydF4y2Ba停靠在TRPV2通道上的lysoPC-22:4构象图。(a)结合能低于-7.85 kcal/mol的簇ID-31的8种构象。(b) lysoPC-22:4的最佳构象(种子:101，模式1)，结合能最低(-8.2 kcal/mol)。(c) lysoPC-22:4在TRPV2通道中的结合方式。gydF4y2Ba

表1gydF4y2Ba．对接分数和集群IDgydF4y2Ba

口袋里gydF4y2Ba	种子gydF4y2Ba
	101gydF4y2Ba		102gydF4y2Ba		103gydF4y2Ba		103gydF4y2Ba		105gydF4y2Ba
	亲和力gydF4y2Ba 千卡每摩尔gydF4y2Ba	集群IDgydF4y2Ba	亲和力gydF4y2Ba 千卡每摩尔gydF4y2Ba	集群IDgydF4y2Ba	亲和力gydF4y2Ba 千卡每摩尔gydF4y2Ba	集群IDgydF4y2Ba	亲和力gydF4y2Ba 千卡每摩尔gydF4y2Ba	集群IDgydF4y2Ba	亲和力gydF4y2Ba 千卡每摩尔gydF4y2Ba	集群IDgydF4y2Ba
模式1gydF4y2Ba	－gydF4y2Ba8.2gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-8.0gydF4y2Ba	22gydF4y2Ba	-8.1gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	28gydF4y2Ba	-8.1gydF4y2Ba	25gydF4y2Ba
模式2gydF4y2Ba	-8.1gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-8.0gydF4y2Ba	28gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	29gydF4y2Ba	-8.0gydF4y2Ba	26gydF4y2Ba
模式3gydF4y2Ba	-8.1gydF4y2Ba	30.gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.4gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba
模式4gydF4y2Ba	-8.0gydF4y2Ba	28gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	5gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	7gydF4y2Ba	-7.4gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	27gydF4y2Ba
模式5gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	8gydF4y2Ba	-7.4gydF4y2Ba	28gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba
模式6gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	25gydF4y2Ba	-7.4gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	26gydF4y2Ba
模式7gydF4y2Ba	-7.9gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.3gydF4y2Ba	12gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba
模式8gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	1gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.3gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba
模式9gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	2gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	25gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	9gydF4y2Ba	-7.3gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	29gydF4y2Ba
模式10gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	22gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	26gydF4y2Ba	-7.3gydF4y2Ba	29gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba
模式11gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	24gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	26gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	29gydF4y2Ba	-7.3gydF4y2Ba	13gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	21gydF4y2Ba
模式12gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	23gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	10gydF4y2Ba	-7.2gydF4y2Ba	29gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	15gydF4y2Ba
模式13gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	20.gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	28gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.2gydF4y2Ba	30.gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba
模式14gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	3.gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	25gydF4y2Ba	-7.2gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.8gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba
模式15gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	20.gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	23gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	27gydF4y2Ba	-7.2gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	29gydF4y2Ba
模式16gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	25gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	11gydF4y2Ba	-7.2gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	27gydF4y2Ba
模式17gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	4gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	19gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.2gydF4y2Ba	27gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	16gydF4y2Ba
模式18gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	19gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	30.gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	26gydF4y2Ba	-7.1gydF4y2Ba	21gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	17gydF4y2Ba
模式19gydF4y2Ba	-7.7gydF4y2Ba	32gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	22gydF4y2Ba	-7.4gydF4y2Ba	28gydF4y2Ba	-7.1gydF4y2Ba	24gydF4y2Ba	-7.6gydF4y2Ba	20.gydF4y2Ba
模式20gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	31gydF4y2Ba	-7.4gydF4y2Ba	6gydF4y2Ba	-7.4gydF4y2Ba	27gydF4y2Ba	-7.0gydF4y2Ba	14gydF4y2Ba	-7.5gydF4y2Ba	18gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

在本研究中，我们发现健康人体受试者的lysoPC-22:4对急性EF暴露敏感。值得注意的是，没有lysoPA反应表明对lysoPC-22:4的反应不是通过膜脂的不良非特异性作用。EF暴露后溶血多糖c -22:4水平变化的分子机制是复杂的，可以用多种方式解释。有趣的是,ThurengydF4y2Baet al。gydF4y2Ba报道磷脂酶AgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba(中国人民解放军gydF4y2Ba_2gydF4y2BaEF[34]提高了催化水解。中国人民解放军gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba酶水解甘油磷脂的酯释放溶血磷脂和游离的不饱和脂肪酸[35]。在血浆代谢组学中，我们先前已经记录了EF暴露(9 kV/电极+ 9 kV/电极)诱导油酸、亚油酸、花生四烯酸(FA-20:4)、FA-22:4、FA-22:5和花生四烯酸增加约1.52倍、1.47倍、1.41倍、1.46倍、1.51倍gydF4y2Ba独联体gydF4y2Ba-4、7、10、13、16、19-二十二碳六烯酸(FA-22:6)分别为[18]。本研究结果表明，EF暴露导致人血浆溶血多糖c -22:4水平增加1.47倍。因此，我们有理由推测EF暴露通过激活PLA上调lysoPC-22:4gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba．EF暴露诱导的lysoPC-22:4信号通路有待进一步研究。gydF4y2Ba

本研究的另一个目的是深入了解EF疗法缓解便秘的分子机制。有趣的是,历经甲级gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba据报道，TRPV2激动剂如probenecid和溶血皂苷灌胃可促进胃肠道转运gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba通过TRPV2激活小鼠[22]。不幸的是，市场上没有lysoPC-22:4作为药理实验的纯化学试剂。因此，我们需要一段时间来研究溶血多糖-22:4在胃肠道转运中的作用gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba．越来越多的关于虚拟仿真的报道出现在文献中[18- 19,36 -37]。gydF4y2Ba在网上gydF4y2Ba分子对接研究被用来支持他们的药理结果。迄今为止，关于内源性配体对TRPV2通道影响的研究很少[38-39]。大多数发表的研究都是使用TRPV1模型进行的[40-43]。普莱斯考特gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba报道了磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP)激活TRPV1通道gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba)[44]，而Nieto-PosadasgydF4y2Baet al。gydF4y2Ba据报道，lysopa通过c末端结合位点[45]刺激TRPV1通道激活。TRPV1与TRPV2[46]有大约50%的序列相同。黄齐的gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba最近报道了大鼠TRPV2全长通道的冷冻电镜结构[38]，而ZubcevicgydF4y2Baet al。gydF4y2Ba报道了兔TRPV2[39]的原子模型。在人体TRPV2的晶体学分析中，关于TRPV2锚结重复结构域的信息有限。在本研究中，对接分析表明lysoPC-22:4具有良好的结合亲和力(-8.2 kcal/mol)。此外，它还与Ser526、Gln530和Asn639相互作用。有趣的是，之前的一项大鼠TRPV2通道与树脂类毒素(RTx)结合袋的研究报告了与Gln530[47]的氢键结合。需要进一步的研究来确定人类TRPV2中可能存在的lysoPC-22:4结合袋。从85例功能性便秘[17]患者的临床数据中，已获得大量证据证明EF治疗对健康有益。此外,张gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba报道称EF治疗40天对功能性便秘[16]患者的治愈率约为60%。另一方面，米原gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba报道了TPRV2参与一氧化氮(NO)介导的肠道放松[27]。因此，我们有理由推测EF暴露可能通过lysoPC-22:4结合TRPV2来缓解便秘。然而，lysoPC也激活冷敏感通道瞬时受体potential melastatin 8 (TRPM8)和G蛋白偶联受体119 (GPR119)[48-50]，增加了这些受体在EF暴露过程中也作为lysoPC-22:4的靶点的可能性。gydF4y2Ba

总之，急性EF暴露对健康受试者血浆溶血多糖-22:4水平有显著影响gydF4y2Ba在网上gydF4y2Ba在TRPV2通道上观察到lysoPC-22:4的分子对接。我们的发现为HELP设备诱导的健康益处背后的分子机制提供了洞察，这可能对胃肠运动也很重要。gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

Yuzo Nakagawa-Yagi, Hiroyuki Hara, Akikuni Hara受聘于白州健康科学研究所株式会社，HN受聘于秋田脂质技术株式会社，TT受聘于Affinity Science株式会社。所有其他作者都没有相互竞争的利益。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

Yuzo Nakagawa-Yagi设计并监督了这项研究，并撰写了手稿。Hiroki Nakanishi执行SRM。Tomohiko Tasaka进行了分子建模。Yuzo Nakagawa-Yagi, Hiroyuki Hara和Akikuni Hara进行了生物物理实验。所有作者都已阅读并认可最终版本的手稿。gydF4y2Ba

鸣谢gydF4y2Ba

我们感谢菊池诚博士(日本国防医学院名誉教授)的鼓励。gydF4y2Ba

参考文献gydF4y2Ba

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