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摘要

吸烟和感染人乳头状瘤病毒(HPV)是头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的重要危险因素。尽管hpv相关的鼻咽癌患者对当前治疗策略的反应往往比非hpv相关的鼻咽癌患者更好，但一些hpv相关的鼻咽癌患者出现疾病复发和远处转移，这可能对当前治疗策略产生耐药性。癌症干细胞(CSCs)被认为是这种耐药表型发展的基础。在本研究中，我们检测了hpv相关鼻咽癌患者中CSC标记基因的表达，以及STAT3和Notch通路基因的表达，我们之前发现这些基因在胶质瘤CSCs中过表达。在免疫缺陷小鼠(UTSCC-1和UTSCC-2)中建立了异种移植，这两名患者的鼻咽癌与hpv相关，但他们的烟草使用史不同。从这两种肿瘤中提取的RNA均显示SOX2、Nestin、CD133和CD44的高表达，但与UTSCC-1相比，有重度烟草使用史的UTSCC-2肿瘤显示SOX2、CD44和CD133的显著过表达。UTSCC-2显著过表达许多Notch通路基因。STAT3和pSTAT3在UTSCC-2肿瘤中的免疫化学分析也显示STAT3和pSTAT3在UTSCC-2肿瘤中有强表达。UTSCC-1的连续移植促进了肿瘤的形成，导致肺转移和STAT3和NOTCH通路基因的过表达。总之，CSCs、STAT3和NOTCH通路相关基因在hpv相关的鼻咽癌中过表达，提示这些通路可能成为这类患者治疗干预的新靶点。

关键字

癌症干细胞，头颈部鳞状细胞癌，人乳头状瘤病毒，Notch, STAT3

缩写

CSCs:癌症干细胞;头颈鳞状细胞癌:头颈部鳞状细胞癌;人乳头状瘤病毒;NSG:Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/;TCGA:癌症基因组图谱;pSTAT3:酪氨酸磷酸化的STAT3

简介

头颈鳞状细胞癌(HNSCC)是第六大常见癌症，但过去30年的治疗进展并未影响总体5年生存率[1]。吸烟史是鼻咽癌[2]发生的重要危险因素。此外，HPV-HNSCC的发病率急剧上升，已超过hpv诱发宫颈癌的发病率[3,4]。然而，尽管HPV-HNSCC患者比非hpv相关的HNSCC患者病情好转，但HPV-HNSCC患者中有很大一部分最终发展为疾病复发和转移。烟草暴露被认为可以部分解释为什么有些人乳头状瘤病毒-鼻咽癌患者预后较差。

癌症干细胞(CSCs)被认为在许多实体肿瘤的耐药和肿瘤复发中起着重要作用，包括鼻咽癌干细胞[6]。CSCs是肿瘤细胞的一个小亚群，表达许多干细胞标记物[7,8]。CSCs具有独特的自我更新能力并形成分化的子代，这导致肿瘤由异质细胞群组成[6,9]。经历上皮向间质转化的肿瘤细胞是导致转移形成的关键细胞群[10]。有趣的是，胶质母细胞瘤中CSC富集的细胞群代表了正在经历间充质转变的CSCs[11]。CSCs表现出CD44和CD133的表达升高，这是经典的干细胞标记物。有趣的是，由于STAT3转录因子[12]的构成激活，这些CSCs上调了几个Notch通路基因。STAT3通过酪氨酸磷酸化(pSTAT3)被多种细胞因子和生长因子激活，这表明STAT3将多种信号整合到共同的转录反应中[13-15]。在鼻窦鳞状细胞癌[16]中发现STAT3高度持续激活，并明显积极参与肿瘤的形成和进展[17]。Notch信号似乎在多种癌症的CSCs中起着关键作用，并控制着细胞命运的决定、生存、增殖和干细胞[18]的维持。

与未检测到HPV感染的鼻咽癌患者相比，患有HPV-鼻咽癌的患者对当前治疗方式的反应率有所提高。然而，有显著烟草使用史的hpv -鼻咽癌患者比不使用烟草的患者预后更差[3]。尽管HPV-HNSCC患者的预后有所改善，但最近的临床研究表明，转移性和复发性HPV-HNSCC对治疗的耐药性更大，因此需要多种方式来实现疾病控制。因此，确定导致耐药性的因素对这一患者群体至关重要。在本研究中，我们探索了HPV-HNSCC患者由于其肿瘤CSC群体的增加而具有更强的侵袭性表型的假设，这可能与他们的烟草使用史有关。我们从使用不同烟草的HPV-HNSCC患者的免疫缺陷小鼠中建立了两种异种移植物系，并检测了CSCs相关基因的表达，包括细胞表面标记、STAT3和Notch通路。这些发现可以为针对鼻咽癌患者的特定子集开发新的分子靶向药物提供信息。

材料和方法

病人资料

所有的研究都得到了田纳西大学健康科学机构审查委员会的批准。这两名研究患者之前患有口咽鳞状细胞癌未经治疗。HPV病因由p16免疫染色阳性推断。经知情同意后，在原发口咽肿瘤手术切除过程中获得新鲜肿瘤组织。表1显示了患者的特征，包括人口统计学、分期、病理、治疗和随访。

	UTSCC-1	UTSCC-2
病人性别	男性	男性
病人的年龄	74年	63年
肿瘤分期	T1N0M0	T1N0M0
病理	围神经的入侵:不 Lymphovascular入侵:不 手术切缘:R0切除	围神经的入侵:不 Lymphovascular入侵:不 手术切缘:R1切除
术后治疗	没有一个	没有一个
随访时间长度	8个月	6个月
随访状态	没有疾病的证据	没有疾病的证据
烟草的使用	少于10包年，戒烟40年(低风险)	25包年，戒烟1年(高危)

表1。病人的人口统计资料。

鼻咽癌鳞状细胞增殖和肿瘤干细胞(CSCs)

患者肿瘤样本在含有抗生素(青霉素、链霉素和两性霉素B (Gibco))的DMEM中广泛清洗，并用手术刀片切碎肿瘤组织。为了在细胞培养中生长，将切碎的肿瘤组织通过一个70毫米的筛子，在37℃和5% CO中培养₂DMEM中添加10%胎牛血清(Atlanta Biologics)，并添加青霉素和链霉素。为了富集CSC，细胞在添加B27、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和抗生素的神经基培养基中生长，并在包被聚d -赖氨酸和层粘连蛋白的板上生长。

基因表达分析

用TRIzol试剂(Ambion)从均匀化的肿瘤组织中分离总RNA。实时RT-PCR使用iScript One-Step RT-PCR试剂盒和SYBR Green (Bio-Rad)进行3个重复。反应参数如下:cDNA合成50°C 20 min，转录酶失活95°C 5 min, PCR循环95°C 10秒，60°C 30秒40循环[12]。基因表达相对于-肌动蛋白表达归一化。所述数据为平均值±标准差(SD)。使用GraphPad Prism 4 (GraphPad Software, Inc)进行学生t检验和方差分析。P值< 0.05(*)为差异有统计学意义。

RT-PCR所用引物如下:hACTB: 5 ' -CATGTACGTTGCTATCCAGGC -3 '(正向)和5 ' -CTCCTTAATGTCACGCACGAT -3 '(反向);hSOX2: 5 ' - GCCGAGTGGAAACTTTTGTCG -3 '(正向)和5 ' - GCAGCGTGTACTTATCCTTCTT -3 '(反向);hNestin: 5 ' - GGCGCACCTCAAGATGTCC -3 '(正向)和5 ' - CTTGGGGTCCTGAAAGCTG(反向);hCD133: 5 ' - agtcggaaactggcagatagc -3 '(正向)和5 ' - GGTAGTGTTGTACTGGGCCAAT(反向);hCD44: 5 ' -GGCACCACTGCTTATGAAGGA-3 '(正向)和5 ' -ACTAGGAGTTGCCTGGATTGT -3 '(反向);hNOTCH1: 5 ' -GAGGCGTGGCAGACTATGC-3 '(正向)和5 ' -CTTGTACTCCGTCAGCGTGA-3 '(反向);hNOTCH2: 5 ' - atcccacaaagcctagccac -3 '(正向)和5 ' -CCTTGTCCCTGAGCAACCAT-3 '(反向);hNOTCH3: 5 ' - tgtgcaaatggaggtcgtt -3 '(正向)和5 ' - CCTGAGTGACAGGGGTCCT-3 '(反向);hNOTCH4: 5 ' - cagcccagtgggtatctctg -3 '(正向)和5 ' - GTTGTGACAGGGTTGGGACT -3 '(反向);hDTX3: 5 ' -TCGTTCGTCCTGTCCAGAATG-3 '(正向)和5 ' - aagtctcgccatctatgagatt -3 '(反向);hNUMBL: 5 ' TGGTGGACGACAAAACCAAGG-3 '(正向)和5 ' - acgacagatatagagaaagcct -3 '(反向);hh: 5 ' - AGTCCCAAGGAGAAAAACCGA -3 '(正向)和5 ' - GCTGTGTTTCAGGTAGCTGAC-3 '(反向);hJAG1: 5 ' - gtccatgcagaacgtgaacg -3 '(正向)和5 ' - GCGGGACTGATACTCCTTGA-3 '(反向);hSTAT3: 5 ' - CAGCAGCTTGACACACGGTA-3 '(正向)和5 ' - GCCCAATCTTGACTCTCAATCC-3 '(反向)。

免疫荧光和共聚焦显微镜

肿瘤组织用低温恒温器进行间接免疫荧光切片。PBS洗涤后，载玻片用4%多聚甲醛在25°C固定15分钟，然后再用PBS洗涤三次。然后用5%牛血清白蛋白和1%山羊血清在PBS /Triton-X100中22℃封闭载玻片1小时。PBS冲洗载玻片3次10分钟，用抗STAT3 (BD转导实验室)和pSTAT3 (Abcam)一抗免疫染色，分别在4℃1:50稀释和1:100稀释下孵育一夜。用PBS洗涤3次10分钟，然后涂抹二抗山羊抗兔Alexa Fluor 488，在25°C下孵育90分钟。DNA用含有4 '，6-二胺基苯基吲哚二盐酸(DAPI)的Vectashield安装介质反染色。图像在蔡司LSM700激光扫描共聚焦显微镜上捕获。

小鼠肿瘤形成

动物实验是按照田纳西大学健康科学中心动物护理和使用机构委员会批准的研究方案进行的。异种移植建立于5周龄雄性Cg-Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/SzJ (NSG)小鼠(Jackson实验室)，从切碎的肿瘤组织中提取1 × 106个细胞，通过70 μ m的筛后直接从侧面注射。每周用手持式卡尺测量肿瘤，当肿瘤达到10毫米时采集。肿瘤组织在10%中性缓冲福尔马林中固定24小时，石蜡包埋，5µm厚度切片，苏木精和伊红染色。

癌症基因组图谱(TCGA)数据查询

为了检验STAT3表达与头颈癌人类癌症标本肿瘤分期之间的关系，我们查询了TCGA数据门户网站(https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/tcgaHome2.jsp)中所有具有基因表达数据的头颈癌样本，以及相关的临床数据。数据集过滤了含有STAT3表达数据和临床数据的样本，产生了521个独立患者样本的最终数据集。使用Graphpad Prism进行统计分析。P值< 0.05(*)为差异有统计学意义。

结果

鼻咽癌鳞状细胞癌异种移植瘤的生长

新鲜分离的患者肿瘤组织被切碎，然后直接注射到严重免疫缺陷、对肿瘤诱导高度敏感的NSG小鼠的侧翼。虽然两种鼻咽癌肿瘤样品都形成了肿瘤，但肿瘤生长相当缓慢。例如，UTSCC-1肿瘤生长到10mm需要279天，而UTSCC-2肿瘤则需要126天。肿瘤组织组织学分析显示，两种肿瘤样品均为浸润性癌，UTSCC-2由分化程度较低的细胞组成。

CSC标记基因在鼻咽癌肿瘤组织中的表达

为了确定肿瘤是否表达CSCs的证据，我们测量了几种经典干细胞标记物的水平。总之，从UTSCC-1和UTSCC-2两个异种移植瘤中制备总RNA，用qPCR法检测Sox2、Nestin、CD133和CD44的表达。如图1所示，这些CSC标记基因在两种鼻咽癌中表达差异显著。与UTSCC-1相比，UTSCC-2肿瘤组织中干细胞标记物SOX2、CD133和CD44的基因表达量显著升高(p=0.001、p=0.033和p=0.047)。虽然UTSCC-2肿瘤组织中Nestin基因表达略有增加，但差异无统计学意义(p=0.074)。尽管如此，这些结果表明几个CSC标记基因在UTSCC-2中表达水平显著升高。

图1所示。CSC标记基因在鼻咽癌肿瘤组织中的表达。从UTSCC-1和UTSCC-2肿瘤组织中制备总RNA，用qPCR法检测基因表达，归一化至肌动蛋白表达

鼻咽癌肿瘤组织中Notch通路基因的表达

由于Notch信号通路的基因在来自不同肿瘤类型的CSCs中富集，我们确定了Notch信号通路的各种基因在两种不同的鼻咽癌肿瘤异种移植瘤中的表达。如图2所示，UTSCC-2肿瘤组织中NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4的表达相对于UTSCC-1肿瘤组织有统计学意义(p=0.027、p=0.018、p=0.004、p=0.0005)。此外，UTSCC-2肿瘤中其他Notch通路基因JAG1、DTX3和NUMBL相对于UTSCC-1肿瘤组织显著上调(p=0.008、p=0.0015和p=0.018)。然而，在Notch通路中起重要作用的HES5在两种不同的鼻咽癌肿瘤中表达相似。

图2。鼻咽癌肿瘤组织中Notch通路基因的表达。从UTSCC-1和UTSCC-2肿瘤组织中制备总RNA，用qPCR法检测基因表达，归一化至肌动蛋白表达

STAT3基因在鼻咽癌肿瘤组织中的表达

由于在之前的研究中，我们发现STAT3在胶质瘤CSCs中被酪氨酸磷酸化构成激活，并且STAT3基因表达上调[11]，因此我们检测了STAT3在鼻窦鳞癌异种移植瘤中的表达。如图3A所示，UTSCC-2肿瘤组织中STAT3的表达相对于UTSCC-1有统计学意义(p=0.003)。对鼻咽癌肿瘤组织进行STAT3和pSTAT3免疫染色。如图3B所示，虽然在UTSCC-1和UTSCC-2肿瘤组织中都能检测到STAT3和pSTAT3，但在UTSCC-2组织中，STAT3和pSTAT3的免疫染色明显更强烈，这与我们对STAT3基因表达的qPCR结果一致。最重要的是，在UTSCC-2肿瘤组织中，pSTAT3和STAT3在更大程度上选择性地共定位于细胞核中。值得注意的是，pSTAT3和STAT3共定位在鼻咽癌肿瘤组织的特定区域很明显，特别是在肿瘤高度血管化的区域附近。

图3。STAT3基因在鼻咽癌肿瘤组织中的表达。(一)从UTSCC-1和UTSCC-2肿瘤组织中制备总RNA，用qPCR法检测STAT3基因表达，归一化至actin表达。(B)UTSCC-1和UTSCC-2肿瘤组织中STAT3和pSTAT3的免疫组化。

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然后我们查询公开的TCGA数据库中STAT3基因在鼻咽癌中的表达。数据库中的标本(521例)包括所有阶段的疾病，从只有原发部位的低阶段肿瘤到更晚期的淋巴结累及的高阶段肿瘤。如图4所示，在局限性和侵袭性最低的鼻咽癌(0期和I期)中，STAT3表达相对较低，而在侵袭性较强的鼻咽癌(II期、III期和IV期)中，STAT3表达相对较高。这些结果进一步证明了STAT3可能在鼻咽癌的肿瘤发生和侵袭性中发挥重要作用。

图4。TCGA数据库。TCGA数据库中根据分期(0期局限于上皮细胞，4期有远处转移)的头颈部癌症的STAT3表达情况

连续移植utscc1肿瘤组织的基因表达分析。

由于我们发现UTSCC-1肿瘤组织在体内生长相对缓慢，我们研究了连续移植是否会促进肿瘤生长。UTSCC-1肿瘤组织最初移植到NSG小鼠侧腹大约需要279天才能达到1 cm的直径，而连续移植的肿瘤只需要49天就可以达到这个尺寸。最有趣的是，在连续移植肿瘤的小鼠中观察到肺转移。尸检时，我们取出肿瘤组织，制备RNA，用qPCR进行基因表达分析。如图5所示，干细胞标记物基因表达分析显示，SOX2在系列移植瘤组织中表达轻微下调，而在肺转移组织中表达明显下调。相反，CD44和Nestin在肺转移组织中显著上调。CD133在连续移植肿瘤组织中表达明显上调，但在肺转移组织中无明显上调。

图5。连续移植UTSCC-1肿瘤组织的基因表达分析。从原发肿瘤移植、连续移植肿瘤和肺转移组织中制备总RNA，用qPCR检测基因表达，归一化至肌动蛋白表达

此外，STAT3在连续移植的肿瘤组织中相对于原发肿瘤的表达有统计学意义的增加(图6)。此外，肺转移灶中STAT3的表达较原发肿瘤有统计学意义的增加，在连续移植的翼侧肿瘤中也有统计学意义的增加。

图6。连续移植UTSCC-1肿瘤组织的基因表达分析。从原发肿瘤移植、连续移植肿瘤和肺转移组织中制备总RNA。用qPCR法检测STAT3基因的表达，归一化为actin的表达

然后我们研究了Notch通路基因在这些肿瘤组织中的表达情况(图7)。NOTCH1、NOTCH3以及Notch通路下游基因JAG1、NUMBL、HES5和DTX3在肺转移组织中过表达，与在原发和连续移植肿瘤组织中的表达相比。NOTCH4在连续移植的肿瘤组织中显著过表达，而在肺转移灶中无明显过表达。然而，Notch表达和该通路下游基因的改变具有高度选择性，因为NOTCH2在原发肿瘤组织和连续移植肿瘤组织中的表达没有差异。

图7。连续移植UTSCC-1肿瘤组织的基因表达分析。从原发肿瘤移植、连续移植肿瘤和肺转移组织中制备总RNA。用qPCR法检测Notch通路基因表达，归一化为肌动蛋白表达。

讨论

鼻咽癌的生存率几十年来一直相对停滞不前，重要的危险因素是吸烟、饮酒和HPV感染[1]。这些危险因素的重叠被认为导致了在鼻咽癌中观察到的复杂分子改变。在当前的个性化治疗时代，根据肿瘤的分子变化选择治疗具有很好的作用，如肺癌[20]，但在鼻鼻癌[21]中仍使用部位和分期来规划治疗。本研究的目的是确定鼻咽癌中改变的分子途径，以最终制定治疗方案并克服治疗耐药性。我们采用在免疫缺陷裸鼠中建立鼻窦鳞状细胞癌患者源性xenoline的方法，因为我们发现鼻窦鳞状细胞癌肿瘤组织很难在组织培养中生长，这与194个临床样本中只有3个可以在体外进行超过15个传代[22]的结果一致。此外，在免疫缺陷小鼠中生长鼻窦鳞状细胞癌肿瘤组织的成功率相对较高，据报道为26% - 76%[23]。

我们研究的一个重要发现是，几个CSCs标记物，如SOX2、CD44和CD133，在研究的两个鼻咽癌肿瘤中的一个中过表达，从组织学分析来看，这似乎是一种低分化的癌。与cd44阴性细胞[24]相比，先前发现cd44阳性的鼻窦鳞癌细胞在免疫缺陷小鼠模型中具有致瘤潜力。此外，研究发现，与cd133阴性的喉癌细胞[25]相比，cd133阳性的喉癌细胞在免疫缺陷小鼠中具有更高的致瘤潜力。在最近的研究中，SOX2被确定为鼻咽癌CSC标志物，用丙戊酸处理SOX2表达可以有效抑制肿瘤生长并诱导分化[26]。我们发现CSC标记基因在hpv -鼻咽癌中表达增强，这清楚地证明了CSCs在鼻咽癌发生过程中发挥重要作用的概念。此外，虽然样本数较少，但UTSCC-2患者有较高的吸烟暴露风险，且CSC标记基因(CD44、CD133和SOX2)表达明显增加，提示吸烟可能在CSC富集中发挥致癌作用。我们之前通过在完全的神经基础介质中生长在层压蛋白包被板上来富集胶质瘤CSCs[12,11]。在本研究中，我们发现在这些条件下UTSCC-2肿瘤组织容易形成球形细胞集落，但UTSCC-1肿瘤组织或UTSCC-2肿瘤组织在含血清的DMEM中生长时，细胞集落不会形成，而DMEM促进了细胞分化。这些结果进一步证明了UTSCC-2肿瘤与UTSCC-1肿瘤相比，CSC特性的增强。此外，UTSCC-1的连续移植导致Nestin和CD133的表达显著上调，为CSC标记基因在鼻鼻癌转移和肿瘤进展中的作用提供了进一步的证据。

我们之前已经证明了STAT3在胶质瘤CSCs中被组成性激活，这导致Notch通路基因[12]的表达增强。我们研究的另一个重要发现是，与UTSCC-1相比，STAT3基因在更像csc的UTSCC-2肿瘤中表达更高。免疫化学也证实了STAT3表达的增加，以及激活形式的STAT3。STAT3在许多癌症中都是组成性激活的，包括鼻窦鳞癌，因此在鼻窦鳞癌[27]的临床试验中一直是靶向的。此外，在一项使用STAT3诱饵寡核苷酸的鼻鳞癌0期临床试验中，诱饵治疗[28]后，肿瘤组织中的STAT3降低。先前的分析也证实了鼻咽癌中激活的STAT3 (pSTAT3)和CSCs之间的联系。例如，药理STAT3抑制剂在体外根除了鼻咽癌细胞系中的CSC种群，以及在体内形成肿瘤[29]。在本研究中，我们发现UTSCC-1肿瘤的连续移植不仅促进了肿瘤生长，导致肺转移的形成，而且在统计学上显著增加了STAT3的表达，这进一步证明了STAT3在HNSCC肿瘤发生和转移中的重要作用。此外，通过TCGA数据库对相当多的鼻咽癌鳞状细胞癌样本进行分析，我们发现在高分期肿瘤中STAT3的表达有统计学意义的增加。综上所述，这些发现强烈暗示了STAT3在鼻咽癌肿瘤进展中的关键作用。

与正常干细胞类似，CSCs具有自我更新和分化成多种细胞类型的能力，可能介导治疗耐药，导致复发或转移。因此，Wnt、Notch和Hedgehog等关键信号通路在CSCs和正常干细胞[30]中发挥重要作用就不足为奇了。本研究的另一个重要发现是Notch通路基因在UTSCC-2肿瘤组织中过表达，提示该通路在HPV-HNSCC中是一个潜在的药物靶点。在鼻窦鳞状细胞癌肿瘤与相邻正常组织的比较研究中，肿瘤组织[31]中JAG1/JAG2、NOTCH1/3和HES5的拷贝数明显增加。有趣的是，我们发现连续移植的UTSCC-1组织在肺转移组织中多个Notch通路基因的表达显著增加，提示其在鼻咽癌转移中的作用。

与鼻咽癌相关的HPV感染正在成为一个主要问题，因为它继续上升。特别需要了解这种疾病的分子生物学。在本研究中，我们发现CSCs、STAT3和Notch通路似乎在鼻咽癌的发生和转移中起着重要作用。需要进一步的研究来确定烟草使用与HPV-HNSCC的csc样特性、STAT3和Notch通路基因的表达之间的确切关系。通过更好地理解导致致癌的致病因素和随后的分子通路改变之间的复杂相互作用，这些发现为探索头颈鳞状细胞癌研究开辟了新的途径，这将允许识别新的药物靶点。

作者的贡献

Vijay G. Linga, Jessica Moskovitz, Debolina Ganguly, Michelle Sims, Louisa Balasz, Sandeep Samant和Lawrence M. Pfeffer构思和设计了这些实验;Vijay G. Linga, Debolina Ganguly, Michelle Sims, Andrew Dudas, Lindsey Cobb, Chuan He Yang和Louisa Balasz进行了实验;Vijay G. Linga, Jessica Moskovitz, Debolina Ganguly, Michelle Sims, Chuan He Yang, Louisa Balasz和Lawrence M. Pfeffer分析了数据;Jessica Moskovitz, Debolina Ganguly, Michelle Sims, Chuan He Yang, Louisa Balasz, Sandeep Samant和Lawrence M. Pfeffer贡献了试剂/材料/分析工具;Vijay G. Linga, Jessica Moskovitz, Debolina Ganguly, Sandeep Samant和Lawrence M. Pfeffer撰写了这篇论文。

相互竞争的利益

作者声明他们没有竞争利益。

确认

这项工作得到了西部癌症中心拨款和田纳西大学健康科学中心Muirhead Chair捐赠基金的支持。

参考文献

1. Bhaijee F, Pepper DJ, Pitman KT, Bell D(2012)头颈部鳞状细胞癌中的癌症干细胞:当前知识和未来应用综述。头颈34: 894 - 899。Crossref］
2. Suh Y, Amelio I, Guerrero Urbano T, Tavassoli M(2014)癌症的临床进展:头颈癌的分子肿瘤学。细胞死亡说5: e1018。［Crossref］
3. Ang KK, Harris J, Wheeler R, Weber R, Rosenthal DI，等(2010)人乳头瘤病毒与口咽癌患者生存。N英语J医学363:巢族。［Crossref］
4. Kostareli E, Holzinger D, Hess J(2012)转译头颈部肿瘤的新概念:hpv相关口咽鳞状细胞癌的教训。前肿瘤防治杂志2: 36。Crossref］
5. Chaturvedi AK, Engels EA, Pfeiffer RM, Hernandez BY, Xiao W，等(2011)美国人乳头瘤病毒与口咽癌发病率上升。中华肿瘤防治杂志29日:4294 - 4301。［Crossref］
6. Sayed SI, Dwivedi RC, Katna R, Garg A, Pathak KA，等。(2011)了解癌症干细胞(CSC)生物学在头颈部鳞状细胞癌中的意义。口腔肿瘤防治杂志47: 237 - 243。Crossref］
7. 张丽娟，张丽娟，张丽娟，等。(2010)头颈鳞状细胞癌中肿瘤干细胞的转移潜力。耳鼻喉弓头颈外科136: 1260 - 1266。［Crossref］
8. chin SB, Darr OA, Owen JH, Bellile E, McHugh JB，等(2015)肿瘤干细胞:头颈部鳞状细胞癌发生和转移的介质。头颈37: 317 - 326。［Crossref］
9. Shah A, Patel S, Pathak J, Swain N, Kumar S(2014)头颈部鳞状细胞癌中肿瘤干细胞概念的发展。科学世界杂志2014: 842491。［Crossref］
10. Yadav A, Kumar B, Datta J, Teknos TN, Kumar P (2011) IL-6通过JAK-STAT3-SNAIL信号通路诱导上皮-间质转化促进头颈部肿瘤转移。摩尔癌症Res9:1658 - 1667。［Crossref］
11. Garner JM, Ellison DW, Finkelstein D, Ganguly D, Du Z, et al.(2015)患者来源的胶质母细胞瘤异种啉的分子异质性受不同癌症干细胞群的调节。《公共科学图书馆•综合》10: e0125838。［Crossref］
12. Garner JM, Fan M, Yang CH, Du Z, Sims M等(2013)胶质母细胞瘤肿瘤干细胞中信号转导器和转录激活因子3 (STAT3)和核因子kappaB信号的本构激活调节Notch通路。J杂志切288: 26167 - 26176。［Crossref］
13. 杨春春，史伟，Basu L, Murti A, Constantinescu SN，等(1996)STAT3与人I型干扰素受体IFNAR-1链的直接联系。J临床生物化学271: 8057 - 8061。Crossref］
14. Akira S, Nishio Y, Inoue M, Wang XJ, Wei S，等(1994)gp130介导的信号通路中受ifn刺激的基因因子3p91相关转录因子APRF的分子克隆。细胞77: 63 - 71。［Crossref］
15. Zhong Z, Wen Z, Darnell JE Jr (1994) Stat3:在表皮生长因子和白细胞介素-6的反应中酪氨酸磷酸化激活的Stat3家族成员。科学264: 95 - 98。［Crossref］
16. Grandis JR, Drenning SD, Zeng Q, Watkins SC, Melhem MF，等(2000)体内Stat3信号的本构激活可阻断鳞状细胞癌发生过程中的凋亡。美国国家科学研究院97: 4227 - 4232。［Crossref］
17. Poehlmann TG, Fitzgerald JS, Meissner A, Wengenmayer T, Schleussner E，等(2005)滋养层侵袭:通过LIF调节，通过Stat3信号。胎盘26增刊S37-41。［Crossref］
18. Lino MM, Merlo A, Boulay JL(2010)胶质母细胞瘤中的Notch信号:发育药物靶点?BMC医学8: 72。［Crossref］
19. Deeken JF, Newkirk K, Harter KW, Marshall MB, Banovac F等(2015)多模式治疗对转移性或复发性hpv阳性头颈部鳞状细胞癌患者总生存期的影响。头颈37: 630 - 635。［Crossref］
20. Cagle PT, Raparia K, Portier BP3(2016)肺癌个体化治疗中的新兴生物标志物。Adv Exp Med Biol890:技能。［Crossref］
21. Mes SW, Leemans CR, Brakenhoff RH(2016)分子诊断在头颈癌个性化治疗中的应用:技术现状。专家Rev Mol诊断16: 205 - 221。Crossref］
22. Krause CJ, Carey TE, Ott RW, Hurbis C, McClatchey KD等(1981)人鳞状细胞癌。新的永久性细胞系的建立和鉴定。拱Otolaryngol107: 703 - 710。［Crossref］
23. Baker SR(1985)头颈部鳞状细胞癌体内模型。喉镜95: 43-56。［Crossref］
24. Prince ME, Sivanandan R, Kaczorowski A, Wolf GT, Kaplan MJ，等(2007)头颈部鳞状细胞癌中具有癌症干细胞特性的细胞亚群的鉴定。美国国家科学研究院104: 973 - 978。［Crossref］
25. 魏小东，周亮，程亮，田健，蒋建军，等(2009)CD133作为Hep-2细胞系肿瘤干细胞标志物的体内研究。头颈31日:94 - 101。［Crossref］
26. Lee SH, Nam HJ, Kang HJ, Samuels TL, Johnston N，等(2015)丙戊酸抑制头颈癌干细胞的自我更新和增殖。肿瘤防治杂志代表34: 2065 - 2071。Crossref］
27. 宋吉，Grandis JR(2000)头颈癌的STAT信号通路。致癌基因19日:2489 - 2495。［Crossref］
28. Sen M, Thomas SM, Kim S, Yeh JI, Ferris RL，等(2012)头颈部肿瘤中STAT3诱饵寡核苷酸的首次人体试验:对癌症治疗的意义。癌症越是加大2: 694 - 705。［Crossref］
29. 卜丽丽，，赵志林，刘建峰，马绍荣等(2015)STAT3阻断剂通过根除头颈stemloid癌细胞增强常规化疗药物的疗效。Oncotarget6: 41944 - 41958。［Crossref］
30. abtov D, Mustapova Z, Saliev T, Bulanin D, Batyrbekov K等。(2015)癌症干细胞信号通路的新型小分子抑制剂。干细胞牧师11: 909 - 918。［Crossref］
31. 孙W, Gaykalova DA, Ochs MF, Mambo E, Arnaoutakis D，等(2014)头颈癌中NOTCH通路的激活。癌症Res74: 1091 - 1104。［Crossref］