金泽大学附属金泽大学医院血液肿瘤科，日本金泽，920-8641
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金泽大学附属金泽大学医院血液肿瘤科，日本金泽，920-8641
爱知医科大学内科血液科，日本爱知长乐特医学院
DOI: 10.15761 / IMM.1000177
Melinjo种子(MSE)是一种原产于东南亚的可食用水果，其乙醇提取物富含白藜芦醇二聚体(木质素C)和其他二苯乙烯。在临床前研究中，MES显示出抗氧化、抗炎和其他促进健康的活性。本研究评估了5名健康志愿者在基线和口服MSE 28天后的细胞和分子免疫反应。与相应的基线水平相比，MES的施用导致血浆抗氧化活性显著增加，血浆中蛋白质羰基含量降低。在整个研究过程中，B淋巴细胞和T淋巴细胞的循环数量基本保持不变，但MES消耗与循环NK细胞和调节性T细胞(CD3+、CD4+、CD25、CD127)比例的增加有关l噢/否定）.此外，mes处理的外周血单核细胞更有效地生成Treg细胞在体外与未治疗的对照组相比。这些发现表明，MES可调节健康人血浆中的氧化应激参数，并对免疫细胞具有生物学效应。
麻仁提取物，白藜芦醇二聚体，木质素C, T淋巴细胞，外周血单核细胞，氧化应激
用乙醇提取的玉米种子(Gnetum gnemon(L.)是一种原产于东南亚的多年生乔木，最近发现含有几种二苯乙烯类化合物，包括反式白藜芦醇(白藜芦醇单体)、木质素C(白藜芦醇二聚体)、木质素L、皂苷a、皂苷C和皂苷d。在一份有影响的报告中，这些melinjo衍生物被称为“melinjo提取物”(MES)，据报道具有清除自由基的活性，以及对食品污染微生物和肠杆菌的抗菌作用。在随后的研究中，MES在小鼠肿瘤血管生成模型[2]中显示出强烈的抑制作用，并调节小鼠培养的[3]Peyer's斑块细胞的细胞因子产生。由于melinjo的叶子、果实和种子经常被作为印度尼西亚菜肴的一部分食用，因此预计MES对人类应该是安全的。与这一观点一致的是，健康个体对高剂量MSE粉末(每天5000毫克)的耐受性良好。此外，在一项针对非肥胖日本男性的随机对照研究中，Konno及其同事报告说，服用MES(每天750毫克，持续8周)是安全的，并且与血清尿酸水平的显著降低以及血浆高密度脂蛋白[5]水平的增加有关。此外，最近的一项毒理学研究报告，暴露于极高浓度(1,000 mg/kg/天)的MES[6]的大鼠没有毒性迹象。
由于MES含有白藜芦醇单体和白藜芦醇二聚体，并且在一些临床前研究中，这些药物已被报道具有几种促进健康的特性，包括抗衰老作用[7,8]，癌症化学预防潜力[2,8,9]和免疫调节作用[3,10]。我们利用循环免疫细胞的可测量变化以及血浆和尿液样本中氧化应激参数的调节作为生物标志物，研究了健康志愿者反复服用MES的潜在健康促进作用。我们的数据显示，MES诱导循环免疫细胞的生物学效应，并显示出相当大的抗氧化活性在活的有机体内。
5名健康志愿者(男3名，女2名;34-46岁，中位42岁;50-76公斤，中位数63公斤;160-184厘米，中位数167厘米;体重指数[BMI]， 19-28 kg/m2，中位数21公斤/米2)被纳入这项1期试验(UMIN-CTR #UMIN000007690)，该试验经金泽大学医院机构审查委员会批准，并根据《赫尔辛基宣言》进行。所有受试者在入组前均提供书面知情同意书。纳入标准包括:无任何疾病的主观症状，肝肾功能正常，入组前一个月无植物化学补充剂或维生素摄入史，研究过程中不愿摄入含白藜芦醇的食物和饮料。排除标准为慢性药物和疾病、5年内浸润性癌症史、1年内非浸润性癌症史、1年内吸烟史。
给入组受试者服用含有MES的片剂(LOT# 0801K)(细田SHC，福井，日本)。受试者被指示连续28天每天早上服用20片MES片，并根据美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准(CTCAE) 4.0[11]版本每周评估依从性和不良事件。每片含有38.5%的MES粉、49.5%的环糊精、10%的多糖(增稠剂)和2%的蔗糖。该粉末中含有二苯乙烯类化合物:皂苷A(1.14%)、白藜芦醇单体或反式白藜芦醇(0.09%)、皂苷D(1.54%)和木犀草素C(2.57%)。该试验的主要目的是评估MES的安全性，并研究MES的抗氧化作用在活的有机体内。次要目的是通过对特定淋巴细胞亚群表面受体的表达来评估MES对循环淋巴细胞的影响。
在给药前(第0天)和开始服用MES后的14、28、42和56天采集血样。取7 ml肝素化采血管。从每个样品中，取2 ml血液在冷冻(10分钟，1300 × g)下离心。为了防止MES二苯及其代谢物的光损伤，血浆被转移到LightSafe 1.5 ml离心管(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)中，并在- 70°C保存直至使用。用梯度离心从剩余的5ml血液中分离外周血单个核细胞(PBMCs)。分离的pbmc立即通过流式细胞术分析其细胞表面标记物的表达或冷冻保存以供进一步使用。
如前所述，使用Acquity UPLC系统(Waters Corp.， Milford, MA USA)对MES二苯乙烯进行高效液相色谱(HPLC)分析[4,12]。代谢物采用反相色谱柱(Acquity UPLC BEH C18, 2.1 × 100 mm, 1.7 μm)，在40°C下分离。在20°C的温度下使用自动进样器进行注射。流动相由水和乙腈组成，以0.3 ml/min的流速泵送。串联质谱(MS/MS)是在Q - Premier XE三重四极杆质谱仪(Waters)上进行的，该质谱仪配备了正、负模式的涡轮电喷雾离子源(ESI)和与质谱仪高真空区相连的加热幕气界面。质量检测和定量分析在多反应监测(MRM)模式下完成，光谱分析使用MassLynx软件程序(Waters)。的量化反式−白藜芦醇、木犀草素C、木犀草素C单脲、木犀草苷A、木犀草苷D采用血浆基质标准曲线测定。检测限(LOD)和定量限(QOD)确定为分析物浓度，信噪比(S/N)分别为3和10。独联体用人工紫外光照射0.5 h的木质素C溶液对-木质素C进行确证。
使用抗氧化测定试剂盒(Cayman, Ann Arbor, MI, USA)，用肌红蛋白测定血浆的总抗氧化能力。该分析依赖于给定样品的抗氧化剂抑制ABTS (2,2 ' -azinobis[3-乙基苯并噻唑啉6-磺酸盐])氧化为ABTS的能力+由生产者。ABTS的数量+在405 nm处进行比色监测。血浆抗氧化能力预防ABTS+与Trolox的形成进行比较，并量化为毫摩尔Trolox当量。所有测量均在同一天进行，使用Multiskan微孔板读取仪(Thermo Labsystems, Beverly, MA, USA)。通过将实验组的值除以对照组的值(基线或W0)来计算折叠变化。为了将小于1.0的表达式比率值转换为折叠变化，使用公式-1/ratio。例如-(1/0.259)= -3.861。
血浆蛋白中的羰基含量使用比色蛋白羰基测定试剂盒，按照制造商的方案(开曼)进行定量。该分析利用了在2,4-二硝基苯肼(DNPH)和样品中发现的蛋白质羰基之间的反应产生的腙。通过与牛血清白蛋白标准曲线在280 nm处的吸光度比较，定量测定蛋白腙的含量。
新分离的pbmc用T细胞、B细胞和NK淋巴细胞的细胞表面标记物特异性抗体染色，包括抗cd3、CD16、抗cd19、CD56 (BD Biosciences, San Jose, CA, USA)、抗nkg2d、抗nkp30、抗nkp46、抗dnam1 (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)、抗nkg2a和抗γδ TCR (BD Bioscience)。细胞也用近红外僵尸染料(BioLegend, San Diego, CA, USA)染色，以排除分析中的死亡细胞。用BD Canto仪器(BD Biosciences)分析染色细胞。用抗cd3、抗cd4、抗cd25、抗cd127和NIR僵尸染料染色冷冻保存的PBMCs，评估循环调节性T细胞(cTreg)的比例。流式细胞术数据使用FlowJo软件包(Tree Star)进行分析，数据以阳性细胞百分比或平均荧光强度表示。
参与者的尿液样本在基线和MES给药后2周和4周收集在无菌管中。样品冷藏后运往日本衰老控制研究所(JaICA)， Nikken Sail Co Ltd (Fukuroi, Shizuoka, Japan)，在那里通过肌酐浓度校正法测定尿中8-OHdG水平。
将健康个体的pbmc接种到24孔板(1X10)上6细胞/ml)，在RPMI培养基中添加20% FBS和100 IU/ml重组IL-2、10 ng/ml重组IL-15 (PeproTech, Rocky Hill, NJ, USA)和抗cd3 /CD28磁珠(Invitrogen, Waltham, MA, USA)，在存在或不存在几种浓度的MES(溶解于DMSO)、纯木犀素C(细达)、纯白藜芦醇(Sigma-Aldrich)或载体(0.5% DMSO)的情况下培养4天。然后用荧光标记的抗cd3、抗cd25、抗cd4和抗cd127抗体对细胞进行染色，并用流式细胞术进行分析。
将3名健康个体的pbmc接种于24孔板(1 × 10)6细胞/ml)，在添加20% FBS和100 IU/ml重组IL-2的RPMI培养基中培养48小时，存在或不存在几种浓度的MES。在一些实验中，pbmc用2.5µg/ml的植物血凝素A (phytohemagglutinin A, PHA)培养24小时，然后在添加20% FBS和重组IL-2的RPMI培养基中，在存在或不存在几种浓度的MES的情况下培养48小时。收集培养上清，使用特异性ELISA试剂盒评估干扰素γ (IFN-γ)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和颗粒酶B (GZMB)的水平，遵循制造商的建议(Mabtech, Nacka Strand，瑞典)。为了测量血浆中GZMB的水平，将样品用现成的ELISA稀释液(目录#3652-D2, Mabtech, Cincinnati, OH, USA)稀释，然后使用GZMB ELISA试剂盒进行评估。
所有数据均以平均值±标准差报告。当两组之间进行比较时，使用Student 's来确定统计显著性t以及。多重比较的统计显著性采用单因素方差分析。数据被认为是有统计学意义的P值≤0.05。
本研究的5名受试者均连续28天服用MES片，相当于每天服用262 mg木质素C和5.8 mg反式白藜芦醇。在志愿者参与者中，一名受试者经历了1级腹泻，没有后遗症或干预。没有其他不良事件的报道。由于日本健康志愿者单次和重复给药MES的综合药代动力学研究在其他地方已有报道[4,5]，在本研究中，我们没有重复测量MES二苯胺及其代谢物，而是在基线和给药后两周测量反式白藜芦醇、木本素C或其代谢物的浓度。使用MES后两周采集的血浆样品进行HPLC分析，发现反式白藜芦醇(0.0612±0.0535µg/ml)、木犀草素C(0.344±0.205µg/ml)和木犀草素C单氟化物(0.09664±0.0561µg/ml)存在。相反，在基线时收集的任何血浆样本中均未检测到MES二苯乙烯或其代谢物(表1)。
捐赠者# |
反式白藜芦醇(µg / ml) 第0周第二周 |
Gnetin-C(µg / ml) 第0周第二周 |
味精c(µg/ml)(单氯胺酮) 第0周第二周 |
1 |
0 0.0254 |
0 0.267 |
0 0.0784 |
2 |
0 0.0879 |
0 0.149 |
0 0.0419 |
3. |
0 0.143 |
0 0.467 |
0 0.153 |
4 |
0 0.172 |
0 0.197 |
0 0.0496 |
5 |
0 0.0323 |
0 0.640 |
0 0.159 |
平均 |
0.0621±0.0535 |
0.344±0.205 |
0.0964±0.05 |
表1。摄取MES前后两周健康人血浆中的芪衍生物
使用一种测定血浆总抗氧化活性的方法，包括任何内源性的抗氧化活性和来自MES消耗的抗氧化活性，我们测量了基线和消耗后2周和4周的血浆抗氧化能力。与其报道的抗氧化和清除活性一致，摄入MES与血浆样品中整体抗氧化能力的显着增加相关。在摄入MES后的第二周，血浆抗氧化能力比基线时高出近2倍，到第4周时达到2.5倍，并在摄入MES后8周时恢复到基线水平(图1A)。此外，与基线水平相比，在服用MES后2周检测到血浆样品中羰基蛋白含量显著降低(p=0.001)。在研究的第8周，羰基蛋白含量恢复到基线水平(图1B)。
图1:MSE对血浆氧化应激参数的影响。(A)基线和服用MSE后2周和4周的血浆抗氧化能力。(B)基线和指定时间(周)血浆羰基蛋白水平。报告的A和B的折叠变化以在指定时间点测量的五个人的值的平均值±SD表示。(C) 5个人在基线和研究第二周的尿8-OHdG水平。
由于内源性DNA损伤在诱变、致癌和衰老中起着重要作用，而MES具有很强的抗氧化潜力，因此我们接下来测试了MES对8-OHdG水平的影响，8-OHdG是内源性DNA损伤[13]的广泛使用的生物标志物。与基线时收集的尿液样本中的8-OHdG水平相比，在摄入MES 2周后收集的样本中，5名参与受试者中有4名的尿液8-OHdG水平下降(图1C)。
流式细胞术分析从基线和每两周收集的血液样本中分离的pbmc显示，在MES给药后第四周，循环CD56的百分比+NKG2D+NK细胞明显高于基线(图2A)。CD3的百分比+T细胞，CD19+B细胞和γδ+在研究过程中，T细胞基本保持不变(图2B)。
图2:MSE二苯乙烯衍生物对循环免疫细胞的影响。(A)在基线(W0)或指定时间(周)采集的五个人血液样本中的pbmc和CD3百分比−、CD56+NKG2D+NK细胞(A)， CD3+T细胞(B)， CD19+B细胞(C)和γδ+流式细胞术检测T细胞(D)。数字表示平均值±SD。在图A中，左面板显示了5个人的汇总数据，右面板显示了1个人的代表性结果。
对NK细胞上选定的激活剂和抑制标记物的细胞表面分析表明，与基线水平相比，循环NK细胞上激活剂受体NKG2D表达的适度但显著的增加与MES摄入有关(图3A)。相反，其他NK表面受体，包括NKp46(图3B)、CD16(图3C)、DNAM-1(图3D)和NKG2A(图3E)基本保持不变。
图3:摄取MES前后NK细胞表面各种受体蛋白的表达。用流式细胞术分析在基线或指定时间收集的5名健康个体的PBMC。为活细胞、单线态细胞、CD3细胞设置通道−、CD56+淋巴细胞,NKG2D+(一)NKp46+(B), CD16+(C), DNAM-1+(D), NKG2A+(E).数据代表平均受体MFI±SD。
在先前的一项研究中，作为MES成分之一的白藜芦醇被报道可以促进小鼠[14]循环调节性T细胞的增殖。为了确定MES是否会调节人体Treg细胞，我们在基线和两次MES给药后的不同时间点测定了循环Treg细胞的比例。循环Treg细胞的特征是CD4和CD25的表达以及CD127[15]的低表达或缺乏表达。在服用MES后的第二周，所有五个人的循环Treg百分比都增加了，尽管与基线时的Treg数量相比，这并没有显著增加;然而，在给药后第4周，循环Treg细胞的百分比明显高于基线。到第6周，Treg细胞百分比恢复到基线水平(图4A)。
图4:通过流式细胞术分析MSE二苯乙烯衍生物对基线(W0)或指定时间(周)采集的五个人血液样本中循环Treg细胞(A) PBMCs增殖的影响。图中为Treg细胞平均值±SD。(B)从3个健康个体获得的PBMCs在添加IL-15和抗CD3/CD28微球以及指定浓度的MES的完整培养基中培养4天。收集细胞，流式细胞术检测循环Treg细胞的百分比。左面板显示了5个人的汇总数据，右面板显示了一个人的代表性结果。(C)在指定浓度的MES、纯木质素C或纯反式白藜芦醇中培养3名健康人的pbmc 4天。流式细胞术检测循环Treg细胞百分比。给出了三个独立实验的一个代表性结果。
为了进一步了解MES对免疫细胞的生物学效应，我们首先测试了在体外在不同浓度的MES存在下，抗cd3 /CD28和IL-2/IL-15诱导的Treg细胞增殖刺激了来自健康个体的PBMCs。在这些培养条件下，Treg细胞(CD3+CD25+, CD4+, CD127neg /低)在没有MES的培养基中从4%增加到32%，在含有1µg/ml MES的培养基中增加到42%(图4b)。
为了阐明MES的哪个成分对循环Treg细胞的生长负责，我们接下来在纯白藜芦醇(2、5和20µM)或纯木糖素C(2、5和20µM)的存在下培养pbmc。如图4C所示，2µM和5µM剂量的白藜芦醇和木质素C均能刺激循环Treg细胞的增殖。这些作用在木质素c处理的细胞中更为明显。值得注意的是，这两种化合物在20µM或更高剂量时均显著损害细胞活力。
接下来，我们检测了关键炎症细胞因子的表达，包括IFN-γ、TNF-α和GZMB，在有或没有MES培养的pbmc上清液中。以剂量依赖的方式，MES抑制培养的PBMCs中GZMB的自发释放(图5A)，部分抑制IL-2刺激的PBMCs中IFN-γ(图5B)和TNF-α(图5C)的释放。值得注意的是，MES强烈减弱PHA激活的PBMCs释放的IFN-γ(图5D)、TNF-α(图5E)和GZMB(图5F)，表明MES可能具有抗炎潜力。由于可溶性GZMB在人血浆中很容易检测到[16,17]，并且血浆中GZMB的水平与促炎状况有关[16-19]，我们接下来评估了参与本研究的5个人血浆样本中的GZMB水平。在服用MES两周后，血浆GZMB水平与基线样本相似;然而，在服用MES后四周，GZMB水平几乎无法检测到。在开始服用MES后的第6周，血浆GZMB水平仍低于基线值，然而，在第8周及之后，GZMB水平恢复到基线水平(图5G)。
图5:MES对免疫细胞释放炎性细胞因子的影响。将3名健康人的pbmc在指定浓度的MES中培养48小时。ELISA法检测培养上清液中GZMB (A)、IFN-γ (B)、TNF-α (C)水平。数据表示分析物的平均浓度±SD。从3个健康个体分离的pbmc用PHA刺激24小时，然后在指定浓度的MES存在下培养48小时。ELISA法检测培养上清液中GZMB (D)、IFN-γ (E)、TNF-α (F)水平。数据表示分析物的平均浓度±SD。(G)在基线或指定时间收集的5个个体样本中，通过ELISA评估的GZMB血浆水平。数据为GZMB平均浓度±SD。
据报道，许多膳食来源的植物化学物质具有几种促进健康的特性，包括癌症化学预防潜力[9,20]。因此，它们中的许多被广泛用作植物营养素和补充剂。在这项研究中，我们描述了在健康个体中重复施用MES的影响，特别强调了记录循环免疫细胞和血浆氧化应激标志物的变化，这是施用该化合物的结果。MES衍生二苯乙烯，每天服用320毫克，连续28天，耐受性良好，并产生相关的生物效应，可能具有促进健康的潜力。
活性氧(ROS)，包括过氧化氢、超氧阴离子和单线态氧，是在正常线粒体氧化代谢过程中以及细胞对外源损伤(如炎症和微生物入侵)的反应中不断产生的高活性分子[22,23]。氧化应激是由于细胞产生过多活性氧的能力不平衡，导致细胞产生有效的抗氧化反应，它与DNA、脂质和蛋白质等大分子的损伤有关。氧化应激已被认为是bbb老化的潜在分子机制之一。许多研究表明，ROS在许多人类疾病的发生和发展中发挥重要作用，包括动脉粥样硬化、炎症、糖尿病和癌症[22,23,25]。我们的研究发现，MES增强了参与本研究的所有个体的血浆抗氧化能力，这表明MES可能有助于预防或改善与氧化应激相关的疾病。此外，我们的研究发现，MES摄入降低了血浆中的羰基蛋白水平，这可能支持这一假设，因为蛋白质羰基水平是蛋白质氧化最常用的生物标志物，它们的积累与癌症风险的增加直接相关。事实上，在几种癌症患者的样本中，包括膀胱癌[27]、乳腺癌[28]和霍奇金淋巴瘤[29]，已经报道了蛋白质羰基水平的增加。此外，在本研究中，血浆中8-OHdG水平因服用MES而下降。8-OHdG是脱氧鸟苷的氧化衍生物，是DNA氧化的主要产物之一。高水平的8-OHdG与几种癌症的风险有因果关系[13,30]。 Therefore, our findings that MES decrease the circulating levels of 8-OHdG and carbonylated plasma proteins can be interpreted as a potential mechanism by which this mixture of stilbenoids may exert cancer chemopreventive effects in humans. Further studies should establish whether MES, when given for periods exceeding 28 days, can persistently decrease the plasma levels of 8-OHdG and carbonyl proteins. In addition, testing these effects in individuals with increased levels of carbonylated proteins, such as heavy smokers or individuals with metabolic syndrome, will provide important information.
肿瘤免疫监视的概念意味着恶性细胞在体内不断出现，免疫细胞在这些转化细胞临床表现之前寻找并根除它们。在这方面，NK细胞是先天免疫系统的效应淋巴细胞，能够在没有事先识别[32]的情况下自发杀死目标细胞，已被认为在免疫监视中发挥关键作用。NK细胞在肿瘤监测中的作用得到了流行病学和相关研究的支持。例如，高NK细胞介导的细胞毒性与癌症[34]的风险降低相关，而高数量的肿瘤浸润NK细胞与癌症[34]的较好预后相关。此外，循环NK细胞表达NKG2D，这是一种刺激受体，其在肿瘤监测中的作用已被令人信服地证明[10]。NKG2D识别并促进杀死表达应激诱导的特异性配体的靶细胞，这些配体在正常细胞中表达不良，但在转化细胞中经常上调[10,36]。在本研究中，我们发现MES持续增强循环NK细胞中NKG2D受体的表达。在先前的研究中，有报道称，在MES成分之一的反式白藜芦醇的存在下培养人类NK细胞，可以上调NKG2D[10]。本研究提供在活的有机体内这些证据证实了以前的报告，并证实了MES在人类中的免疫调节潜力。根据这些见解，我们推测本研究的发现表明MES可能具有化学预防潜力。
我们发现MES摄入与血浆GZMB水平显著降低相关，这与MES具有抗炎特性的观点一致。GZMB在很大程度上与固有的促凋亡功能有关，因为这种蛋白酶与穿孔素一起，是细胞毒性T淋巴细胞(ctl)和NK细胞[37]中发现的细胞质颗粒的主要成分。细胞毒性颗粒释放GZMB是这些免疫细胞消灭靶细胞[37]的主要机制之一;然而，近年来，GZMB的非细胞毒性或细胞外作用已经出现，因为该蛋白酶在非免疫细胞中表达，如平滑肌细胞、角化细胞和软骨细胞[38]。由于循环GZMB保持完全功能，并且有报道称循环细胞外GZMB水平升高与各种炎症有关[16-18,39]，因此有人提出细胞外GZMB在某些慢性炎症疾病的发病机制中起重要作用，[37,38]综述。
版权所有OAT。版权所有调节性T细胞由一群抑制性T细胞组成，它们调节对自身抗原的耐受性并维持免疫稳态[40,41]。虽然人类treg的特征性表面标记仍在讨论中，但表型上它们已被定义为CD3+, CD4+CD25和CD127低/否定T细胞[38]。在转录水平上，已知Treg细胞表达叉头和翼螺旋家族转录因子蛋白叉头盒P3 (FOXP3)[38]。Treg细胞与几种自身免疫性疾病的发病机制有关，其中促炎细胞和Treg细胞之间的平衡被破坏导致自我耐受性的破坏。循环CD4细胞数量减少+CD25嗨已有报道称T细胞可用于多种自身免疫性疾病，包括幼年特发性关节炎、自身免疫性肝病、系统性红斑狼疮等。我们发现MES促进Treg细胞的增殖在体外MES消耗与循环Treg细胞百分比增加相关，表明该化合物可能在某些自身免疫性疾病中具有治疗潜力。虽然前景很好，但目前尚不清楚MES对健康个体的影响是否可以外推到自身免疫性疾病患者身上，因为已有文献表明，自身免疫性疾病患者体内Treg细胞数量的减少是由循环CD4增殖受损引起的+CD25嗨T细胞[41]。因此，尚不清楚MES中二苯乙烯衍生物的Treg细胞促进作用是否能够克服这些疾病中Treg细胞的增殖缺陷。
这项研究有一些局限性。该研究只包括少数受试者，没有对照组或安慰剂组。此外，很难确定观察到的生物学效应是由白藜芦醇、木素C及其代谢产物，还是由MES的其他成分或两者的组合发挥的其中。类似的临床研究已经进行，以调查其他植物化学物质的化学预防潜力，并且已经表明，这种探索性方法不仅可以提供有效的结果来证实植物化学物质的生物学相关性，而且还可以为设计更大规模的临床试验提供线索[43,44]。此外，我们的在体外研究证实了MES对免疫细胞的生物学效应，进一步证实了本文报道的发现的相关性。未来的研究需要更多的参与者和更长时间的MES暴露来证实这些观察结果并阐明所涉及的机制。
相互竞争的利益
作者声明本文的发表不存在任何利益冲突。
JLE和AT构思和设计了这些研究;JLE、DTA、LQT、KY进行实验;JLE、AT、LQT和SN分析数据;JLE和AT撰写了手稿。
这项研究得到了日本厚生劳动省和日本教育、文化、体育和技术省的资助。资助来源在研究设计、数据收集和分析、决定发表或准备稿件中没有发挥任何作用。
音)山口
埃默里大学医学院
研究文章
收稿日期:2015年10月14日
录用日期:2015年11月2日
发布日期:2015年11月5日
©2015 Luis Espinoza J.这是一篇在知识共享署名许可下发布的开放获取文章，该许可允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制，前提是注明原作者和来源。
Espinoza LJ, An DT, Trung LQ, Yamada K, Nakao S等。(2015)melinjo提取物中芪衍生物对健康个体的抗氧化和免疫调节作用。integrated Mol Med 2: DOI: 10.15761/IMM.1000177。
金泽大学附属金泽大学医院血液肿瘤科，日本金泽市，920-8641，日本金泽市，13-1，电话:81 76 265 22274;传真:81 76 234 4277。
捐赠者# |
反式白藜芦醇(µg / ml) 第0周第二周 |
Gnetin-C(µg / ml) 第0周第二周 |
味精c(µg/ml)(单氯胺酮) 第0周第二周 |
1 |
0 0.0254 |
0 0.267 |
0 0.0784 |
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0 0.0879 |
0 0.149 |
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0 0.153 |
4 |
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0.344±0.205 |
0.0964±0.05 |
表1。摄取MES前后两周健康人血浆中的芪衍生物
图1:MSE对血浆氧化应激参数的影响。(A)基线和服用MSE后2周和4周的血浆抗氧化能力。(B)基线和指定时间(周)血浆羰基蛋白水平。报告的A和B的折叠变化以在指定时间点测量的五个人的值的平均值±SD表示。(C) 5个人在基线和研究第二周的尿8-OHdG水平。
图2:MSE二苯乙烯衍生物对循环免疫细胞的影响。(A)在基线(W0)或指定时间(周)采集的五个人血液样本中的pbmc和CD3百分比−、CD56+NKG2D+NK细胞(A)， CD3+T细胞(B)， CD19+B细胞(C)和γδ+流式细胞术检测T细胞(D)。数字表示平均值±SD。在图A中，左面板显示了5个人的汇总数据，右面板显示了1个人的代表性结果。
图3:摄取MES前后NK细胞表面各种受体蛋白的表达。用流式细胞术分析在基线或指定时间收集的5名健康个体的PBMC。为活细胞、单线态细胞、CD3细胞设置通道−、CD56+淋巴细胞,NKG2D+(一)NKp46+(B), CD16+(C), DNAM-1+(D), NKG2A+(E).数据代表平均受体MFI±SD。
图4:通过流式细胞术分析MSE二苯乙烯衍生物对基线(W0)或指定时间(周)采集的五个人血液样本中循环Treg细胞(A) PBMCs增殖的影响。图中为Treg细胞平均值±SD。(B)从3个健康个体获得的PBMCs在添加IL-15和抗CD3/CD28微球以及指定浓度的MES的完整培养基中培养4天。收集细胞，流式细胞术检测循环Treg细胞的百分比。左面板显示了5个人的汇总数据，右面板显示了一个人的代表性结果。(C)在指定浓度的MES、纯木质素C或纯反式白藜芦醇中培养3名健康人的pbmc 4天。流式细胞术检测循环Treg细胞百分比。给出了三个独立实验的一个代表性结果。
图5:MES对免疫细胞释放炎性细胞因子的影响。将3名健康人的pbmc在指定浓度的MES中培养48小时。ELISA法检测培养上清液中GZMB (A)、IFN-γ (B)、TNF-α (C)水平。数据表示分析物的平均浓度±SD。从3个健康个体分离的pbmc用PHA刺激24小时，然后在指定浓度的MES存在下培养48小时。ELISA法检测培养上清液中GZMB (D)、IFN-γ (E)、TNF-α (F)水平。数据表示分析物的平均浓度±SD。(G)在基线或指定时间收集的5个个体样本中，通过ELISA评估的GZMB血浆水平。数据为GZMB平均浓度±SD。
