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摘要

植物性营养物质对男性睾丸激素产生的潜在影响已被研究过。我们研究了一种新的西番莲提取物对健康男性游离睾酮的影响。在这项研究的第一部分，18名年轻男性(35.9±1.6岁)被分配服用安慰剂片或含有西番莲提取物的片剂，以随机顺序，双盲，交叉设计。每种条件的治疗期为15天，条件之间有两周的洗脱期。在第1天、第8天和第15天的早上和晚上采集血液和唾液——在摄入指定条件之前和摄入指定条件后一小时。在这项研究的第二部分，七名老年男性(55.9±2.7岁)被分配以随机顺序、双盲、交叉设计服用西番莲提取物或安慰剂片。治疗时间与第一部分相同，但只在第1天、第3天、第8天和第15天的早上收集唾液。所有受试者在每个测试日的早上都完成了一份问卷调查，以确定他们与治疗相关的主观感受。西番莲提取物似乎不会影响年轻男性的游离睾酮或主观感受。然而，老年男性的游离唾液睾酮平均增加了13%。 In addition, an increase of 17% was noted from day 1 to day 15 for perceived energy level, while an increase of 9% was noted for libido when older men used the extract. A novel passion flower extract does not influence testosterone concentrations or subjective feelings in younger men but may have an influence on these outcomes in selected older men. It is possible that the treatment may be more effective when delivered to those with low baseline testosterone values.

关键字

西番莲，植物，睾丸激素，荷尔蒙，男人

简介

维生素、矿物质和某些植物被广泛用于维持人体健康。据报道，某些感兴趣的成分与改善力量和肌肉健康有关，并可能与激素睾酮的增加有关[2-4]。虽然总计循环睾酮与增强力量、活力和性欲有关，似乎最重要的是睾酮的数量免费的睾丸素在循环。这种“游离”睾酮是睾酮的生物活性形式，人们正在积极寻求提高这部分睾酮的方法[5-13]。

增强游离睾酮的一种方法是摄入植物性营养物质，通常被称为植物性营养物质[14]。事实上，先前的文献综述表明，某些植物药可能对循环睾酮水平有有利影响，其中一种植物药是西番莲提取物(passiflora incarnate[15,16])。然而，据我们所知，没有关于使用西番莲提取物来提高睾丸激素水平的人体研究。因此，本研究的目的是确定西番莲提取物对健康男性无血睾酮的影响。我们采用了两部分调查，包括年轻男性和年长男性。在这两种情况下，我们采用随机、安慰剂对照、交叉设计来确定短期(15天)补充西番莲提取物对游离睾酮水平的影响。

材料与方法

受试者和筛查

健康男性(第一部分n=18;N=7(第2部分)参与了这项研究，并完成了这项工作的各个方面。在参与之前，受试者完成了一份健康史和体育活动问卷。受试者无心血管疾病、代谢性疾病或抑郁症史，也无吸烟史。受试者没有使用任何种类的心血管或代谢药物。使用双能x线吸收仪测量受试者的身高和体重，以及他们的身体成分。静息心率和血压分别用触诊和袖带/听诊器测量。受试者的描述性特征见表1。该研究方案由孟菲斯大学人体受试者研究机构审查委员会批准，受试者在参与前提供了书面知情同意。

变量	男人 N = 18	男人 N = 7
年龄(岁)	35.9±1.6	55.9±2.7
身高(厘米)	179.8±1.4	179.4±1.6
体重(公斤)	88.2±1.9	96.8±6.7
BMI(公斤∙米－2）	27.3±0.5	30.0±2.0
腰(cm)	94.8±1.4	96.5±5.8
臀部(cm)	105.4±1.1	99.4±3.8
腰围:臀	0.9±0.0	1.0±0.0
体脂(%)	21.0±1.0	24.4±1.8
心率(每分钟)	65.4±2.4	76.1±2.1
收缩压(mmHg)	119.4±2.4	128.0±2.8
舒张压(mmHg)	79.3±2.6	77.9±2.1
多年无氧运动训练	6.9±2.2	7.1±4.7
每周几小时无氧运动	1.3±0.4	0.5±0.3
多年有氧运动训练	10.5±2.4	16.6±5.5
每周做几小时有氧运动	1.8±0.3	2.1±0.5

表1。年轻男性(N=18)和年长男性(N=7)的特征

数据为均值±SEM。

实验室测试和条件

在初步筛选程序完成后，受试者在上午(6:00-9:00am)和晚上(6:00-9:00pm)到实验室进行第一部分研究的测试。在第二部分中，受试者只是在早上向实验室报告。对于上午的访问，受试者报告了10小时的夜间禁食，而对于晚上的访问，受试者报告了4小时的禁食。对于两种情况(主动和安慰剂)中的每一种，对每个受试者进行了超过15天的测试，在第1天、第8天和第15天进行测量，包括三天的上午和晚上访问(第1部分);第二部分的第1、3、8和15天。每个受试者在所有测试日的早晚测试时间都是匹配的。

采用交叉设计，受试者以双盲方式随机分配到活性植物组或安慰剂组。两个星期的洗脱期分离条件。下面所描述的所有程序对于这两种情况都是相同的。植物制剂和安慰剂以快溶片剂的形式提供，放置在舌下，并按照GMP生产。每个活性片剂含有62.5毫克的剂量，包括:西番莲提取物;7、8苯甲黄酮和葛根木脂素;3,4二苯基四氢呋喃脂质体与吸收增强剂胡椒碱脂质体-全部在舌下快速溶解片。每个安慰剂片都含有麦芽糊精。药片是用水泡包装提供给受试者的，外观相似。受试者在最后的血液/唾液样本采集当天归还未使用的片剂(如下所述)，并计算剩余片剂的摄入量。

在每种情况的第1天早上获得基线空腹血液/唾液样本(对于第1部分;在第二部分中只采集了唾液样本)。所有受试者每天服用两片(大约早上6:00-7:00服用一片;1片，大约下午6:00-7:00)，从第一天开始，持续15天。在随后的几天(第一部分为8和15个;第2部分为3,8,15)。在服药前和服药后1小时内，分别于早上/晚上采集血液/唾液。这两种情况(主动和安慰剂)都是一样的。仅在第2部分中，每个受试者在每次收集期间间隔30分钟获得重复的唾液样本;数值平均后得到用于数据分析的值。

测试一天

每次实验室访问大约需要75分钟。在这段时间里，受试者放松、阅读、使用电脑或看电视。只允许喝水。首先采集受试者的血液/唾液样本。然后摄入指定的药片，并在一小时后获得额外的血液/唾液样本。这就结束了受试者对该次访问的参与。在所有测试的日子里，无论是主动的还是无效的，早晨和晚上的访问都遵循相同的程序。

血液/唾液收集和生物化学

血液样本(约7ml)从前臂静脉收集到真空器中^®不含添加剂的试管，在室温下凝血约30分钟，然后在4ºC下离心15分钟，得到血清。血清样品保存在-70º，直到分析。受试者将唾液样本(约1mL)通过持续、无刺激的被动流口水注入特制的聚丙烯收集管(SaliCap: IBL International, Germany)。为受试者提供一面镜子以协助填充试管，大多数受试者填充试管的时间约为2分钟。受试者被要求在提供唾液样本后一小时内不刷牙、嚼口香糖或薄荷糖，或喝除水以外的任何东西。在收集唾液前五分钟，受试者用水漱口。收集唾液后，样本保存在-70º，直到分析。

采集后五周内检测血清和唾液中的游离睾酮。所有样品从冰柜中取出，在室温下解冻，然后充分混合。然后将唾液样本放入冷藏离心机(4ºC)， 2000g, 10分钟，试图产生干净的上清液。这是ELISA制造商(IBL International，德国)建议的唾液样本离心的推荐时间和速度。在第一部分中，使用50µL唾液(IBL International, Germany:目录# RE52631)和25µL血清(Cal Biotech, Spring Valley, CA:目录# FT178S)通过ELISA程序分析游离睾酮浓度。在第2部分中，使用25µL唾液通过ELISA程序分析游离睾酮浓度(Salimetrics, Carlsbad, CA:目录# 1-2402)。所有ELISA试剂盒均有质量控制证书。所有样品在第一次解冻时一式两份进行分析。

问卷调查

由于循环睾酮对健康特定参数的潜在影响，受试者还在每个测试日的上午完成了一份问卷。使用1-5(第1部分)和1-10(第2部分)的量表，其中1代表最低评分，5/10代表最高评分，受试者根据过去一周的感受对与整体健康有关的一些变量进行评分(评估变量见表2)。

表2。年轻男性(A)和年长男性(B)被分配给植物制剂或安慰剂

一个

变量	植物 第一天	植物 第八天	植物 一天15	安慰剂 第一天	安慰剂 第八天	安慰剂 一天15
警觉性	4.1±0.2	4.0±0.2	3.9±0.2	3.9±0.2	4.1±0.2	3.9±0.1
能量水平	3.6±0.2	4.0±0.2	3.8±0。	3.8±0.2	4.0±0.2	4.1±0.2
活力	3.8±0.2	3.9±0.2	3.9±0.2	3.9±0.2	3.8±0.2	3.9±0.2
性欲	3.9±0.2	4.2±0.2	4.1±0.3	3.7±0.2	3.9±0.2	4.0±0.2
锻炼效果	3.6±0.2	3.7±0.2	3.8±0.3	3.6±0.2	4.1±0.3	3.9±0.2
肌肉力量	3.7±0.2	3.8±0.2	3.9±0.2	3.7±0.2	3.8±0.2	3.9±0.2
肌肉耐力	3.4±0.2	3.8±0.1	3.8±0.2	3.5±0.2	3.8±0.2	3.9±0.2
睡眠质量	3.3±0.3	3.4±0.2	3.4±0.2	3.1±0.2	3.5±0.2	3.9±0.2
精神面貌和情绪	3.9±0.1	3.9±0.2	3.9±0.2	3.7±0.2	4.0±0.2	3.9±0.2
外表	3.7±0.2	3.9±0.1	3.8±0.2	3.7±0.02	3.7±0.2	3.8±0.2

B

变量	植物 第一天	植物 第三天	植物 第八天	植物 一天15	安慰剂 第一天	安慰剂 第三天	安慰剂 第八天	安慰剂 一天15
警觉性	7.4±0.9	7.3±0.5	7.4±0.4	7.4±0.4	7.7±0.7	7.6±0.8	7.4±1.0	7.6±0.6
能量水平	6.3±0.8	7.3±0.9	6.7±0.8	7.4±0.6	7.3±0.5	6.7±1.0	7.0±0.9	7.3±0.8
活力	6.9±0.9	6.9±0.9	7.6±0.8	6.6±0.8	7.1±0.9	6.4±0.9	7.3±0.5	7.0±0.9
性欲	6.7±1.0	6.6±1.0	7.1±0.8	7.3±0.7	6.1±1.1	6.3±0.8	6.3±1.1	6.6±1.2
肌肉力量	6.6±0.6	6.7±0.5	6.7±0.5	6.1±0.8	6.0±0.8	6.1±0.8	6.9±0.6	6.9±0.9
肌肉耐力	6.1±0.8	6.0±0.7	6.9±0.4	6.3±0.8	6.1±0.9	6.1±0.8	6.3±0.8	6.3±0.8
睡眠质量	6.3±0.6	7.3±0.4	7.1±0.5	6.6±0.8	6.4±0.9	7.3±0.7	7.6±0.8	7.6±0.7
精神面貌和情绪	6.9±0.8	7.1±0.7	7.3±0.6	7.7±0.7	7.4±1.0	7.7±0.9	7.4±0.6	8.0±0.6
外表	6.0±0.8	6.0±0.8	6.0±0.9	6.3±0.8	6.3±1.3	6.0±0.9	6.0±1.0	6.6±1.0

数据为均值±SEM。

差异无统计学意义(p>0.05)。

饮食摄入和身体活动

受试者被要求在整个研究期间保持他们通常的饮食摄入量和体育活动计划。他们还被要求在每个测试日前48小时内避免饮酒、剧烈体育活动和性活动。最后，他们被要求在每个测试日的前一天晚上至少睡7小时。

统计分析

在第1部分中，睾酮数据采用2(条件)× 3(测试日)× 2(上午/晚上)× 2(药片摄入前/后)重复测量方差分析(ANOVA)进行分析。主观感受数据采用2(条件)× 3(测试日)的方差分析。在第2部分中，睾酮数据采用2(条件)× 4(测试日)× 2(药片摄入前/后)重复测量方差分析(ANOVA)进行分析。主观感受数据采用2(条件)和4(测试日)的方差分析。所有分析均使用JMP统计软件(版本4.0.3,SAS Institute, Cary, NC)进行。P≤0.05为差异有统计学意义。数据以均数±标准差表示。

1. 结果

所有受试者均顺利完成方案。在治疗过程中没有发现不良结果，所有受试者都能很好地耐受治疗，只有以下例外:一名老年人报告说他晚上睡觉时腿抽筋。受试者报告说，这种性质的痉挛是他反复经历的症状，但他认为这种发作比正常情况下发生得更频繁。这已经报告给了我们的IRB和研究发起人。

学科特征如表1所示。在第一部分中，除了晚上血液中的睾酮值(p<0.0001)和唾液中的睾酮值(p=0.0002)比早上低外，睾酮值或主观感受在不同条件或时间之间没有统计学上的显著差异(p>0.05)。主观感受的数据见表2A。血液和唾液睾酮数据见表3。

条件	一天	am / pm __	前/后*	血清	唾液
植物	1	我	精准医疗	5.15±0.33	388.84±85.55
植物	1	我	帖子	5.08±0.29	457.77±85.49
植物	1	点	精准医疗	4.44±0.27	270.18±66.57
植物	1	点	帖子	4.36±0.22	342.38±68.57
植物	8	我	精准医疗	5.04±0.26	397.08±87.05
植物	8	我	帖子	5.24±0.35	443.97±69.83
植物	8	点	精准医疗	4.39±0.23	249.43±58.52
植物	8	点	帖子	4.20±0.26	301.09±61.77
植物	15	我	精准医疗	5.01±0.31	369.48±68.64
植物	15	我	帖子	5.25±0.33	377.59±66.44
植物	15	点	精准医疗	4.39±0.26	314.88±57.09
植物	15	点	帖子	4.45±0.24	313.83±52.17
安慰剂	1	我	精准医疗	5.09±0.32	427.84±67.86
安慰剂	1	我	帖子	5.19±0.33	443.29±72.59
安慰剂	1	点	精准医疗	4.35±0.24	300.05±61.52
安慰剂	1	点	帖子	4.24±0.20	320.18±67.45
安慰剂	8	我	精准医疗	4.72±0.29	307.54±48.45
安慰剂	8	我	帖子	4.90±0.28	378.41±59.57
安慰剂	8	点	精准医疗	4.11±0.25	236.91±41.88
安慰剂	8	点	帖子	4.22±0.25	256.72±39.37
安慰剂	15	我	精准医疗	4.75±0.32	396.46±60.66
安慰剂	15	我	帖子	4.90±0.31	408.80±57.59
安慰剂	15	点	精准医疗	4.15±0.19	290.83±51.61
安慰剂	15	点	帖子	4.14±0.18	330.32±47.24

表3。血清和唾液游离睾酮值(pg∙mL^－1)接受植物制剂或安慰剂的年轻男性

*预:接收条件之前;邮寄:收到后1小时

数据为均值±SEM。†血清(p<0.0001)和唾液(p=0.0002) am比pm的值更大。

其他差异无统计学意义(p>0.05)。

对于第二部分，无统计学意义的变化(p>0.05)。然而，当从第1天开始计算唾液睾酮的变化百分比时，在第3天，使用提取物的男性增加了13%，而使用安慰剂的男性增加了2% (p=0.29)。在接受测试的7名男性中，有4名男性的唾液睾酮水平从第1天开始呈上升趋势(第3天、第8天和第15天的平均增幅)(范围:4%至20%)。在这组反应者中，在第8天，一名受试者的游离睾酮反应达到了28%的峰值。然而，当只考虑这四名男性时，无法检测到提取物和安慰剂之间的显著差异(p>0.05;表4)。考虑到所有7名男性，从第1天到第15天，当男性使用提取物时，他们的感知能量水平增加了17%，而性欲增加了9%(表2B)。

条件	一天	前/后*	唾液
植物	1	精准医疗	107.2±13.1
植物	1	帖子	122.7±22.2
植物	3.	精准医疗	122.7±16.7
植物	3.	帖子	92.7±11.7
植物	8	精准医疗	108.2±9.4
植物	8	帖子	123.7±13.7
植物	15	精准医疗	110.3±15.2
植物	15	帖子	93.7±12.2
安慰剂	1	精准医疗	98.0±14.5
安慰剂	1	帖子	98.6±17.4
安慰剂	3.	精准医疗	111.3±22.1
安慰剂	3.	帖子	88.7±17.2
安慰剂	8	精准医疗	103.7±16.9
安慰剂	8	帖子	89.9±10.7
安慰剂	15	精准医疗	97.1±11.1
安慰剂	15	帖子	98.3±18.3

表4。唾液游离睾酮值(pg∙mL^－1)接受植物制剂或安慰剂的老年男性

*预:接收条件之前;邮寄:收到后1小时

数据为均值±SEM。差异无统计学意义(p>0.05)。

讨论

据我们所知，目前的研究是第一个评估西番莲提取物对健康男性游离睾酮的影响。结果表明，安慰剂或西番莲提取物对睾酮或主观感受没有统计学上的显著差异。也就是说，选定的老年男性似乎受益于使用提取物，这些发现值得进一步调查。

具体来说，当男性使用这种提取物时，唾液睾酮的平均变化峰值为13%。在接受测试的7名老年男性中，有4名男性的唾液睾酮水平从第1天开始呈上升趋势(第3天、第8天和第15天的平均增幅)(范围:4%至20%)。需要一个更大的男性样本，理想情况下具有相似的基础睾酮值(以减少变异)，以扩展这些发现。除了唾液睾酮水平增加外，使用该提取物的男性的感知能量水平增加了17%，性欲也增加了9%。与许多膳食补充剂一样，有些人对治疗表现出“反应”，而有些人则不是。受试者之间反应的可变性，相对较小的样本量，以及对某些可能影响男性睾酮浓度的外部变量(如夜间睡眠)缺乏控制的可能性，可能共同损害了我们检测统计显著性变化的能力。任何潜在的后续研究都应包括更大的男性样本，可能包括低睾酮的典型症状(例如，嗜睡、抑郁、性欲丧失)，以试图确定西香花提取物是否能提供有意义的睾酮促进。此外，我们可以预先筛选个体，以确定谁可能被归类为对治疗的“反应者”。此外，由于睾丸激素疗法在经历上述相似症状的中年和绝经前妇女中越来越受欢迎，涉及女性的调查可能会引起兴趣。目前，几乎没有任何膳食补充剂是专门针对那些有增加睾丸激素的目标，以改善整体健康和福祉的女性。

西香花提取物被认为通过抑制芳香化酶活性来提高循环睾酮，芳香化酶是细胞色素P-450酶家族的一员，这可能会阻止睾酮向其代谢物的转化。随后的结果将是维持性腺组织中的睾酮水平。在我们所知道的关于西番莲提取物和睾丸激素水平的唯一发表的研究中，Dhawan和Sharma发现，当白化Wistar大鼠补充悬浮在简单糖浆[8]中的西番莲提取物时，睾丸激素会增加。基于这些有限的发现，需要进一步的研究来确定西番莲提取物对人体循环睾酮的影响。

正如预期的那样，与早上相比，晚上的睾酮值较低(表3)(10)。除了这一差异外，当个体急性或慢性摄入植物提取物时，唾液或血液样本中的睾酮水平没有增加(表3)。对于我们没有显著的效果，我们有几个潜在的解释。首先，可能由于受试者年龄相对较年轻(35.9±1.6岁)，基线睾酮水平过高，植物治疗无法对其产生有利影响。这可能就是为什么我们注意到用提取物治疗的老年人有一些好处的原因。

其次，有可能个体没有适当地摄入指定的治疗。也就是说，他们被指导如何使用指定的治疗方法，将药片放在舌下，等待它溶解到粘膜中。我们的试点测试表明，片剂完全溶解大约需要15分钟的时间。有些受试者可能变得不耐烦，直接吞下了药片。如果是这样的话，活性成分就会进入胃肠道而不是口腔粘膜；因此，睾丸激素升高的最终结果可能还没有实现。

第三，有可能受试者未能遵守每次实验室访问的所有说明，包括涉及食物摄入，避免剧烈运动，以及在每个测试日的前一天晚上获得充足的睡眠。由于所有这些变量都可能影响结果，不遵守我们建议的指导方针可能会混淆结果。

第四，由于OAT版权的不同。所有权利保留ELISA试剂盒，如果使用Salimetrics检测试剂盒分析这些样本，对年轻男性可能会得到不同的结果。老年男性样本选择使用Salimetrics试剂盒是在完成年轻成人研究并对IBL和Salimetrics试剂盒进行比较后做出的。Salimetrics试剂盒的整体性能似乎更好，因此，决定使用该试剂盒来分析老年男性样本。通过比较表3和表4中的唾液睾酮值，可以看出明显的显著差异，与Salimetrics试剂盒相比，IBL试剂盒的睾酮值高出3-4倍。当然，有些差异可能是由于样本中睾酮浓度的实际差异造成的。尽管如此，那些计划分析人类唾液样本中的睾丸激素的人可能会考虑这一点。

在一项涉及五名男性(其中四名年龄在30岁以下;一名41岁)和一名女性(36岁)，在一周内服用两倍剂量的西番莲提取物或在几周内服用标准剂量的西番莲提取物，在选定的个体中注意到唾液睾酮的增加。值得注意的是，在最初的三天治疗后，一名男性(41岁)和一名女性的唾液睾酮水平增加了约30%。此外，在几周的植物提取物治疗过程中，该妇女在整体情绪和能量水平上有了显著改善。血睾酮水平未见升高。

结论

一种新的西番莲提取物不会导致年轻男性睾丸激素的显著增加，但可能对某些老年男性有影响。对于那些睾丸素基线值较低的人来说，这种治疗可能更有效。如果未来对这些个体(如老年男性、女性)进行研究，应考虑将相关变量(如情绪、能量水平、肌肉力量、肌肉质量)纳入研究设计。

相互竞争的利益

本文的财务支持部分由Smartek有限责任公司提供。作者均与该公司无财务利益关系。RJB获得了研究资金或担任其他营养和膳食补充剂公司的顾问。所有其他作者声明没有竞争利益。

作者的贡献

RJB负责研究设计、生化工作、统计分析和手稿准备。JJM、TAG和JMS负责受试者招募、数据收集、血液/唾液收集和处理、数据录入和协助稿件准备。所有作者都阅读并认可了最终的手稿。

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