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摘要

目的是探讨不同剂量乌司他丁(UTI)对心肌的保护作用及其机制。2014年5月至8月，在动物实验室309所^th本实验严格按照《国家卫生研究院实验动物护理和使用指南》的建议进行。动物方案由解放军第309医院动物护理机构委员会批准(许可证编号:13-269)。120只SD大鼠随机分为对照组(生理盐水处理)、UTI低剂量组(30000 IU/kg)、UTI中剂量组(60000 IU/kg)和高剂量组(90000 IU/kg)。所有大鼠均经静脉注射UTI 2周。采用左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩内膜尺寸(LVESD)和左室射血分数(LVEF)评价心功能。用氯胺- t氧化法测定心肌纤维化程度，用脑利钠肽(BNP)测定心功能。组间比较，高剂量组LVEDD、LVESD、LVEF、BNP含量及心功能均优于其他各组。

大剂量乌司他丁对心肌的保护作用较好，其作用机制可能与抑制心肌间质纤维化和心室重构有关。

简介

由于尿蛋白酶抑制剂、乌司他丁(UTI)在改善器官缺血/再灌注、抗炎等方面的优势，被广泛应用于心肺复苏、心力衰竭等情况下的心脏保护[1-5]。但在临床上，低剂量UTI对心肌的保护作用并不明显。因此，我们认为其治疗效果可能与剂量有关。本研究探讨了不同剂量UTI的心肌保护作用及其机制。

材料和方法

2014年5月至8月，在动物实验室309所^th本实验严格按照《国家卫生研究院实验动物护理和使用指南》的建议进行。动物议定书由309机构动物保护委员会批准^th解放军医院(许可证号:13-269)。我们使用阿霉素诱发的心肌病作为本研究的模型。11周后，每周腹腔注射阿霉素2.8 mg/kg。的12^th在无腹腔注射的情况下，观察模型以确认[6]。120只SD大鼠随机分为对照组(生理盐水处理)、UTI低剂量组(30000 IU/kg)、UTI中剂量组(60000 IU/kg)和高剂量组(90000 IU/kg)[7-8]。所有大鼠均采用尾静脉注射地高辛、鼻胃管注射缬沙坦、静脉注射UTI治疗2周。

实验前及实验后2周采用超声心动图评价左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩内径(LVESD)和左室射血分数(LVEF)。

羟脯氨酸的测定采用氯胺- t氧化法。左心室心肌(30~100 mg湿组织)置于管中，与1 ml水解液在95°C下混合20 min。样品溶液冷却后加入指示剂，调至pH 6~6.8，与活性炭混合，以3500 r/min离心10分钟。收集上清液，分别加入A、B、C (Hyp Elisa试剂盒，普源公司)0.5 ml，孵育5 min。紫外-可见分光光度计在550 nm处检测上清液。

治疗前和两周后，空腹后采集静脉血制备血液样本。用快速荧光免疫法测定血浆脑利钠肽(BNP)水平。

结果

与对照组相比，各组SD大鼠应用UTI后心功能均有明显改善(LVEDD、LVESD下降，LVEF、FS改善)，且UTI高剂量组心功能、左心室内径改善均优于其他三组(表1)。

	控制		低剂量的		如果		高剂量
项	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后
LVEDD /毫米	1.29±0.01	1.53±0.13	1.29±0.06	1.21±0.02一个	1.35±0.14	1.21±0.09一个	1.33±0.23	1.01±0.01a、b
LVESD /毫米	1.09±0.02	1.23±0.01	1.09±0.03	0.98±0.04一个	1.03±0.17	0.98±0.12一个	1.07±0.19	0.99±0.03a、b
FS / %	37.51±1.21	13.8±0.36	27.43±2.11	27.38±3.12一个	23.68±1.25	26.98±2.02一个	20.62±1.37	32.12±2.14a、b
LVEF / %	52.58±2.13	32.49±1.29	49.78±1.29	53.22±2.19一个	51.32±2.19	56.91±1.87一个	54.28±1.20	59.96±2.10a、b

表1．心功能评价结果

^一个:与对照组相比，p< 0.05;^b:与其他三组相比，p< 0.05

对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组Hyp含量分别为(40.16±2.31)mg/g、(34.24±1.98)mg/g、(22.79±1.69)mg/g、(19.84±1.47)mg/g。与对照组相比，3个UTI应用组治疗前后Hyp差异随着UTI的增加而增大。

治疗前，四组患者血浆BNP水平均高于正常水平，具有心功能不全的特点。应用UTI后，四组的数值均显著降低，特别是大剂量组(表2)。

集团	治疗前	治疗后
控制	4917.51±85.82	3783.82±89.17a、b
低剂量的	4878.84±89.21	3272.91±73.41a、b
如果	4983.94±93.33	2884.62±70.94a、b
高剂量	4894.17±99.45	1689.33±74.86a、b

表2．治疗前后BNP水平(ng/L)

^一个:与对照组相比，p< 0.05;^b:与高剂量组相比，p< 0.05

讨论

许多研究者已经证实了UTI的心肌保护作用。然而，UTI的临床疗效与剂量之间的关系尚未得到证实。此外，最佳剂量也是不确定的。在本研究中，我们探讨并分析了不同剂量UTI的治疗效果及其可能的机制。

在UTI治疗后，LVEDD、LECSD和血浆BNP均下降。但LVEF明显改善。高剂量组变化最明显，说明高剂量组对心肌的保护作用更强，提示临床效果应在一定范围内呈剂量依赖性。原因可能有以下几点:(i)抑制心室重构。输注UTI可使心室内径变小，而左心室缩短幅度增大。提示UTI可抑制心衰后心室重构，且在高剂量条件下效果最明显[9-11]。(ii)抑制心肌间质纤维化。I型和III型纤维胶原是心肌胶原基质的主要成分。I型胶原蛋白占总胶原蛋白的近80%，而III型胶原蛋白的比例较低(约11%)。羟脯氨酸是构成胶原纤维的主要成分，其含量决定心肌间质纤维化。 In the high-dose group, myocardial had the lowest content of Hyp, and the interstitial myocardial fibrosis was in low level, which was prompted that myocardial collagen fiber synthesis was inhibited. So we can conclude that a high dose of UTI can inhibit myocardial interstitial fibrosis, thus effectively improving cardiac function [12,13]. (iii) Antagonizing myocardial oxygen radicals. Myocardial lipid peroxidation damage is an important pathogenic mechanism of doxorubicin-induced dilated myocardiopathy. One of the pharmacological effects of UTI are inhibiting the inflammatory response and reducing the release of oxygen free radicals, thereby reducing the consumption of serum SOD in order to increase SOD activity. High dose of UTI can effectively reduce SOD consumption and clear superoxide anion radicals in order to protect myocardial from damage ultimately [14,15].

本研究证实了UTI对心肌细胞的保护作用是剂量相关的，在一定范围内UTI的整体效果与剂量之间存在剂量依赖关系。作为心力衰竭药物治疗的补充措施，值得临床推广应用。此外，最佳用量还需进一步探索。

参考文献

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