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摘要

胚胎破碎或细胞碎片的挤压是一种自然发生的现象，可能与胚胎发育受损、植入失败和妊娠率下降有关。先前的研究表明，在胚胎早期分裂过程中，显微手术从胚胎中抽吸这些细胞碎片后，临床结果有所改善。本病例系列的三个不孕症患者展示了碎片整理技术在体外受精后囊胚期胚胎的成功应用。碎片整理的时机允许更好地识别那些生长受阻的胚胎，这些胚胎将受益于“拯救”碎片整理。这三个胚胎在碎片整理后都显示出持续的扩张和发育，并导致临床妊娠。

关键字

碎片整理，体外施肥，胚泡，显微外科，不孕症

介绍

体外受精(IVF)后单胚胎移植(ET)的关键是选择“最佳”胚胎，是实现单胎妊娠的首选技术。胚胎学家根据评估胚胎质量和预测成功植入[2]可能性的分级系统选择移植胚胎。Gardner等人报道的分级系统通常基于三个参数:囊胚腔的扩张和孵化状态，内细胞团的致密性和大小，滋养外胚层细胞的数量和内聚性，以及透明带的状态[2,3]。

在发育过程中，中央囊胚可以挤出凋亡的卵裂球，通常称为挤出的细胞碎片。这些片段可以在胚胎发生的第2天，即受精卵卵裂过程开始时观察到。这是胚胎发育过程中常见的自然现象[4,5]。据估计，约40%的胚胎在体外[6]第一次卵裂期间表现出碎片。然而，越来越多的分裂已经被证明会限制随后的卵裂球发育，有时会导致胚胎生长停滞[4,7]。在一项研究中，与对照组[8]相比，分裂率超过15%的胚胎只产生了一半的优质胚泡。此外，研究表明，胚胎破碎的增加与着床[3,9,10]和妊娠率[5,9,11]的降低有关。

证据表明，碎片去除可改善胚胎发育[4]和着床潜力[9,10]。在最近的研究中，移植碎片化胚胎所产生的生殖结果与[10]相似或优于优质(对照)胚胎[5]。这些文献报道了卵裂期胚胎[6]碎片整理后的结果;具体来说，是第2天[4,5]或第3天[9,10]胚胎。本病例系列报道体外受精后，在装载胚胎用于胚胎移植之前，囊胚期胚胎碎片后的生殖结果。在这一阶段，对碎片整理过程进行计时，使我们能够识别出表现出生长停滞的胚胎，并能通过碎片整理成功地挽救它们。

案例展示

方法

用促性腺激素控制卵巢过度刺激(COS) 10-12天。使用连续的经阴道超声监测卵泡生长和直径以及血清雌二醇水平。当显性卵泡存在时，使用人绒毛膜促性腺激素(hCG)触发最终卵母细胞成熟。使用hCG约35小时后，经阴道超声引导取出卵母细胞。收集的卵母细胞要么剥去卵丘细胞，接受胞浆内精子注射(ICSI)，要么未剥去卵丘细胞，暴露于洗过的精子中进行常规授精。授精后约18小时对卵母细胞进行受精评估。

培养5天后，使用加德纳分级系统进行胚胎进行评分。选择为碎片整理选择展示捕获生长的碎片胚泡。在微操纵盘中进行片段去除。通过保持移液管稳定胚胎，如图1所示，使用1460nm波长红外二极管激光器在Zona Pellucida中形成一个小孔。将活组织检查移液管置于Zona薄膜内，使用负压轻轻吸出凋亡细胞片段。然后将胚胎返回培养皿和培养箱。重新评估胚胎以确定胚胎转移或冷冻保存的活力。

图1所示。在碎片整理过程之前和之后展示胚胎的照片，然后成功开发和随后的胚胎孵化。（a）第5天胚胎去除挤出细胞碎片前;（b）去除挤出细胞片段后的第5天胚胎;（c）来自Zona Pellucida的第6天胚胎“孵化”

以下三个病例展示了这种抽吸技术的应用和体外受精囊胚期胚胎碎片整理的生殖结果。三例患者的临床特点见表1。

表1。患者临床特征，卵母细胞取出结果，包括通过IVF或ICSI进行正常受精(2PN)的卵母细胞数量，确定可低温保存的胚胎数量，以及是否通过随后的胚胎移植实现妊娠

案例1

第一例为26岁G2P0020，无排卵性不孕症病史2年。在接受生殖内分泌科和不孕症诊所的评估之前，她已经接受了5个枸橼酸克罗米芬的排卵诱导周期。她接受了COS和卵母细胞提取。因此，胚胎移植被推迟了。大多数胚胎被冷冻保存以备将来移植。其中一个出现碎片的胚胎用碎片抽吸处理。碎片抽吸后一天，囊胚已从透明带孵化，表明囊胚继续膨胀。这个碎片化的胚胎后来被移植，病人获得了临床妊娠。

案例2

第二个案例是一名36岁的无挫伤女性，不孕症历史为5年。经过异常的氮疗法，她接受了宫腔镜的宫颈切除术和腹腔镜双侧沙塞切除术治疗双侧输卵管闭塞。在类似于案例1的过程中，患者接受了COS，HCG触发和卵母细胞抽吸的方法。在IVF / ICSI循环之后进行非综合体（PGT-A）的预溶解遗传检测。将两个冷冻保存的欧倍体胚胎中的一种解冻，发现具有多个碎片被除去。如在情况1中，在挤出的细胞片段的吸入后，从Zona Pellucida出现成功的胚胎孵化。患者接受了碎裂的胚胎转移，并成功构思。

案例3

最后一个案例是一个42岁的G2P1011，亚临床甲状腺功能减退症，呈现不孕一年。评估证实卵巢储备减少。她经历了类似的程序，如在1和2例中，有COS，HCG触发器和卵母痉挛。由于成本，她拒绝了PGT-A，并且在IVF-ET循环中在胚泡阶段进行了新的胚胎转移。这导致妊娠早期丧失。然后她经历了第二个IVF循环，具有新鲜胚胎转移，具有两种破碎的胚泡。她构思并进展了术语怀孕。

讨论

胚胎破碎已被证明与发育不良的胚胎生长，不良的着床率和不良的妊娠结局有关。以前的研究已经检查了在最初的卵裂过程中，在第2天或第3天，碎片整理对胚胎活力的影响。我们提出了一个病例系列，其中三个不同的不孕症诊断患者进行了卵母细胞提取和IVF/ICSI。在正常受精的胚胎中，有几个在囊胚期出现凋亡细胞碎片。那些表现出生长停滞的胚胎受到碎片整理。随后，在第二天观察到囊胚持续扩张的证据。碎片化的胚胎显示出适当的进展，包括成功地从透明带“孵化”。据我们所知，这是第一个在囊胚期的临床环境中吸入挤压凋亡细胞的报告，有证据表明囊胚持续扩张，有证据表明囊胚持续扩张。碎片整理的时机允许胚胎在卵裂期间所见的生理碎片之外进行进展，如果其形态评估表明，将经历一个“拯救”的碎片过程，获得良好的妊娠结果。

人们对这些发现提出了几种解释。分裂被认为是程序性细胞死亡的结果，导致有毒物质的释放，破坏周围的细胞，或诱导附近的卵裂球停止[4,9]。此外，这些碎片可能会干扰卵裂球的空间方向，或者仅仅是拥挤胚胎继续切割或压实所需的空间，从而阻碍细胞间的通信。一些研究表明，碎片诱导附近结构的二次退化。在透射电镜下发现，挤压细胞碎片附近的裂球有空泡变性的迹象[12,13]。碎片去除后，恢复了适当的空间关系，细胞间通讯也更加充分[9,14]。抽吸技术还可以通过去除有毒的、凋亡的细胞碎片[5]，从而形成一个更适宜的微环境。

综上所述，本病例系列对文献的贡献在于证明了囊胚期的碎片抽吸技术可以改善囊胚膨大、成功植入和最终临床妊娠。该技术可能是提高IVF/ICSI临床妊娠率和活产率的可行选择，特别是对胚胎质量较差的患者。进一步的比较和前瞻性研究是必要的，以评估胚胎碎片在IVF-ET周期中提高妊娠率的作用。

作者和contributorship

所有作者都在1)手稿构思、设计和数据分析方面做出了重大贡献;2)在起草或批判性修改文章时的贡献;3)拟出版版本的最终审定;4)同意作为工程的担保人。

确认

作者要感谢Nicole Gilreath和Woojin Han在数据收集方面的帮助。

资助声明

没有资金报告。

相互竞争的利益

没有利益冲突需要披露。

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