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收稿日期:2019年2月2日
接受日期:2019年2月13日
发布日期:2019年2月20日
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©2019 Berlanga-Acosta J.这是一篇根据知识共享署名许可条款发布的开放获取文章，该许可允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制，前提是注明原作者和来源。
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表皮生长因子(EGF)病变内浸润:从工作台到糖尿病溃疡细胞。integrated Mol Med 6 DOI: 10.15761/IMM.1000354
基因工程与生物技术中心生物医学方向伤口修复与细胞保护研究项目。邮政信箱6162。Playa 10600。古巴哈瓦那
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DOI: 10.15761 / IMM.1000354
糖尿病的患病率不断上升，与进行性和不可逆并发症不可避免地相关。糖尿病下肢溃疡导致截肢、残疾和死亡。溃疡是由伤口愈合失败引起的，其特征是增生停止、细胞凋亡和肉芽组织生成细胞衰老。糖尿病伤口还以炎症、有毒和降解的环境为特征，对局部生长因子的可用性和受体的生理机能起威慑作用。生长因子的出现引起了人们对创伤修复阻滞生物修饰剂的期待。当慢性病理生理学和生长因子药理学的关键部分仍然难以捉摸时，生长因子的临床引入是早熟的。越来越多的观察表明，由于局部蛋白水解、狭窄的生物利用度窗口、局部动力学/扩散不足以及再生的多微生物生物膜的影响，这些药物的局部施用失败。为了规避这些药效学障碍并保持EGF的生物学能力，我们开展了一系列实验，为溃疡内浸润给药途径提供了基本原理和基础。临床开发项目包括从概念验证到上市后对预后不良的缺血性、神经性和神经缺血性伤口的研究。在18年的临床进展中，治疗了25.9万多名患者。 As demonstrated by pharmacovigilance studies, aside from the success in the primary healing, the infiltrated EGF accounted for a reduction of amputation risks, negligible rates of annual recurrence, and prolonging survival of the healed patients. This pharmacological intervention is added to conventional treatments and surgical procedures. Infiltrated EGF has proved to reverse wound cells arrest being efficacious and safe for long terms of follow up.
糖尿病并发症，糖尿病足溃疡，EGF，截肢
因为班廷和贝斯特的开创性贡献是革命性的糖尿病治疗。此后，胰岛素治疗消除了酮症酸中毒这一长寿糖尿病患者死亡的主要原因。然而，传统的胰岛素治疗与新兴的新方法相结合并没有显著减少目前导致发病率和死亡率的主要并发症。2型糖尿病(T2-DM)是一个异质性复杂的过程，包括多种致病因素和多器官并发症，这对科学家和临床医生来说仍然是一个挑战。t2dm已逐渐扩大为一种大流行疾病，占所有糖尿病人群的90%至95%[3,4]。
糖尿病足溃疡(DFU)是糖尿病最常见的并发症之一，可导致截肢残疾、社会排斥和早期死亡[10]。据估计，糖尿病患者一生中足部溃疡的发病率高达34%，而全球约有1.59亿人患有糖尿病相关的下肢并发症[6,7]。因此，糖尿病患者仍然占全世界所有非创伤性下肢截肢的80%[10]。
Armstrong和他的同事们发表的一篇有启发性的综述，首次促使人们认识到溃疡愈合过程不仅仅是挽救肢体的途径，而且是预防早期死亡的首要选择。糖尿病患者截肢后的5年相对死亡率上升至68%，仅在肺癌患者截肢前。
控制糖尿病伤口慢性化的分子支柱似乎存在于三个主要事件:早衰、增殖难治性和细胞凋亡。众所周知，这些特征似乎与衰老细胞的阈值有关，而衰老细胞可能继发于生长因子(GFs) bb0的大量缺陷。一个诱人的假设是，gf在糖尿病伤口微环境中的作用甚至可能包括预防和/或逆转细胞衰老程序[12]。
从概念上讲，糖尿病伤口表现出炎症细胞因子、局部蛋白酶、细胞毒性活性氧和活性氮以及多微生物生物膜的单一和复杂的网络。所有这些共同导致了停滞表型。糖尿病易患炎症，而炎症与其说是一种短暂的反应，不如说是一种状况，而炎症消退的障碍也会使炎症硬化持续存在。越来越多的证据表明，成纤维细胞、内皮细胞和角质形成细胞受到“难以忘记”的高血糖应激的显著影响，最终决定了一个特定的表观基因组/转录组，通过复制难愈性和促炎衰老相关分泌表型(SASP)[11]，以某种方式重现了衰老景观。在这方面，核因子-κB (NF-κB)-p65和下游效应物的持续激活在炎症反应中起决定性作用。与糖尿病伤口环境中的细胞毒性密切相关的是不成比例的活性氧(ROS)的产生，以及晚期糖氧化终产物(AGEs)的积累，这保证了多细胞细胞毒性攻击的无情状态。NF-κ b相关的“损伤反应”也与促代谢/促降解表型的协调机制有关，这种表型主要是由基质金属蛋白酶(MMPs)[14]的大量上调介导的。图1总结了这些分子方面的串扰。
图1所示。糖尿病患者伤口慢性化的推测机制
由高血糖和其他与糖尿病相关的分子紊乱引起的高水平氧化应激有可能促进过早衰老。因此，糖尿病微环境有利于衰老。因此，衰老是一种终有丝分裂的命运，细胞在生长因子的作用下失去了增殖能力。我们认为糖尿病相关的分子疾病可以通过直接的DNA损伤(即活性氧)诱导端粒磨损和复制性衰老。线粒体DNA也是氧气的目标，氧气逐渐使线粒体损伤和自由基溢出持续存在。因此，表观遗传力似乎上调了p53-p21和/或p16Ink4a-pRb的过表达，从而实现了衰老程序。细胞阻滞，促凋亡，表现出异常形态。除此之外，被称为衰老相关分泌表型的促炎反应也被检测。这种SASP表型包括促炎细胞因子和蛋白酶的分泌，导致肉芽组织生长不良。
大量证据表明，MMPs不受控制的释放和激活会对GFs及其受体的局部生物利用度和生物活性产生负面影响[15-17]。由于衰老表型依赖于增殖调节阳性基因(即c-myc, c-fos, CDC2和细胞周期蛋白)的下调，通常由GFs[18]上调;早期认为GFs可以在修复过程中逆转这种阻滞的想法似乎是合理的[19,20]。
回顾历史，重组人GFs局部给药的第一个方法可能可以追溯到近40年前，它为缓慢愈合的伤口提供了一种替代方法。然而，最初对这些“灵丹妙药”的期望在大约10年的时间里消失了。根据我们的理解，两个主要因素抑制了这种兴奋:(a)基础科学的输入将表皮生长因子与恶性细胞的促进和进展[21]联系起来;(b)来自临床试验的挫折，在临床试验中，表皮生长因子(EGF)局部给药未能促进慢性伤口[22]的愈合过程，出乎意料的是，在健康志愿者中急性、受控和故意诱导的伤口[23]。
这些令人失望的结果提醒我们需要在GFs生理学和药理学方面进行更多的研究，就像在了解伤口环境生物化学方面一样。此后，许多研究困扰着文献，支持需要修改伤口局部因素，以确保适当的GFs药效学反应。其他人则声称需要gf组合作为恢复慢性伤口愈合轨迹的最佳工具。GFs在临床领域的首次亮相似乎还为时过早，因为它的基础科学知识支持其在慢性伤口bbb中的分子药理学。这种说法可能是基于Davidson小组在1985年的经典观察，他们证明在长时间，持续，缓慢释放系统[27]下促进EGF伤口愈合。这一创新吸收了EGF需要持续暴露于其受体的经典概念。这意味着egf相关的伤口愈合特性可能发生，如果受体暴露至少8至12小时，当这些受体稳定占据并最终转导有丝分裂信号时[27,28]。
总之，糖尿病慢性伤口微环境不利于局部GFs的稳定性、化学完整性、生物利用度，并最终影响其作为愈合过程主要驱动因素的生理作用。在这种环境下，受体的稳定表达和信号传导能力受损[29,30]。这些想法使我们支持糖尿病伤口细胞嵌入gfs负平衡的原则，这将预先假定细胞保护储备和增殖能力降低，并明显倾向于早熟衰老表型[31,32]。
EGF可能是研究最广泛的生长因子。自20世纪60年代解释其外源性给药及时重编程按时间顺序指定的生物事件以来，这种多肽已被用于修复外周和内部组织和器官的多种形式的伤口。毫无疑问，EGF被赋予了足够的生物学能力来潜在地逆转伤口的慢性损伤。第一个表明EGF在组织修复中的作用的证据来自斯坦利·科恩(Stanley Cohen教授-未发表的观察，个人交流)，他在1960年代早期对角膜烧伤的兔子使用了基于天然EGF的眼药水。两个主要的细胞内通路被EGF受体激活，这两个通路调用了EGF在组织修复中的两个最重要的生物作用:细胞增殖和细胞存活。这意味着egf受体激动性刺激可能转向有丝分裂和促生存程序，从而导致细胞群数量和应激耐受性的增加。对于有丝分裂反应，RAS-RAF-MEK-MAPK途径控制细胞周期从G1期到S期的进展是重要的，而PI3K-Akt通路激活一系列抗凋亡和细胞保护介质，从而挽救受损细胞[33]。
EGF受体在大多数人类细胞类型中表达，包括那些对伤口修复起关键作用的细胞，如成纤维细胞、内皮细胞和角化细胞(未分化、边缘、前沿、毛囊、汗管和皮脂腺)。除了经典的有丝分裂、促运动和细胞保护作用外[35-37]，EGF生物谱还涉及潜在的衰老作用。实验证据支持EGF终止细胞衰老程序以应对某些形式的DNA损伤的假设。同样，EGF通过Ets-2激活培养细胞中人类端粒酶逆转录酶的表达，Ets-2是一种癌症特异性转录因子，似乎依赖于egfr介导的Erk和Akt激活[39]。实验研究表明，EGF能够通过控制氧化应激和减缓细胞衰老，在其他致命情况发生之前增强细胞存活和组织补充。无论其病因如何，慢性伤口都是促氧化代谢物的丰富来源，具有局部和全身的负面影响，包括细胞衰老[41,42]。在自由基过量产生的背景下，我们发现糖尿病溃疡受试者表现为一个独特的病理组，因为与未溃疡的糖尿病个体相比，他们表现出氧化应激的加剧，同时伴随抗氧化储备的恶化。EGF给药3-4周有助于将许多氧化还原状态标记物的循环水平恢复到接近非溃疡性糖尿病患者和非糖尿病受试者的水平。因此，我们认为EGF是间接减缓过早衰老、细胞凋亡和增殖停滞的关键因素。此外，溃疡内给药EGF也倾向于恢复MMP-9/TIMP-1之间的系统平衡，表明促降解力和促合成力[43]之间的恢复，这可能表明sasp相关表型[44]的衰减。 Finally, a 2015 groundbreaking study revealed for the first time that the EGF exerts a potent anti-senescence activity in certain stem and differentiated cells. The study showed that cell cultures depleted of EGF orchestrated a senescencent phenotype with enlarged morphology, elevated SA-β-gal activity, decreased proliferation, reduced Rb phosphorylation and elevated p21 expression. Therefore, these results advise that cultured cells may depend on EGF as a mechanism to escape from senescence and ensure proliferation, thus placing EGF as a central driver in preserving mitogenic competence and suppressing senescence [45,46].
糖尿病与循环[47]和唾液EGF[48]水平的特殊缺陷有关。与此相关的主要证据是，在包括糖尿病足溃疡在内的慢性伤口中，EGF和其他对细胞增殖至关重要的GFs缺失或减少[49-51]。几种关键GFs的低浓度和随之而来的有丝分裂活性降低，促使人们推测外源性GFs治疗慢性伤口将作为一种“替代疗法”。然而，存在的一个主要障碍是如何及时地将GFs信息靶向到慢性伤口床bbb内敏感/反应性细胞层。
90年代初，我们通过坐骨神经全层横断大鼠后肢去神经，积累了EGF局部浸润的经验。除了显著帮助神经系统恢复外，该治疗还通过延缓或预防足底溃疡和脚趾坏死[52]的发生，提高了四肢周围软组织的存活率。这些实验提供了一个重要的教训:在循环神经源性恶化的情况下，局部注射EGF可以刺激皮肤和邻近软组织的存活和修复。我们随后在多种病理模型中表明，单次或多次全身或局部注射EGF可产生“明确的”细胞保护和增殖反应，支持EGF在超生理浓度下释放组织修复所需生物事件的内在能力[53,54]。尽管如此，表皮生长因子与伤口清创相关的局部浸润似乎克服了其局部应用所面临的诸多障碍:
局部应用GF药效学的相关要求是局部生物利用度和药代动力学。不同的实验室证实了慢性伤口中局部分泌的蛋白酶对GFs及其细胞受体的降解作用[55,56]。此外，利用具有egf样分子序列的合成荧光底物与无菌渗出液(在实验室条件下从约克郡猪的全层控制急性伤口中获得)孵育，也观察到蛋白水解作用。对糖尿病创面生物膜致病性意义的理解，解释了为什么局部施用GFs可能无法愈合这些病变。
1999年，克罗斯和罗伯茨提出了全球气候变化研究的最大进展之一。他们证明，EGF仅轻微渗透到伤口部位的上层颗粒层，显示溶质浓度随伤口和下垫区组织深度呈指数下降。扩散限制到伤口床深层，似乎与愈合过程的阶段无关。这种有限的吸收动力学也有助于解释为什么局部施用的GFs在临床舞台上失败。
特异性抗体的免疫组织化学研究(图2)显示，在神经性肉芽组织中，表皮生长因子受体未在创面细胞层中检测到，而在成纤维细胞的深层层中检测到。这与酪氨酸-1197残基的催化结构域特别相关，它与细胞存活、运动和增殖有关。相反，创面细胞表现出更丰富的禁止蛋白表达，一种细胞周期阻滞蛋白。这些发现表明，局部给药的药效学受到两个主要限制因素的质疑:扩散到更深的创面层有限，以及创面细胞[60]上缺乏egf受体。
图2。神经性糖尿病足溃疡肉芽组织细胞增殖周期效应
三个切片(≈2-3mm)的长度是免疫组织化学区分在活检材料中，通过免疫标记抗体对禁止素作为细胞周期负调节;在生长因子刺激下，Cyclin D1作为控制G1-S转变的主开关。活性egf受体在酪氨酸1197中磷酸化，作为该受体多种生理功能的关键底物。在伤口最表层对应的第1节，禁止素要丰富得多。相反，Cyclin D1和EGFR Y-1197出现边缘标记。值得注意的是，增生性细胞周期蛋白D1和EGFR的磷酸化形式在第3节-伤口最深处大量检测到，而没有检测到禁止素。来自Jorge Berlanga-Acosta等人，Biomed Res International。卷2017，文章编号2923759。https://doi.org/10.1155/2017/2923759(经许可)。
125在半固体载体中配制的I-EGF可能通过蛋白酶驱动的裂解和受体介导的内吞作用从应用部位迅速清除。平均停留时间值表明，超过60%的给药量可能在给药后两小时内消失。这些证据强化了先前的范式发现，这些发现为egf介导的细胞有丝分裂反应提供了基本原理[27,29,61,62]。
简单地说，将EGF注射到伤口的基部和轮廓，包括皮表皮交界处，似乎可以(1)减少其局部降解，(2)跳过扩散限制障碍，(3)确保其与受体长期相互作用的生物利用度，在肉芽组织纵向轴上的成纤维细胞密集层中。一项时间点免疫电镜动力学研究旨在表征溃疡收集的成纤维细胞中EGFR的细胞内运输，结果表明，EGF局部浸润到瓦格纳氏3号和4号神经性溃疡导致(A) EGF浸润15分钟后，EGF受体表达比“零时间”(T0:干预前)显著增加;这表明受体是由高亲和力配体EGF诱导的;(b) EGFR的立即内吞作用;(c)浸润后15分钟至24小时内不同细胞器的易位和生物分布;(d)受体的核易位及其与DNA的结合似乎在治疗后45至24小时内持续;(e)增殖细胞核抗原PCNA(一种细胞周期促进蛋白)基因转录的同时激活，因为在EGF干预后检测到该蛋白的爆发，即使在24小时内也很明显th治疗后;(f)线粒体中受体的显著积累持续了24小时;(g)细胞外基质内与胶原纤维结合的受体显著积累[63]。值得注意的是，在上述发现中，经典研究支持EGF与细胞外基质蛋白结合复合物的观点，从而通过一种自然缓慢递送系统增强细胞增殖和迁移[64]。所有这些数据表明，通过浸润传递EGF刺激EGF受体的方式满足细胞增殖的生物学要求。
增加和收敛实验在活的有机体内证据支持EGF肠外给药相对于外用能引起更广泛的组织愈合和细胞保护反应的假设。因此，在2001-2002年期间，我们启动了一项试点研究，包括29名预后不良的缺血性和神经性病变患者/伤口(瓦格纳3期和4期溃疡和未愈合的截肢残基)，在急剧清创和标准医疗干预后，每周接受三次局部EGF治疗。主要的想法是刺激肉芽组织的生长，特别是在骨骼和肌腱暴露的区域。通过在真皮表皮交界处周围浸润，伤口收缩和再上皮化似乎恢复了。在这29例患者中，17例患者在5 - 8周内恢复了皮损，免于截肢。治疗前和治疗后3 - 4周的伤口床组织活检显示，局部浸润的EGF通过促进细胞外基质成分的分泌作为肉芽生成细胞的局部归巢而产生药效学。对于缺血性伤口的特殊情况，观察到明显的血管生成反应，凋亡小体衰减和炎症浸润[65]。这项开创性的研究最终证实了局部浸润与局部给药的概念。对于这些患者治疗的伤口的严重程度，局部途径将是无用的(图3提供了保留预后治疗伤口的概念)。该研究也为局部浸润作为减少复发的可靠方法带来了希望。 The efficacy demonstrated in these patients/wounds paved the way for a progressive clinical development which culminated in a nationwide, double-blind, placebo-controlled phase III clinical trial, and the insertion of this type of intervention within the integral program for diabetic foot ulcers care [66]. A nationwide pharmacovigilance study including more than 2000 patients, confirmed the clinical usefulness of this delivery route to trigger and sustain the healing process as demonstrated during the clinical trials. In terms of figures, it was shown that infiltrated EGF elicited 75% full granulation response, 61% of wound closure, and 71% reduction of amputation-relative risk, as well as positive benefit-risk balance. Of paramount clinical and social relevance is that recurrences were reported as an exceptional event (approximately 5%) upon a 12-month follow-up period [67,68] which had been anticipated since the proof-of-concept trial. Irrespective to the primary healing efficacy for different therapeutic modalities, recurrence rates remain disproportionately high. Recent investigations disclose that roughly 40% of patients have a recurrence within 1 year after ulcer healing, almost 60% within 3 years, and 65% within 5 years [69]. Other international groups who have introduced EGF intralesional infiltration in the daily practice converge to report that EGF infiltration triggers an exceptional healing response with low amputation rates [70-72].
图3。EGF在神经性和神经性损伤中作用的临床证据
早在1989年，重组人EGF就在组织修复领域进行了临床评估[73]。与大多数生长因子一样，EGF在伤口修复过程中刺激细胞增殖、迁移、细胞外基质合成、细胞存活、表型重编程和局部血管生成。早期的基础研究表明，这些事件在恶性转化过程中也可由GFs诱导[74]，这一事实引起了人们的关注，特别是在不同癌细胞系的条件培养基中发现了一些GFs[75,76]，并且在一些GFs受体编码基因与病毒致癌基因之间观察到同源性[77]。在大多数人类上皮肿瘤中，EGF受体被扩增或过度表达，其信号系统以“功能获得”的方式被解除调控[78,79]。与EGF在肿瘤生物学中的研究同时，其临床应用也在扩大，包括对患者进行系统重复给药，并取得了成功的结果[80]。EGF已被口服[81]、全身使用[82,83]、经直肠使用[83]，以及局部使用，包括烧伤创面，烧伤创面是众所周知的鳞状癌的底物[84]。据我们所知，1975年首次对Zollinger-Ellison病患者进行了EGF的系统性干预[81]，而在最近的临床应用中，EGF局部浸润到顽固性糖尿病足部伤口中，持续5至8周[31,65,84]。
令人信服的研究表明，即使在药理学浓度下，EGF过度暴露也不会引发恶性转化，其“促进”作用也存在争议。相反，EGF可能在一些实验性上皮肿瘤中诱导细胞凋亡[21,85,86]。与血小板衍生生长因子(PDGF)不同，EGF不是癌基因衍生产物，似乎也不具备不可逆转化细胞的能力[85,86]。这些观点得到了来自不同转基因模型的证据的支持，这些模型明确支持，除了肝脏靶向构建引起肝癌发生外，先天过度暴露于EGF不会在动物中引起肿瘤。
在近30年的EGF临床应用中，没有证据表明任何这些治疗性和重复的药物浓度的EGF干预，以及通过上述任何途径与致癌有关。其中一些研究包括6-12个月至4年的随访期;后者代表了egf介导的长期不良反应的适当生物学窗口[67,68]。同样，在使用EGF或其他肽生长因子之前，应根据个人和家庭背景，并在利益/风险平衡的基础上仔细选择患者。事实上，这一规则通常适用于许多批准的药物的临床实践。
皮肤细胞无法躲避糖尿病的生化紊乱，在成纤维细胞、血管细胞和角化细胞中留下印记。同样重要的是，高血糖及其相关副产物对间充质干细胞的损伤。即使在理想的体外培养条件下，糖尿病受试者的皮肤细胞也表现出异常行为和较短的复制寿命，反映出衰老表型。这种在细胞记忆中保留的复制难治性是伤口慢性化的主要原因之一。糖尿病伤口在概念上是发炎的，分解代谢的，并且是循环促炎细胞因子和氧化自由基的额外来源，建立了一个自我延续的循环。最近，随着最近从糖尿病伤口领域释放的十几种miRNA的鉴定和表征，这一图景进一步完善。这些伤口的微环境已被证明在物理化学完整性和生理学方面对生长因子及其受体是不利的。这种生长因子缺陷与细胞衰老的早期发作有关。
生长因子的发现开启了伤口愈合生物学的新时代，为治疗顽固性、难以愈合的伤口带来了希望。尽管最初的承诺是最佳的伤口管理，尽管多年的研究努力，生长因子并没有征服最终的赞誉在临床装备。对于EGF的特殊情况，它是在急性和慢性伤口局部管理使用的第一行。之后，在基础和临床研究中，结果要么是有争议的，要么是中性的。尽管有这些结果，但它在大多数上皮和间充质来源细胞的有丝分裂承诺中的内在生物学效力是毫无疑问的。关键的是它在胚胎发育过程中的作用——因此，获得分化表型是其生物学特性之一。基于EGF在大鼠后肢局部浸润的实验具有开创性和图形性，表明在明确的组织愈合反应方面，局部和浸润传递途径之间存在很大差距。今天，这些实验在治愈、低复发率、减少截肢和延长生存期方面成功地治疗了20多万糖尿病患者。
这种局部浸润手术似乎可以确保长时间的EGF生物活性，从而强化了EGF可用性的时空控制和当地停留时间的概念，这是其作为再生替代品临床成功的相关必要条件。最后，我们认为生长因子是生物“授权”分子，在再生医学中具有广泛的药理潜力;我们只需要从它们身上学到更多，知道如何、何时、何地将它们的信息传递给细胞。
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收稿日期:2019年2月2日
接受日期:2019年2月13日
发布日期:2019年2月20日
©2019 Berlanga-Acosta J.这是一篇根据知识共享署名许可条款发布的开放获取文章，该许可允许在任何媒体上不受限制地使用、分发和复制，前提是注明原作者和来源。
表皮生长因子(EGF)病变内浸润:从工作台到糖尿病溃疡细胞。integrated Mol Med 6 DOI: 10.15761/IMM.1000354
基因工程和生物技术中心，哈瓦那，古巴
图1所示。糖尿病患者伤口慢性化的推测机制
由高血糖和其他与糖尿病相关的分子紊乱引起的高水平氧化应激有可能促进过早衰老。因此，糖尿病微环境有利于衰老。因此，衰老是一种终有丝分裂的命运，细胞在生长因子的作用下失去了增殖能力。我们认为糖尿病相关的分子疾病可以通过直接的DNA损伤(即活性氧)诱导端粒磨损和复制性衰老。线粒体DNA也是氧气的目标，氧气逐渐使线粒体损伤和自由基溢出持续存在。因此，表观遗传力似乎上调了p53-p21和/或p16Ink4a-pRb的过表达，从而实现了衰老程序。细胞阻滞，促凋亡，表现出异常形态。除此之外，被称为衰老相关分泌表型的促炎反应也被检测。这种SASP表型包括促炎细胞因子和蛋白酶的分泌，导致肉芽组织生长不良。
图2。神经性糖尿病足溃疡肉芽组织细胞增殖周期效应
三个切片(≈2-3mm)的长度是免疫组织化学区分在活检材料中，通过免疫标记抗体对禁止素作为细胞周期负调节;在生长因子刺激下，Cyclin D1作为控制G1-S转变的主开关。活性egf受体在酪氨酸1197中磷酸化，作为该受体多种生理功能的关键底物。在伤口最表层对应的第1节，禁止素要丰富得多。相反，Cyclin D1和EGFR Y-1197出现边缘标记。值得注意的是，增生性细胞周期蛋白D1和EGFR的磷酸化形式在第3节-伤口最深处大量检测到，而没有检测到禁止素。来自Jorge Berlanga-Acosta等人，Biomed Res International。卷2017，文章编号2923759。https://doi.org/10.1155/2017/2923759(经许可)。
图3。EGF在神经性和神经性损伤中作用的临床证据
