看看最近的文章

摘要

背景:遗传变异的表型效应预测是遗传咨询中的一个有用工具。然而，在凝血因子VII (FVII)缺乏症中，基因型和表型之间没有直接的相关性，因为与特定遗传变异相关的剩余FVII凝血剂(FVII:C)活性并不总是能解释所观察到的临床症状。

摘要目的:为了更好地描述基因型与临床表型之间的相关性F7我们报告一例FVII:C活性不足的家族病例。

结果与讨论:在先证者参加的一次遗传咨询中，我们注意到了正在调查的病例，因为她想知道，鉴于对乳腺癌的熟悉程度，她携带BRCA1/2致病变异的概率。谱系分析表明，先证者及其两个儿子除有癌症易感性外，均有复发性自发性出血。他们的凝血途径分析表明FVII:C活性降低，模式模仿常染色体显性遗传。

渊源者F7测序结果显示:C . 1088c >A (p.Pro363His)、C .- 326_325inscctatatcc、C .- 122t >C和C . 1238g >A为杂合子。对她儿子的分子分析强调c.1088C>A变体是反式构型。仅C . 1088c >A变异的发生与36%的FVII:C残留活性相关。相反，当该变异与C .- 326_325inscctatatcc、C .- 122t >C和C . 1238g >A单倍型呈复合杂合时，FVII:C残馀活性进一步萎缩至22%。

C . 1088c >单倍型单独决定了最显著的FVII:C活性降低，然而，当与C .- 326_325inscctatatcc、C .- 122t >C和C . 1238g >A单倍型联合发现时，可以观察到对FVII:C活性表型的加性影响。

关键字

凝血因子，因子vii活性，单倍型，部分凝血活酶时间，凝血酶原时间

生活必需品

FVII缺乏症的非典型临床表型。

的家族内分析F7遗传改变和相关凝血活性缺陷。

两者的结合F7等位基因及其对FVII的加性影响:C活性降低。

家族内筛查对突出新型c.1088C >a的重要性F7遗传变异及其对表型输出的影响。

简介

先天性因子VII缺乏症是一种罕见的出血性疾病，估计患病率为50万分之一。这种情况的临床表现非常多变，可表现为无症状或出血、牙龈出血、月经过多、血肿和血尿等体征。最严重的临床特点是复发性关节出血、脑、胃肠出血和手术过程中出血。

凝血酶原时间(PT)延长，正常活化部分凝血活酶时间(aPTT)和FVII凝血剂(FVII:C)活性低于70%被认为是这种情况的指示性因素[2,3]。然而，出血表现的严重程度仅与残余血浆FVII:C活性部分相关，此外，FVII:C活性广泛且不谐的手术范围被提出用于评估出血风险。FVII:C活性高于8%通常与低自发出血风险[4]相关。相反，在创伤、手术和怀孕情况下，介于15 - 20%的FVII:C活动度可能有利于出血[5]，而整体FVII:C活动度高于20%，即使在手术过程中也应保证安全[6]。

携带杂合变异的个体F7基因一般无症状，表现为常染色体隐性遗传模式。事实上，只有约20%的携带者表现出轻微的鼻出血、牙龈出血和月经过多[7]等症状，尽管他们在一生中不太可能出现显著的临床症状。

在本报告中，我们介绍了一个家庭，先证者和她的两个儿子都表现出与低FVII:C活性相关的临床症状，模仿常染色体显性遗传模式。为了建立这些变异对FVII:C活动的贡献效应，我们描述了与FVII:C之间的相关性F7基因型和实验室和临床调查。

材料与方法

样品收集

所有受试者均签署书面知情同意书。以0.1 mol/L柠檬酸三钠缓冲液为抗凝剂，采用标准无创伤静脉穿刺技术采集先证者及其两个儿子的血样。

混凝试验

所有家族成员的FVII:C活性是用人重组蛋白和牛凝血活蛋白测定的。PT、aPTT和FVII:C活性是在ST4凝血仪(diagnostics Stago, Asnieres, France)的血浆标本中通过一级半自动生物测定法测定的。结果以制造商提供的标准血浆活性的百分比表示。根据制造商的说法，PT和aPTT的正常范围是70-100%和30-40秒，而FVII:C在人重组和牛凝血活酶试验中的正常范围是80.0-120.0%，在凝血试验中的正常范围是70.0 -120.0%。

DNA分析

使用Qiagen DNA提取试剂盒(Qiagen, Dusseldorf, Germany)从全血中提取所有患者的基因组DNA。下一代(NGS)/大规模并行测序(MPS)的编码区域F7使用Illumina定制面板(Illumina, San Diego, CA 92122)进行基因检测。要么大量删除，要么重复F7多重连接酶依赖探针扩增扫描(MLPA) (SALSA P207-F9 probemix-MRC-Holland)检测基因。的5 '非翻译区域(5 ' utr)中的变体F7基因直接测序，如前所述[8]。两个儿子都只被筛选为先证者中确定的变异。为了研究潜在的表型作用F7我们使用了以下信息预测工具:SIFT (v6.2.0):(http://sift.jcvi.org)、polyphen2 (http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/)及PROVEAN (http://provean.jcvi.org）.

结果与讨论

除了乳腺癌易感性外，先证者之前还抱怨过鼻出血、月经过多、牙龈出血和自发性血肿，她的两个儿子都患有复发性自发性出血。

先证者的PT分析结果明显低于正常范围。人重组和牛凝血活酶试验结果表明，FVII:C活性分别为33.7%和11.9%，而凝血法测定FVII:C活性为22%。因此，假设FVII:C活性趋势可能遵循常染色体显性遗传模式。我们决定将实验室和基因调查扩展到患者的后代。

头胎表现为偶尔自发性出血，PT和aPTT在正常范围内。人凝血活素试验和牛凝血活素试验的FVII:C活性分别为88.7%和63.5%，凝血试验的活性为61%。相反，二胎表现出更严重的症状，以鼻出血、牙龈出血和自发性血肿为特征，FVII:C活性明显下降，人凝血活蛋白试验分别为47.9%和20.6%。相反，凝血测定技术显示活性降低约36%(表1)。

表1。家族成员的基因型和实验室特征显示

PT:延长凝血酶原时间;aPTT:活化部分凝血活酶时间;FVII:C: FVII凝固活性。

的F7先证基因测序检测到C . 1088c >A (p.Pro363His)、C .- 326_325inscctatatcc、C .- 122t >C和C . 1238g >A 4个杂合子，MLPA分析均正常扩增F7基因外显子。对其启动子和外显子9进行分子分析F7其中一个儿子C . 1088c >A (p.p pro363his)变异为杂合，另一个儿子C .- 326_325inscctatatcc、C . 122t > C和C . 1238g >A单倍型均为杂合。通过SIFT(得分:0.13)、polyfen -2(概率:0.01)和PROVEAN(得分:-1.16)预测c.1238G>A变异为良性/中性。在网上预测工具。相比之下，c.1088C>A变体被SIFT(得分:0.00)、polyfen -2(概率:1)和PROVEAN(得分:-8.342)预测具有破坏性。FVII缺陷的基因型和表型之间的相关性尚不清楚，因为残留的血浆FVII活性似乎不能解释出血素质[9]的严重程度。一般来说，该疾病表现为常染色体隐性遗传，尽管20%的杂合携带者表现为轻微出血[8]。

在我们的病例中，先证者和她的两个儿子都表现出FVII缺陷的临床和实验室迹象，因此模仿了常染色体显性遗传模式。

分子分析F7在先证者及其后代中执行的基因使我们能够确定C . 1088c >A变体与C .- 326_325inscctatatcc、C .- 122t >C和C . 1238g >A反式配置的单倍型相关(图1)。

图1所示。先证者和她的后代之间变异分离的示意图。

c.1088C>A是一个在国际疾病参考数据库和Ensembl人群数据库中均未报道的新变异。这种核苷酸密码子(CCC)在系统发育上高度保守，这表明它可能参与维持FVII活性。具体来说，它导致脯氨酸363 (CCC)被组氨酸(CAC)在蛋白酶域的残基取代F7基因，被认为是有害的在网上工具。脯氨酸和组织氨酸可以被认为只有适度的物理化学差异(Grantham dist.:77(0-215)，然而，值得考虑的是脯氨酸具有与α - n刚性环结构相关的特殊约束构象，它在蛋白质链中的存在可能强烈影响蛋白质二级结构。因此，用较少约束的组氨酸残基取代脯氨酸可以增加蛋白链的自由度，从而影响FVII蛋白酶活性。

c.1238G>A变异导致精氨酸发生变化，在413位(p.Arg413Gln)有甘氨酸残留，主基因预测为良性/中性在网上工具。既往研究表明，这种基因变异处于杂合状态时，可导致血浆FVII:C活性降低约25-30%[10-15]。然而，其净贡献仍不清楚，因为它与c.- 326_325inscctatatcc处于联动不平衡状态。C - 122t >C与C - 326_325inscctatatcc变体的完全关联可能进一步复杂化了FVII:C活性的基因型效应，这可能解释了C - 326_325inscctatatcc的启动子活性的强烈降低F7基因[16]。

先证者和她的两个儿子之一的表型之间的家族内比较使我们能够确定，杂合状态下的C . 1088c >A变体是FVII:C活性降低的最重要的遗传特征，因为它与凝固测定法评估的36%的残留活性有关。事实上，当该遗传变异与C .- 326_325inscctatatcc、C .- 122t >C和C . 1238g >A单倍型呈复合杂合度时，剩余活性进一步降低至22%。

因此，变异C . 1088c >A与C .- 326_325inscctatatcc、C - 122t >C和C . 1238g >A单倍型表达不同，主要导致FVII:C活性降低。然而，观察到的FVII:C活性下降表明两者的结合F7基因等位基因对FVII:C活性的抑制具有加性作用，即使没有相关的临床意义[17,18]。有趣的是，C .- 326_325inscctatatcc、C .- 122t >C和C . 1238g >A单倍型对FVII:C活性下降的净影响大于预期(39% vs 25-30%)，使其组合效应的预测变得困难。

尽管个体间存在差异，但本研究的力量是通过采用同质分析方案对所有家庭成员进行同时分析来代表的，以便更好地建立对FVII:C活性的不同贡献影响。总之，我们首次报道了C . 1088c >A变异与最常见的C . 326_325inscctatatcc、C . 122t >C、C . 1238g >A单倍型的组合，并通过一个相加模型描述了它们以前从未分析过的对FVII:C活性的影响，这可能有助于更好地分类观察到的临床表型。

致谢

作者想对先证者和她的整个家庭表示感谢，感谢他们为实现这项研究而提供的可用性。

利益冲突的披露

作者声明没有利益冲突。

作者的贡献

研究理念与设计:G. Miolo;样品处理和测量:G. Tessitori和A. percepppe;数据处理和解释:G. Miolo, G. Tessitori和A. percepe;手稿起草:G.米奥罗;对手稿的批判性修订:L. Caggiari, M. De Zorzi, M. Tedeschi, D. A. Santeufemia, A. Steffan, V. De Re和G. Corona。

参考文献

1. Giansily-Blaizot M, Aguilar-Martinez P, Biron-Andreani C, Jeanjean P, Igual H，等(2001)37例非亲缘关系遗传性因子VII缺乏患者的基因型和表型分析。Eur J Hum Genet9: 105 - 112。
2. Perry DJ(2002)因子VII缺陷。Br J血醇118: 689 - 700。(Crossref)
3. Sevenet PO, Kaczor DA, Depasse F(2017)因子VII缺陷:从基础到临床实验室诊断和患者管理。关闭J Int Acad临床应用血栓23日:703 - 710。
4. giansly - blaizot M, Verdier R, Biron-Adréani C, Schved JF, Bertrand MA，等(2004)42例遗传性因子VII缺乏患者的生物学表型分析:生物学检测能否预测出血风险?Haematologica89: 704 - 709。
5. 张晓玲，李丽娟，李丽娟，杨晓娟，李丽娟，等。(2015)严重因子VII缺乏症的长期预防。血友病21日:812 - 819。(Crossref)
6. 李志强，李志强，李志强(2004)隐性遗传性凝血功能障碍。血104: 1243 - 1252。
7. 王晓燕，王晓燕，王晓燕，等。(2008)欧洲F7基因突变A294V纯合和杂合人群中因子七缺乏临床表现的差异性。Haematologica93: 1273 - 1275。
8. Wulff K, Herrmann FH(2000)因子VII缺乏中因子VII基因的22个新突变。哼Mutat15: 489 - 496。(Crossref)
9. Mariani G, Bernardi F(2009)因子VII缺乏。Semin血栓止血器35: 400 - 406。(Crossref)
10. Bernardi F, Marchetti G, Pinotti M, Arcieri P, Baroncini C，等(1996)血浆中因子VII基因多态性约占因子VII水平变异的三分之一。动脉血栓血管生物学16: 72 - 76。
11. 陈晓明，陈晓明，陈晓明，等(2000)冠心病患者血清因子VII基因多态性与心肌梗死风险的关系。N英语J医学343: 774 - 780。
12. Hunault M, Arbini AA, Lopaciuk S, Carew JA, Bauer KA (1997) Arg353Gln多态性降低凝血因子VII水平。体内和体外研究。动脉血栓血管生物学17: 2825 - 2829。
13. Ken-Dror G, Drenos F, Humphries SE, Talmud PJ, Hingorani AD等(2010)F7基因对英国男性循环因子VII、凝血激活标志物和冠心病发病的单倍型和基因型影响。血栓凝血8: 2394 - 2403。
14. Mtiraoui N, Aboud N, Bouraoui H, Haizem S, Gris JC，等。(2005)健康突尼斯人R353Q降低凝血因子VII血浆水平，而-323P0/10启动子多态性无影响。Am J Hematol79: 16。
15. Rabelo FY, Jardim LL, Landau MB, Gadelha T, Corrêa MFB，等。(2015)凝血因子VII低活性水平的分子基础:巴西队列。J世界联邦血液病21日:670 - 680。
16. Sabater-Lleal M, Chillón M, Howard TE, Gil E, Almasy L，等。(2007)F7基因启动子遗传变异的功能分析。动脉粥样硬化195: 262 - 268。
17. Hahn LW, Ritchie MD, Moore JH(2003)用于检测基因-基因和基因-环境相互作用的多因素降维软件。生物信息Oxf英语19日:376 - 382。
18. Moore JH(2003)上位性在确定人类常见疾病易感性方面的普遍性质。哼她56: 73 - 82。