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摘要

目的:好氧生物具有抗氧化防御系统，处理好氧呼吸和基质氧化产生的活性氧(ROS)。人们认为自由基、脂质过氧化和抗氧化防御在各种组织损伤中发挥作用，就像在某些类型的病毒性肝炎中一样。

材料与方法:我们测定了18例HCV受试者的SOD、CAT、GPX活性，并将其值与18例健康志愿者的SOD、CAT、GPX活性值进行对比。由医生根据详细的临床病史、临床检查及其他相关生化检查进行诊断。

结果:HCV患者的SOD、CAT和GPX活性分别为(平均±标准差)2.75±0.75 U/mg prot, 19.25±3.4 U/g Hbx10⁴， 78.25±23.23 U/g Hb，对照组为3.76±1.53 U/mg prot, 13.71±1.6 U/g Hbx10⁴，分别为63.26±6.9 U/g Hb。

结论:我们的结果显示丙型肝炎对人的抗氧化状态有轻微影响。SOD水平降低，CAT和GPX水平升高。本研究还提示氧化应激在病毒性肝炎肝损伤机制中可能发挥的作用。

关键字

丙型肝炎，抗氧化剂，超氧化物歧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶，过氧化氢酶

简介

好氧生物产生活性氧(ROS)作为好氧呼吸和基质氧化的结果。低水平的ROS有助于许多过程，包括细胞分化、细胞生长、凋亡、免疫和抵御微生物。相反，高水平的ROS会导致氧化应激，这可能导致代谢功能障碍和大分子、细胞和组织损伤。为了应对活性氧的破坏性活动，需氧生物产生抗氧化防御系统。酶抗氧化防御包括SOD、GPX和CAT[1-5]。

超氧化物歧化酶是一种催化两种超氧阴离子(O₂^。)变成过氧化氢和分子氧。它在一定程度上保护组织不受超氧自由基的危害。CAT酶水解过氧化氢(H₂O₂)变成水和分子氧。GPX利用谷胱甘肽(GSH)催化氢过氧化物的还原。事实上，谷胱甘肽代谢是最基本的抗氧化防御机制之一[6,7]。

这些酶的活性在疾病的进展中起着重要作用，因此在慢性HCV的治疗中，抗氧化治疗可能有用，并应加入联合治疗。

丙型肝炎病毒是慢性病毒性肝炎的主要病原体。慢性丙型肝炎可在20-30年的时间内发展为肝硬化并最终发展为肝细胞癌。HCV引起细胞损伤的机制尚不清楚。不同的机制包括免疫肝损伤、由不同病毒产物介导的直接细胞毒性和氧化应激诱导在[6]感染中起致病作用。

本研究的目的是检查慢性HCV和氧化/抗氧化状态之间的关系。为此，我们研究了HCV患者红细胞SOD、CAT和GPX作为抗氧化酶的水平，并将结果与同龄健康对照组进行了比较。

材料和方法

我们检测了18例41-55岁的慢性病毒性肝炎患者(男9例，女9例)的SOD、CAT和GPX活性。未接受抗病毒治疗组，以及这些参数与病毒载量、肝纤维化评分和肝脏坏死炎症的关系。他们都不是吸烟者，也没有任何已知的病理，在采样时正在服用类固醇或治疗贫血的铁等药物。对照组取18例健康体检者血清。所有受试者在午夜后禁食，第二天早上采集血液。

该研究在土耳其阿达纳库库洛瓦大学Balcali医院医学院进行。它得到了阿达纳库库洛瓦大学医学院人体医学实验伦理委员会的批准。受试者参加研究的条件是获得书面知情同意书。这项研究是根据世界医学协会在爱丁堡会议上批准的《赫尔辛基宣言》进行的(伦理决定号:2008/11)。

患者组女性平均年龄47.7±4.8岁，男性平均年龄47.7±3.0岁。对照组女性和男性的平均年龄分别为47.6±5.5岁和47.3±4.5岁。

病毒载量和组织病理学结果

用聚合酶链式反应技术测定病毒载量。肝脏组织病理学结果根据Ishak-Knodell评分分为坏死-炎症活性和纤维化。

生化试验

在禁食8小时后的上午8点至9点之间采集的所有静脉血样本都收集在聚苯乙烯管和含有肝素的真空容器中。试管以1500转/分离心15分钟。然后取出血清，在-20℃保存，直到分析。

SOD活性测定

按Sun法测定SOD活性et al。[8]。本试验采用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶作为超氧化物发生器，抑制硝基蓝四唑还原，测定SOD活性。用560nm分光光度法测定了福马赞的产量。

CAT活性测定

CAT活性按Lartillot测定et al。[9]，它是Bergmeyer描述的方法[10]的修改。采用比吸收法在240nm处测定CAT活性。CAT活性测定在含有2.5ml底物的反应混合物中，底物由10mM过氧化氢组成，在pH值为7.0的50mM磷酸盐缓冲液中。反应在25℃下进行2min，加入0.5ml 1M HCl停止反应。CAT活性以(U/gHb)x10表示⁴

血红蛋白测定

血红蛋白的测定按白法进行et al。[11]。

GPX活性的测定

GPX活性测定采用Beutler E[12]法。GPX的估计基于以下原则:GPX催化异丙酚过氧化氢氧化谷胱甘肽。在谷胱甘肽还原酶和NADPH存在的情况下，氧化的谷胱甘肽立即转化为还原态，同时NADPH氧化为NADP⁺．测量了在340 nm处吸光度的下降。

统计分析

采用SPSS软件包(11.0 Version for Windows)进行统计分析。数据以均数±标准差(SD)表示。用于两组连续变量的比较，独立样本t以及使用。的概率值。P<0.05为差异有统计学意义。

结果

HCV患者与对照组的SOD、CAT和GPX活性(平均值±标准差)为2.75±0.75 U/mg prot。， 19.25±3.4 U/g Hbx10⁴， 78.25±23.23 U/g Hb, 3.76±1.53 U/mg prot, 13.71±1.6 U/g Hbx 10⁴， 63.26±6.9 U/g Hb(表1)。

表1。HCV患者和对照组的SOD、CAT和GPX活性

参数	n	年龄(年)	草皮 (U / mg Prot)。	猫 (U /奸)x104	GPX (U /奸)
控制	18	47岁的5±4 9	3, 76±1,53岁	13、71±1、6	63年,26±6,9
病人	18	47岁的8±3 9	2, 75±0,75	19日,25±3、4	78年,25±23日2
			p < 0.05	p < 0.0001	p < 0.05

此外，在慢性病毒性肝炎患者中，这些标记物与病毒载量(p>0.05)、坏死炎症和肝脏纤维化之间没有发现显著相关性。基因型与人口学、临床和组织学特征相关。所有患者均感染1型。

讨论

来自几项研究的报告提供了明确的证据，表明疾病的类型和严重程度与血液中的抗氧化水平之间存在良好的相关性。在许多疾病中，包括心血管疾病、神经系统疾病、肺部疾病和各种恶性肿瘤[1]，都记录了这种关系。

在本研究中，HCV患者的SOD活性明显低于对照组(p<0.05)。研究Yasuyamaet al。报告急性和慢性肝炎伴脂肪变性患者肝组织中SOD水平下降，与不同病因性肝炎性疾病患者[13]比较。有些疾病的发展可能是由于SOD水平的降低。这一理论得到了李教授的实验验证。他发现，没有编码Mn-SOD基因的小鼠在出生10天后死亡，并发展为心肌病，肝脏和骨骼肌[14]中脂质积累。活检标本中超氧化物歧化酶水平的降低可能提示酶从受损的肝细胞中释放或合成减少。当抗氧化酶的活性保持在一定比例时，它们的相互作用是有效的。其中一种活性的改变可能是细胞肿瘤转化的原因。

此前几位研究人员的研究结果相互矛盾。Irshadet al。[1]和Karabulutet al。[6]报告慢性丙型肝炎患者SOD活性降低。另一方面，Koet al。[15]报告HCV中SOD活性升高。我们的结果与这些报道的结果一致[1,6]。

Oberley和Sun提出的假设是，从正常细胞中选择SOD和CAT水平较低、GPX活性变化、GST活性升高的细胞，最终形成肿瘤[16]。这些机制与致癌性之间的关系尚未得到解释。在实验模型的基础上，解释了氧化应激可能导致肿瘤转化。因此，在HBV和HCV肝硬化过程中发生原发性肝癌可能与机体抗氧化屏障平衡紊乱有关。

另一方面，与对照组相比，HCV患者CAT活性增加具有统计学意义(p<0.0001)。与对照组相比，HCV患者GPX活性明显升高(p<0.05)。

Chrobatet al。[17]报告慢性乙型和丙型肝炎患儿SOD和CAT活性降低，GPX活性升高。et al。[18]在HCV患者CAT活性与对照组之间无差异，而在Karabulut患者中无差异et al。[6]报告慢性HCV患者CAT活性增加。

Czeczotet al。[19]报告肝硬化中GPX活性增加，相反，Koet al。[15]发现病毒性肝炎中GPX活性降低。另一方面，Czuczejko，et al。HCV患者的GPX活性与对照组比较，[20]无差异。

结论

这些结果表明丙型肝炎对人的抗氧化状态有轻微影响。SOD水平降低，CAT和GPX水平升高。本研究还提示氧化应激在病毒性肝炎肝损伤机制中可能发挥的作用。

鸣谢

本研究得到FEF研究基金的支持。BAPYL19 Cukurova大学。

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