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摘要

在结肠息肉样病变的小活检中区分腺瘤、粘膜内癌和浸润性癌有时会给病理学家带来挑战。在我们的研究中，我们旨在评估CAM5.2和caldesmon这两种免疫组化染色剂的染色模式和效用。来自57例CAM5.2和caldesmon患者的常规结肠息肉活检标本由三位病理学家审查。我们发现CAM5.2和caldesmon对这些结肠息肉样病变的分类非常有用。CAM5.2强调了单细胞和筛状结构。Caldesmon对结肠黏膜下层浸润性肿瘤周围的固有层、平滑肌和间质进行了不同形态的染色。首先，在固有层，caldesmon大多为阴性，腺体和小血管周围有暗棕色线。其次，在粘膜肌层平滑肌内，caldesmon轻染细胞质，呈实性和弥漫性。第三，在粘膜下层的纤维增生区域，caldesmon强烈地染色细胞质，在细胞质中间可见清晰的间隙或凹槽(tram-tracking外观)。我们在这项研究中描述了我们的发现，希望更多的病理学家将在他们的常规实践中使用这两种染色剂来可靠地诊断结肠癌侵袭。

关键字

结肠活检，腺瘤，粘膜内癌，浸润性腺癌，CAM5.2，caldesmon

介绍

结肠活检是大多数病理实践中非常常见的病理标本。大多数结肠活检的目的是排除内镜检查时胃肠道息肉样病变的恶性肿瘤。根据WHO消化系统肿瘤分类4^th如果病变局限于固有层而没有通过粘膜肌层侵入粘膜下层，则几乎没有转移的风险。因此，局限于粘膜(癌前)的发育不良病变称为腺瘤(低级别上皮内瘤变或LGIN)或粘膜内癌(高级别上皮内瘤变或HGIN)。浸润粘膜下层(恶性)的腺体发育不良病变称为浸润性腺癌(IC)。区分这三种实体(LGIN, HGIN和IC)是至关重要的，因为HGIN或IC患者可能需要结肠切除术而不是息肉切除术。这一重要任务有时会对病理学家构成挑战，特别是在小的、碎片化的活检中。

传统上，HGIN是通过发现比LGIN更恶性的结构复杂性和/或细胞异型性来识别的[1]。高级结构的变化显示了经典的筛状结构，背靠背拥挤的腺体。另一方面，浸润性癌是通过评估发育不良腺体周围基质中的结缔组织增生或结缔组织增生反应而确诊的。粘膜下层肿瘤周围的基质成纤维细胞被激活并转化为肌成纤维细胞[2]。

免疫组化（IHC）染色在确定胃肠道肿瘤的起源和分化方面非常有用[3]。然而，很少有关于IHC染色在帮助区分良性和恶性结肠息肉中的作用的出版物[4]。在我们的研究所，我们创建了一个由CAM5.2和caldesmon组成的染色小组来帮助这项工作。

CAM5.2是一种低分子量细胞角蛋白染色剂，通常用于突出上皮细胞。据报道，CAM5.2可用于检测各种癌中的淋巴结微转移或孤立的肿瘤细胞[5]。

Caldesmon是一种调节平滑肌细胞肌球蛋白活性的蛋白质。caldesmon在良性和恶性病变中的作用已被研究。根据最近的文献，该染色可用于区分平滑肌细胞与其他细胞，如皮肤病变中的肌成纤维细胞或子宫内膜间质瘤中的间质细胞[6,7]。Caldesmon在鉴别pT3和pT4大肠癌[8]方面也有研究。

在我们的研究中，我们评估了上述任务中这两种免疫组化染色的模式和效用。据我们所知，这是第一个同时评估CAM5.2和caldesmon的研究，以评估它们在区分结肠息肉样恶性肿瘤的高等级发育不良和侵袭性方面的有用性。

材料和方法

2016年1月至2018年7月(时间2.5年)，结肠息肉活检57例，CAM5.2和caldesmon。根据我们病理学家的共识，两种免疫组化染色是在对he和e染色标本是否异常增生细胞表现出高等级特征或异常增生细胞是否在诱导肌成纤维细胞的基础上侵犯固有层或粘膜下层的情况下进行的。

4 μ m厚福尔马林固定石蜡包埋组织进行免疫组化。使用了以下抗体:CAM5.2 (Roche, Pleasanton, CA)和caldesmon(克隆E89;CellMarque,帕萨迪纳市,CA)。用热诱导表位检索法将组织切片与一抗共孵育30分钟，随后用磷酸盐缓冲盐水洗涤，然后与与辣根过氧化物酶结合的二抗共孵育。整个染色过程使用Ventana Benchmark XT完成。

综述了57例的幻灯片由三个病理学家,一位居民(LN)和两个参加(科幻和PJ),寻找单个细胞的发现,筛状结构,和多模式的协助IHC染色(表1)。例随机和评论者不知道案件的最终病理诊断。

表1。病理学家用来评估57例患者的三个标准的模板。病理学家不知道最终诊断(盲法研究)。是否有肯定的发现已作了标记

箱号	单细胞	筛状花纹	粘连形成
例1		√

结果

57例中，9例最终诊断为LGIN, 16例诊断为HGIN, 32例诊断为IC。

我们发现CAM5.2和caldesmon对这些结肠息肉样病变的分类非常有用。CAM5.2突出显示了单细胞和筛状结构（图1）。Caldesmon对固有层、平滑肌和促结缔组织增生基质进行了不同形态特征的染色（图2）。

图1所示。CAM5.2的应用。a . CAM5.2 (40x)突出显示HGIN病例中的单细胞。B. CAM5.2 (4x)突出了HGIN案例中的筛状结构

图2。caldesmon的效用。A. (20x) Caldesmon染色固有层(上图)，小血管周围呈暗棕色细线，平滑肌(下图)为弥漫性实片状。b (x) 20日Caldesmon彩色粘连形成(左)强烈和清晰的空间看到在细胞质染色固有层(右)与细线c (2 x))低功率给的印象villotubular腺瘤与优质的焦点发育不良(右下角)d (20 x))高功率相同的集中显示,基质混合炎症E. (20x) Caldesmon染色细胞质，可见清晰的间隙，证实了纤维组织增生，并诊断为绒毛管腺瘤引起的侵袭性腺癌。结缔组织细胞排列紧密，形成沿肿瘤细胞边界平行的增厚条带。G. (40x)纤维间质中间可见一条清晰的直线(箭头)，与纤维间质增生一致。H. (100x)多个粘连细胞胞浆内可见清晰的直线(箭头)

考德斯蒙展示了三种不同的模式。首先，在固有层，caldesmon大多为阴性，腺体和小血管周围有暗棕色线。其次，在粘膜肌层平滑肌内，caldesmon轻染细胞质，呈实性和弥漫性。第三，在粘膜下层的纤维增生区域，caldesmon强烈地染色细胞质，在细胞质中间可见清晰的间隙或凹槽。结缔组织细胞紧密排列，形成沿肿瘤细胞边界平行的增厚细胞带。

间质由增生的肌成纤维细胞组成，表明粘膜下浸润。增殖的肌成纤维细胞在细胞质中间形成一个裂隙状的未染色空间，而平滑肌细胞则在整个细胞质中呈实片状染色(图2D, 2E, 2F)。

在三位评价者的解释上没有发现明显的差异。所有9例LGIN阴性的三个标准评估(单细胞，筛状结构和纤维组织增生)。16例HGIN中2例为单细胞，16例为筛状结构。32例IC中12例为单细胞，32例为筛状结构。32例IC均表现为强烈的tramtrack型粘连，caldesmon染色阳性。9例LGIN和16例HGIN的结缔组织染色均为阴性。表2总结了阳性发现的频率。

表2。总结57例病理切片检查结果

	单细胞	筛状花纹	粘连形成
LGIN（9例）	0/9 (0%)	0/9 (0%)	0/9 (0%)
HGIN（16例）	2/16 (13%)	16/16 (100%)	0/16 (0%)
IC（32例）	12/32 (38%)	32/32 (100%)	32/32 (100%)
总数（57宗）

在57例病例中，我们发现两例HGIN病例显示单细胞特别有趣，因为发现单细胞通常是低分化癌的标准。1例行结肠切除术，另1例行结肠镜检查。在随后的两例标本中均未见肿瘤残留或侵袭迹象，符合上皮内肿瘤的诊断。

其余病例的随访结果与活检结果无明显不符。

讨论

在这项研究中，我们建立了染色的阳性模式，并随后确定了阳性结果的频率，希望更多的病理学家将在他们的常规实践中利用这两种染色来可靠地诊断结肠息肉活检中结肠癌的侵袭。在IHC染色的帮助下，在所有高级别病变和浸润性癌的病例中发现筛状结构，在所有浸润性癌的病例中发现结缔组织增生。对于难以解释H&E的结肠息肉活检，我们建议使用CAM5.2和caldesmon帮助做出和/或确认诊断。

在2/16(13%)的HGIN中发现固有层的单个细胞(图1)。在这两例病例中，单个细胞与纤维组织增生无关，细胞周围的间质和附近发育不良腺体均为固有层(图1)。因此，我们不确定是否称其为侵袭。即使这些单个细胞被认为是低分化癌,在一项研究中,后续的15例结肠低分化癌组织浸润局限于固有层显示,没有证据表明残余肿瘤入侵[9],类似于我们两种情况的跟进(见上面的结果部分)。另一种可能是这些单细胞代表错位的上皮，尽管这一术语通常用于粘膜下层的非侵袭性腺体。

在12/32(38%)的IC中发现了单细胞，略低于以往文献报道的肿瘤出芽率(41-75%[10,11])。这可能是由于我们没有对明确的恶性病例订购CAM5.2和caldesmon。多篇论文已证实肿瘤出芽与预后较差有关。通过这项研究，我们可以证实CAM5.2是评估肿瘤出芽的一个很好的染色方法。

结缔组织增生的形成，包括上皮和间质相互作用，也经常在结肠癌[12]中被研究。MMP-1、p53、E-cadherin和collagen IV IHC染色证实了纤维组织增生，以区分上皮错位的腺瘤与浸润性腺癌[4]。据我们所知，Caldesmon还没有被用于证实结肠癌中的纤维组织增生。我们认为，与粘膜下层浸润性腺癌相比，caldesmon在识别错位的上皮细胞方面也很有用。

肿瘤前沿促结缔组织增生模式的亚型也会影响结肠癌的预后[12]。根据我们的经验，caldesmon最能识别结缔组织增生，而AB/PAS可能是区分不同类型结缔组织增生的更好的染色方法，例如透明化胶原和粘液样基质。

未来的研究

我们计划研究并利用这两种染色的结合来区分胰腺肿瘤中的反应性变化和侵袭性恶性肿瘤。

参考文献

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