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摘要

背景/目的:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是世界上最常见的肝病，因此在接受肝手术的患者中经常观察到。NAFLD的病因与胰岛素抵抗有关，可发展为纤维炎性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。本研究调查了肝脏mRNA和术前血清烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)内脏脂肪素水平与NAFLD组织学、胰岛素抵抗、炎症和术后肝脏恢复的关系。

方法:对44例接受肝脏手术的患者进行NAFLD组织学评估。采集空腹血样和肝脏活检。评价胰岛素抵抗(HOMA-IR)的临床化学和稳态模型。循环内脏脂肪素/NAMPT采用酶联免疫吸附法测定，mRNA采用RT-PCR测定。使用limax方法研究了一部分受试者的术后肝脏恢复情况。

结果:Visfatin/NAMPT mRNA和血清水平与肝脂肪变性、纤维炎症、肿胀变性或胰岛素抵抗无相关性(P> 0.05,职责)。循环内脏脂肪素/NAMPT与铁氨酸相关(r = 0.325;P= 0.032)和血清铁(r = -0.342;P= 0.023)作为肝氧化应激的替代物，肝mRNA与白细胞计数(r = 0.357;P= 0.062)和肝CRP mRNA (r = 0.346;P= 0.061)。此外，循环visfatin/NAMPT与术后平均LiMAx肝脏恢复有关(r = 0.480;P= 0.044)，术后10天内达到生理肝功能能力的受试者术前血清内脏脂肪素/NAMPT升高(P= 0.014)。

结论:Visfatin/NAMPT与肝手术后的氧化应激、炎症和肝脏恢复标志物相关，但与NAFLD组织学和胰岛素抵抗无关。

关键字

胰岛素抵抗，limax, nafld，部分肝切除术，visfatin/NAMPT

缩写

ELISA:酶联免疫吸附法;HOMA-IR:胰岛素抵抗的稳态模型评估NAS: NAFLD活性评分;非酒精性脂肪肝;NAMPT: Nicotinamide-phosphoribosyltransferase;纳什:非酒精性脂肪肝炎

简介

与肥胖患病率一致，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)影响到30%的一般人群[1]。NAFLD在病因学上与胰岛素抵抗相关，通常归类于肝细胞脂肪变性和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)[1]。大约1 / 3的NAFLD病例进展为NASH，伴有肝脂肪变性、纤维化和坏死-炎症，可能导致肝硬化和肝细胞癌(HCC)[1-3]。相应的，NASH是目前围手术期患者常见的共病，与术后并发症的发生有关[4-6]。烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)内脏脂肪素由于合成烟酰胺单核苷酸而具有重要的细胞功能，最初被描述为具有模拟胰岛素效应的脂肪因子[7]。随后的研究证明visfatin/NAMPT可以在包括肝细胞和巨噬细胞在内的多种细胞中表达，而visfatin/NAMPT的胰岛素样作用受到质疑，其具有促炎特性[8,9]。visfatin/NAMPT在人类NAFLD中的作用仍存在争议[10-17]，但最近的数据表明，它对肝细胞[12]具有潜在的保护作用。本研究旨在研究肝手术患者中内脏脂肪素/NAMPT与NAFLD组织学和胰岛素抵抗的潜在关系。此外，在同一研究小组中，我们术后分析了肝功能，以评估与内脏脂肪素/NAMPT的可能联系。

方法

实验设计

我们评估了术中收集的肝脏标本中肝脏内脏脂肪素/NAMPT mRNA的变化，以及循环内脏脂肪素/NAMPT与NAFLD组织学和胰岛素抵抗的关系，这些患者因非恶性或恶性指征而接受肝脏手术。此外，visfatin/NAMPT在肝细胞中表达，与炎症和抗凋亡相关。因此，我们使用LiMAx方法评估了一个亚群的术后肝功能恢复情况，以评估与visfatin/NAMPT的潜在关联。

伦理和研究对象

研究对象是在之前的研究中纳入的，必须满足预先设定的纳入标准[18,19]。该研究得到Charité大学医院伦理委员会的批准，符合《赫尔辛基宣言》的规定。

临床特征和分析

评估病史、体重指数(BMI)、无创动脉血压、人体测量和体格检查。抽取空腹血样进行临床化学分析。应用内稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)[20]评价胰岛素抵抗。采用酶联免疫吸附法(ELISA;AdipoGen Inc .、韩国;平均测定CV: <6.0%;interassay简历:< 10%)。

楔形活组织检查

手术在一般平衡麻醉下进行，按照规定的方案取肝样本，[19]。一名盲的病理学家证实，除NAFLD外，样本均为非病理学。根据以下至少两项标准评估NAFLD的组织病理学并诊断NASH: 1) NAFLD活性评分≥5;2)存在气球变性;3)纤维化评分≥2[21,22]。无肝脂肪变性或有轻微NAFLD标准的受试者被视为非nash参照组。

LiMAx

使用¹³c标记的甲氧acetin被代谢成¹³有限公司₂通过细胞色素P450 1A2, LiMAx法通过无创呼吸试验[23]评估最大酶促肝功能能力。生理截断值为> 315µg/kg/h[23]。早期肝再生通常在术后10天内完成。我们在术前进行了基础LiMAx测试，并在术后第1、3、5和10天进行了分析。

实时聚合酶链反应

按照之前报道的[18]进行分析。引物序列为HPRT[18]的5 ' -TGACACTGGCAAAACAATGCA-3 ' /5 ' -GGTCCTTTTCACCAGCAAGCT-3 '， visfatin/NAMPT[25]的5 ' -GATCCCAACAAAAGGTCC A-3 ' /5 ' - atgatgtgctgcttcccca -3 '。

统计数据

数据为平均值±标准差。使用SPSS 16.0(芝加哥，美国)验证正态分布，必要时进行对数变换。采用Spearman秩或Pearson系数进行相关性分析，采用Mann-Whitney U检验表示效果显著。显著性定义为双侧性P< 0.05。

结果

主题

纳入44例研究对象，25%为NASH, 75%为非NASH(表1)。NASH患者HCC发生率较高，BMI和腰围、HOMA-IR、血清甘油三酯和NAFLD评分增高(P< 0.05,分别地;表1). NASH伴有丙氨酸转氨酶和铁氨酸水平升高。基础LiMAx值在>315µg/kg/h的预期生理范围内变化，但NASH组水平降低(P >0.05;表1)。

表1．研究主题的特点。

	不是纳什	纳什	P价值
n男性(%)	33 (39)	11 (36)	-
年龄(y)	58±3	60±3	0.85
体重指数(kg/m²)	24.4±0.6	32.1±2.4	< 0.001
腰围(cm)	91.1±2.4	108.3±4.6	0.002
收缩压(mm Hg)	131±4	135±5.0	0.29
舒张压(mm Hg)	71±2	76±3	0.20
c反应蛋白(mg / dl)	1.7±0.6	1.6±0.7	0.24
白细胞计数(× 103./毫米3.）	6.7±0.4	6.9±0.6	０．７５
糖化血红蛋白(%)	5.5±0.1	6.1±0.5	0.29
HOMA-IR	2.1±0.4	5.3±1.4	0.008
血清甘油三酯(mg / dl)	109.0±8.7	159.6±17.7	0.005
Bilirubine (mg / dl)	0.8±0.1	0.7±0.1	0.92
Alanine-transaminase (U / L)	39.8±8.7	60.1±10.3	0.015
Gamma-glutamyl-transaminase (U / L)	131.4±31.4	127.3±47.6	0.87
Ferritine (ng / ml)	207.9±42.0	373.5±86.4	0.021
白蛋白(mg / dl)	4.0±0.1	3.9±0.1	0.83
肌酐(mg / dl)	0.9±0.1	0.9±0.1	0.89
NAFLD活动评分(0-8)	0.9±0.1	4.0±0.4	< 0.001
肝脏脂肪变性评分(0-3)	0.6±0.1	2.1±0.2	< 0.001
气球样变性(0 - 2)	0.0±0.0	0.9±0.3	0.003
小叶炎症(0 - 3)	0.3±0.1	1.0±0.3	0.031
肝纤维化(0 - 4)	1.1±0.2	2.4±0.7	0.20
HCC诊断(%)	33	73	-
术前LiMAx肝功能(µg/kg/h)	424.5±24.1	346.0±60.1	0.36

数据以平均值±标准差或绝对值的形式给出。缩写:HbA1c，糖化血红蛋白A1c;肝癌,肝细胞癌;HOMA-IR，胰岛素抵抗的稳态模型评估;NAFLD:非酒精性脂肪肝;NAS, NAFLD活性评分。

NAFLD组织学，炎症，胰岛素抵抗标志物

通过解决NAFLD，我们观察到循环内脏脂肪素/NAMPT在肝脏脂肪变性与无脂肪变性之间没有差异(3.3±0.7 vs. 2.6±0.8;P= 0.54)，小叶炎症vs缺席小叶炎症(3.0±0.9 vs 3.1±0.7;P= 0.73)，肝细胞球囊变性与无球囊变性(2.4±0.4 vs. 3.2±0.6;P= 0.51)或肝纤维化vs.无纤维化(3.2±0.7 vs. 2.8±0.7;P= 0.70)。此外，我们根据HCC和肝手术的非恶性适应症对受试者进行分层，评估了visfatin/NAMPT，但发现了相似的水平(1.8±0.3 vs. 2.2±0.6;P= 0.90)。对于所有上述参数，肝脏内脏脂肪素/NAMPT mRNA也是如此(P> 0.05,分别地。，数据未显示)。

单因素相关分析表明，糖代谢、胰岛素抵抗和肝功能的临床化学标志物没有相关性(P> 0.05,分别地;表2)。此外，与铁离子和血清铁的显著关系变得明显(P< 0.05,分别地;表2)，以及内脏脂肪素/NAMPT mRNA与白细胞计数、肝c反应蛋白mRNA和血清铁含量的关系趋势(表2)。

表2．内脏脂肪素/NAMPT的相关性研究。重要的关联以粗体显示。

	循环 visfatin / NAMPT r (P值)	肝visfatin / NAMPT信使rna r (P值)
肝visfatin / NAMPT信使rna	-0.034 (0.86)	-
肝脂肪变性的分数	0.152 (0.33)	0.093 (0.63)
气球样变性	0.090 (0.56)	0.195 (0.30)
小叶炎症	-0.023 (0.88)	0.201 (0.29)
肝纤维化评分	-0.002 (0.99)	0.287 (0.12)
空腹血糖	-0.134 (0.39)	0.010 (0.96)
HOMA-IR	-0.055 (0.72)	0.062 (0.75)
糖化血红蛋白(%)	-0.079 (0.62)	0.293 (0.14)
c反应蛋白	0.213 (0.20)	0.032 (0.88)
白细胞计数	0.242 (0.13)	0.357 (0.062)
肝c反应蛋白mRNA	-0.120 (0.44)	0.346 (0.061)
Ferritine	0.325 (0.032)	0.224 (0.23)
血清铁	-0.342 (0.023)	-0.323 (0.082)
Bilirubine	0.042 (0.79)	-0.091 (0.63)
Alanine-transaminase	0.102 (0.51)	0.166 (0.38)
Gamma-glutamyl-transaminase	0.084 (0.59)	0.025 (0.90)
Aspartate-transaminase	0.115 (0.47)	0.088 (0.66)

Visfatin/NAMPT和LiMAx评估肝功能

41%的纳入受试者可获得完整的术后LiMAx数据。术前血清visfatin/NAMPT与术后LiMAx平均值相关(r = 0.649;P= 0.004)。即使调整了肝切除体积和BMI (P= 0.044;此外，与部分肝切除术后10天内未恢复至少315 μ g/kg/h的受试者相比，术后10天内恢复生理LiMAx值的患者术前血清visfatin/NAMPT显著升高(P= 0.014;图2)。值得注意的是，在调整BMI (P= 0.026)。

图1所示。血清内脏脂肪素/NAMPT与术后肝功能。

术后经肝切除体积调整后的酶促肝功能能力与术前血清内脏脂肪素/NAMPT相关。

图2。术后肝功能恢复的受试者术前血清内脏脂肪素/NAMPT升高。

与未能恢复生理能力的患者相比，在术后10天内达到生理酶肝功能的受试者术前血清内脏脂肪素/NAMPT更高(P= 0.014)。盒子从25 -75百分位跨度，误差条表示第10和90百分位;*,P< 0.05。

讨论

我们的研究提供了证据，证明术前循环内脏脂肪素/NAMPT水平与部分肝切除术后的术后功能恢复相关。此外，我们的研究结果并不表明visfatin/NAMPT与NAFLD组织病理学或胰岛素抵抗相关。

部分肝切除术是目前的常规手术，其残余肝功能和功能恢复显著影响临床结果。因此，寻找能够预测或影响术后肝再生的因素具有重要的临床意义。在本研究中，我们观察到术前血清内脏脂肪素/NAMPT与术后功能恢复显著相关。这一观察结果与NASH没有直接关系，因为我们没有发现visfatin/NAMPT与典型的组织病理学特征相关，这与一些[12,15,16]但并非所有[11,13]关于visfatin/NAMPT在人NAFLD中的研究相对应。后者可以通过不同的研究人群或使用不同的检测方法来解释，即检测羧基末端vs.全长visfatin/NAMPT[26]。我们发现visfatin/NAMPT与炎症替代物相关，这与其假设的炎症作用是一致的[8,9]。我们通过观察内脏脂肪素/NAMPT与肝脏氧化应激替代物，即血清铁和铁蛋白[27]之间的关系来扩展后者。有报道称在NAFLD中visfatin/NAMPT和白细胞介素-6可以共同调控[9,10]。在部分肝切除小鼠模型中，白细胞介素-6暴露可发挥抗氧化作用并促进肝再生[28,29]。此外，visfatin/NAMPT对[12]肝细胞有直接的细胞保护作用。 Therefore, one hypothesis to explain the observed scenario in our study could be that subjects with elevated preoperative serum visfatin/NAMPT can more rapidly respond to acute surgery induced liver injury, which could at least in part have been mediated by oxidative stress. Accordingly, our results evolve the hypothesis that visfatin/NAMPT is related to liver regeneration, but this needs to be approved in larger prospective studies.

本研究的优势在于通过既定的方法分析术后肝功能，使用具有代表性的肝脏标本，以及金标准NASH评价。限制只涉及白种人的纳入;相对较小的研究小组。但是，我们的数据与之前的报告基本一致，我们检测到显著的影响，说明功率足够。

总之，我们展示了血清内脏脂肪素/NAMPT与术后肝再生的相关性。

感兴趣的宣言

马丁·斯托克曼(Martin Stockmann)是LiMAx测试的发明者，并在Humedics公司持有资本权益

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