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摘要

在过去的十年中，生物疗法已经被开发用于治疗自身炎性疾病，如牛皮癣。与甲氨蝶呤和环孢素等传统全身药物相比，它们具有更好的靶向特异性，因此可显著减少广泛全身治疗带来的副作用和毒性。有研究表明，生物制剂治疗银屑病的疗效可能与HLA-Cw6的状态有关。因此，使用HLA-Cw6作为生物标志物将为根据患者的基因构成选择成功治疗的生物制剂提供优势，从而允许我们使用HLA-Cw6对中重度银屑病患者进行个性化治疗。在本研究中HLA-Cw6状态已确定以前用依赖替尼替替尼替替替替替替替替替替洛替卢比，英毛细血管或ustekinumab治疗的牛皮癣患者。比较生物处理的成功或失败率，对患有和没有HLA-CW6等位基因的患者进行了比较.HLA-CW6地位与该患者显着相关生物学efalizumab的治疗结果（不再在市场上），英夫利昔单抗和Ustekinubab;但不是依赖替替替替替替替替替替替品。这些结果支持使用HLA-CW6状态作为中度至严重的牛皮癣患者生物治疗的生物标志物。

介绍

牛皮癣寻常症是一种慢性炎症皮肤病，呈现为皮肤上的鳞片状[1]，估计影响2-3％的人口。虽然具体病因仍然难以捉摸，但研究表明了一种刺激不恰当的免疫介导和炎症反应的机制。假设抗微生物肽L1-37和HLA-CW6可以在牛皮癣的发病机制中发挥作用[2,3]。LL-37在牛皮癣的角质形成细胞中过表达，并且通过HLA-CW6作为CD-8阳性（TC1 / 17）细胞的自动抗原和树突细胞，导致牛皮癣患者中炎性级联的生产细胞症[2]．基础菌病变的特征在于异肌细胞超胃肠和炎症，由T细胞分化和促炎细胞因子如干扰素-γ（IFNυ），肿瘤坏死因子α（TNFα），白细胞介素（IL）12和IL-23产生炎症[1,4,5]并通过LL-37和HLA-CW6 [2]介导。

银屑病的发病机制是多因素的，但包括一个重要的遗传因素:一级亲属患银屑病[5]的可能性是同卵双胞胎[6]的4-6倍。易感性研究已经在第6染色体的PSORS1区域发现了候选基因，最显著的是主要组织相容性复合体(MHC)区域的HLA-C基因[7,8]。的HLA-C同形像HLA-CW6.与银屑病的发展密切相关，并且在较年轻时出现更严重的形式[8-11]。

银屑病与HLA的关联在1980年被证实，最强的关联见于HLA- cw6等位基因[9]。1993年的研究表明，HLA-Cw6阳性银屑病患者[8]中HLA-Cw6等位基因是银屑病发展的易感性指标和发病年龄的早期指标。晚发病且HLA-Cw6阳性的个体[12]的严重程度较轻。这种相关性很强，在40-80%的[9]病例中都能发现，然而附近的其他基因也可能在牛皮癣的发展中发挥作用。还有其他的基因疾病关联表明了更强的因果关系，如HLA-B27和强直性脊柱炎(as)，其中HLA-B27等位基因在高达100%的as患者中可见[13]。尽管银屑病和HLA-Cw6之间的关系可能不像HLA-B27和as那样明确，但这种关联在银屑病患者中一直可见。

在过去的十年中，已经引入了生物学疗法，并将其作为理想的治疗方法引入，因为它们通常具有高效力和有利的益处风险比。牛皮癣药物生物遗传学的新发展可以帮助更好地预测使用HLA-CW6作为标记的中度至严重牛皮癣患者对生物疗法的反应的可能性[2]。

材料和方法

从纽芬兰和拉布拉多的创立者人群中选择五种生物制剂治疗的牛皮癣患者，并将其分为对生物治疗有反应或无反应两组。然后对患者进行HLA-Cw6单核苷酸多态性(SNP)检测。

血液标本采集于含EDTA的10ml无菌试管中。根据制造商的说明，使用Promega Wizard基因组DNA纯化试剂盒或AutoGen Mini80快速基因DNA全血试剂盒进行DNA分离和纯化。将得到的DNA稀释至30 ng/µL，用于聚合酶链反应(PCR)。

根据制造商说明，使用Olerup SSP HLA-Cw*06扩增试剂盒(瑞典斯德哥尔摩)进行PCR。利用DNA、无菌水和含有Taq聚合酶、核苷酸和二价离子的主混合，创造了一种溶液。将溶液混合，10µL加入到含有干燥引物对的试管中，用于对照和测试序列。管被放置在thermocycler和放大10周期在94°C 10秒钟变性和65°C 60秒退火和延伸:过去20周期,DNA放大10周期在94°C 10秒钟变性、退火61°C 50秒,30秒延长72°C,然后在4°C。扩增产物和DNA梯子被加载到2%琼脂糖凝胶中，使用0.5X TE缓冲液在8-10伏/cm下运行15-20分钟。然后将凝胶转移到生物成像仪上，在紫外光下拍摄照片，并记录基因型状态。

然后利用基因型数据进一步将应答组和非应答组的患者分组为HLA-Cw6+或HLA-Cw6-。结果数据放在列联表中，计算比值比，并使用双尾样本的Fisher精确检验确定显著性。每一种生物制剂也分别制作了列联表:依那西普、阿达木单抗、法利珠单抗、英夫利昔单抗和ustekinumab。

结果

图1(不同生物制剂对HLC-cw6阳性和阴性银屑病患者疗效观察)如下图所示。图1a比较了所有生物制剂对HLA-Cw6阳性或阴性患者的疗效。图1b、1c、1d、1e和1f分别比较了依那西普、阿达木单抗、法利珠单抗、英夫利昔单抗和ustekinumab疗效的基因型状态。

图1所示。不同生物制剂对HLC-cw6阳性和阴性银屑病患者的疗效观察。

发现生物学通常在HLA-CW6阳性（或= 4.427，P = 0.0005）中明显更有效。在测试的五种生物治疗中，Hla-CW6阳性和阴性患者之间的功效显着差异（p = 0.0391，p = 0.0112，分别）：所有三种生物学的疗效HLA-CW6患者（OR = 8，OR = 21，或= 23）显着高。HLA-CW6阳性患者的症状分辨率没有显着性差异（分别用eTaneRcept或Adalimalab（或= 1，P = 1.0000;或= 1.2，P = 1.0000）。

为了提高分析的统计能力，我们将我们的数据与Talamonti的数据合并等.，[14]和Costanzo等.，[15]用于服用依那西普、ustekinumab和efalizumab的患者。数据被重新分析，如图2所示(依那西普、Ustekinumab和Efalizumab对HLA-Cw6阳性和阴性银屑病患者的疗效)。ustekinumab和efalizumab在HLA-Cw6阳性患者中的疗效再次显著升高(p=0.0001和p=0.0101)。依那西普在HLA-Cw6阴性患者中表现出非显著的疗效增加趋势。

图2。依那西普、Ustekinumab和Efalizumab对HLA-Cw6阳性和阴性银屑病患者的疗效。

讨论

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已经观察到牛皮癣具有生物阶年龄的双峰峰;第一次发生在20岁左右，第二岁左右50岁[6]。在非脓疱性牛皮癣中，可以独立地观察两种类型;I型和II型。I型牛皮癣通常包括阳性家族历史，人白细胞抗原（HLA）CW6，B13和BW57以及早期发作（第一峰）[6]。II型围绕第二峰（50-60岁）呈现，趋于CW2和B27 [16]趋于更高[16]。牛皮癣已与许多可血管疾病，糖尿病，高血压，肥胖症和血脂血症相关联的链接有关[17]。有多种传统心血管危险因素的关联（例如吸烟，肥胖，压力和慢性炎症），可能导致至少一次为其皮肤入住医院的患者的死亡风险增加50％[18,19]。

银屑病和HLA-Cw6之间的关联在20世纪80年代首次被证实，自那时以来，这种关联一直被观察到与银屑病的关联最高，代表了最明显的生物标志物候选[8,20]。银屑病很难定位到一个特定的位点，这可能是由于与失调/炎症相关的因素的数量和它们代表[16]的多个基因位点。其他候选基因的鉴定可能代表了导致非hla - cw6患者银屑病的单独致病途径。HLA-Cw6状态长期以来被认为与早发性银屑病和严重症状有关[8,21]。其他研究也报道了银屑病与MHC内HLA-B和非hla基因(如HCR和CDSN)的相关性，但与HLA-C的独立性尚未确定。尽管如此，HLA-C已经被证实为牛皮癣基因，HLA-Cw6阳性导致银屑病风险增加，这是涉及皮肤屏障功能信号[20]的综合复合体的一部分。人们认为HLA-Cw6阳性与银屑病的早期发病有关，一项使用东印度人口[10]的儿科研究发现，在这些儿童中，滴状银屑病、头皮受损伤和严重疾病都与HLA-Cw6阳性相关。在这项研究中，我们提出了新的证据来支持使用HLA-Cw6状态作为生物治疗选择的生物标志物。传统上，特定的生物制剂是在试错的基础上开出的。研究还表明，PGA 0/1对二线治疗生物制剂的反应低于一线治疗，使得治疗的成本效益明显降低[22,23]。这些结果表明，HLA-Cw6基因分型对生物治疗的成功具有预测价值。Commercially available kits are already available for HLA-Cw6 genotyping and are significantly more cost effective than an unsuccessful round of biologic treatment and significantly reduce the unnecessary risk of a trial-and-error treatment approach.

结论

HLA-Cw6被认为是寻常型银屑病的易感基因。生物疗法被证明是一种有效的治疗选择，具有有利的收益风险比。在目前的试验和错误方法的治疗范式中，选择使用哪种生物疗法是相当困难的。然而，最近的文献以及本研究中提供的数据表明，HLA-Cw6阳性可能与某些生物治疗的疗效增加有关。因此，使用个体化药物的方法可能会带来诸多好处，包括:更及时地控制疾病，及时改善生活质量和生产力;减少从一种生物疗法到另一种生物疗法的转换，提高生物疗法治疗中重度银屑病的成本效益。

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