看看最近的文章

摘要

本研究的目的是评估anti-Müllerian激素(AMH)是否是体外受精(IVF)卵巢刺激后怀孕率的预测因子。本回顾性分析共纳入4516例患者:3535例为新鲜胚胎移植，981例为全胚胎玻璃化至少3个月后冷冻胚胎移植。所有患者在月经周期的第3-5天采血，用酶联免疫吸附法检测血清中AMH。将<35、35-37、38-40和>40岁4个年龄组按血清AMH水平(不可检测、0.06-0.49、0.5-0.99、1-1.49、1.5-1.99、2-2.99、3-3.99、4-4.99和≥5 ng/mL)分为亚组。我们发现在四个年龄组中，血清AMH水平与获卵数、受精卵数、发育胚胎数和临床妊娠率呈正相关。总之，这项研究表明，在所有年龄组中，抗抗激素水平高的女性怀孕的概率都更高。然而，由于我们的回顾性设计，需要未来的随机对照试验来证实这些结果。

介绍

生殖寿命与卵母细胞的数量和质量有关。原始卵泡池的消耗与卵巢储备的下降有关。尽管卵母细胞的数量和质量随着年龄的增长而下降，但同一年龄的女性的生育能力却不同。因此，有大量的测量方法可用于评估卵巢功能储备，揭示卵巢反应的预后价值，有助于确定适当的体外受精刺激方案。虽然卵母细胞质量的可靠标记还没有开发出来，Anti-Müllerian激素(AMH)已被证明是卵巢储备的一个很好的标记。

AMH由Alfred Jost于1947年发现，是一种同源二聚体糖蛋白，其基因位于染色体19p13.3上。而且belongs to the transforming growth factor-beta superfamily that is produced by the granulosa cells surrounding pre-antral and small antral follicles, of independently of follicle-stimulating hormone (FSH) stimulation [1]. AMH is secreted into the circulation from the time of birth until menopause with only minimal fluctuations during the menstrual cycle. The serum level of AMH has been shown to correlate with the number of small follicles. Previous studies have demonstrated that AMH could reliably predict the quality of oocytes in在体外尽管AMH的预测作用可能只是间接的，并与促性腺激素刺激后获得的定量卵巢反应有关，但体外受精(IVF)[2]、卵巢对刺激[3]的极端反应和体外受精[4]的结果。

从已发表的证据、AMH水平的客观性和潜在标准化、以及在整个月经周期中随时检测的便利性来看，AMH水平的预测价值倾向于成为评估卵巢储备和预测卵巢对刺激[5]反应的金标准生物标志物。然而，AMH在预测着床率、妊娠率、持续妊娠率和活产率方面的能力较差[6,7]，研究AMH与体外受精结果相关性的观察性研究较少[8-10]，或仅限于特定的不孕症患者亚人群[11-12]。

本研究的目的是提供一项大样本观察性研究，以确定AMH对IVF卵巢刺激后人群妊娠率的预测价值的准确性。

材料和方法

研究人群

本研究收集了2012年1月至2014年2月在重庆市妇幼保健院IVF中心接受卵巢刺激体外受精的4516名妇女的数据。根据以下入选标准招募患者:(1)卵巢刺激前3个月内血清基础AMH测定，(2)首次尝试卵巢刺激和IVF/胞浆内精子注射(ICSI)周期，(3)首次尝试胚胎移植，无论新鲜或冷冻胚胎移植，(4)胚胎移植在第3天。排除标准为:(1)在过去3个月内接受过激素治疗;(2)有遗传性疾病;(3)多囊卵巢综合征(PCOS)或子宫内膜异位症;(4)有男性伴侣的无精子症;(5)有内分泌紊乱史。所有患者签署了由我院伦理审查委员会批准的知情同意书，允许根据良好临床实践指南从患者记录中检索临床数据。

抗苗勒氏管激素化验

根据制造商说明书(AMH ELISA, AnshLabs, UK)，使用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定血清AMH浓度。AMH最低检出浓度为0.06 ng/mL。血清AMH水平<0.06 ng/mL为未检测值。治疗前，所有患者采血检测血清中抗抗菌素。在月经周期的3-5天抽血。标本在24小时内冷冻，并在-20°C保存，直到1周内进行分析。

卵巢刺激协议

采用不同的卵巢刺激方案，包括长时间GnRH激动剂、短时间GnRH激动剂和轻度刺激方案。刺激方案根据患者的个体特点而定。医生根据卵巢储备试验(AMH，腔滤泡计数AFC, bFSH)和年龄酌情处方促性腺激素。然后根据卵泡生长情况调整剂量，直到hCG给药那天。

对于长协议，如我们以前的出版物[13]中所述。简单地说，在使用GnRH激动剂(醋酸雷公肽，Ipsen Pharma, France)下调后，卵巢被促性腺激素刺激。有4231名患者被纳入了长期的方案。

对于简短的方案，每日GnRH激动剂(Triptorelin Acetate, Ipsen Pharma, France)和促性腺激素刺激在月经周期的第2天开始。在简短的方案中包括214名患者。

对于轻度刺激方案，枸橼酸克罗米芬(CC) 50或100 mg/d开始于月经周期的第3天，直到卵泡成熟。给药5天后，当优势卵泡小于14 mm时，开始分泌促性腺激素。有71名患者被纳入轻度刺激方案。

人绒毛膜促性腺激素(HCG) (Ovidrel，默克雪兰诺，瑞士)当至少三个卵泡测量直径为>18 mm时给予。注射HCG后36 h经阴道取出卵母细胞，取出卵母细胞后第3天进行胚胎移植。

胚胎培养

收集卵母细胞在2.5 mL试管受精培养基(G-IVF, Vitrolife Sweden AB, Sweden)中进行授精，并在5% O中培养₂和6%的公司₂在37度的压缩空气中^ºC在加湿培养箱中。如前所述进行授精(ICSI或IVF)和胚胎培养[14,15]。按Dale[16]标准进行卵裂期胚胎评价，1-3级为发育胚胎;根据医生的建议或患者的要求，在授精后第3天将其转移或玻璃化。胚胎培养携带艾德在37℃、5% O湿度的培养箱中，滴入50 μL的微滴(每滴1个正常受精卵)₂和6%的公司₂在压缩空气。

玻璃化和气候变暖

因为潜在的卵巢过度刺激综合征(OHSS)而取消移植的患者的胚胎是不合适的子宫内膜准备或个人原因，以及移植后剩余的胚胎，都是陶瓷的低温贮藏。所有胚胎在第2天或第3天被冷冻。首先，我们平衡了胚胎在暴露于玻璃化溶液(VS 2)之前，在VS1溶液中放置5分钟。玻璃化方法遵循商业试剂盒(Kita, Toyota, Japan)的说明。将胚胎置于Cryotop片上后，在将载体注入LN之前，用移液管吸除多余的玻璃化溶液₂．

LN的杜瓦瓶₂含有载体的被放置在显微镜附近。用镊子夹住LN内的吸管₂把它放在一个含有3ml 1.0 mol/L蔗糖的盘子里，温度为37ºC将胚胎依次转移到0.5和0.25 mol/L蔗糖溶液中，在室温下分别处理3分钟。然后胚胎在奎因的1024 (库珀手术， CT, USA)溶液，并置于G1培养基(Vitrolife, Kungsbacka, Sweden)中进一步培养。冷冻保存胚胎的解冻后存活定义为原始细胞超过一半完整的存活。

冷冻胚胎移植人工周期子宫内膜的制备

在月经周期的第3天，患者开始口服4-8 mg/d剂量的雌二醇Valeratee (Progynova, Bayer, Germany)。雌二醇制备14 d后，进行超声检查。若无优势卵泡存在，且子宫内膜厚度≥8 mm，则在此基础上加用黄体酮100 mg/d肌注(中国李竹)，孕激素给药后第3天解冻卵裂胚胎，孕激素给药后第4天转移卵裂胚胎。

胚胎移植

所有病例均在胚胎移植前立即对移植胚胎进行带孔激光辅助孵化[16,17]。胚胎移植均在超声引导下进行。患者接受黄体支持(结合雌激素和孕激素)直到血液HCG测试日(胚胎移植后14 d)。当胚胎移植后28 d经阴道超声检测到妊娠囊时，确定临床妊娠。

定义了结果测量和年龄组分层

在确定临床妊娠时，分母是接受胚胎移植的患者数量。在确定胚胎发育率时，分母为分裂的2PN受精卵的数量。在确定受精率时，分母是用于授精的卵母细胞数量。在确定中期II (MII)卵母细胞率时，分母为获得的卵母细胞数量。传统体外受精或ICSI授精2 ~ 4 h后去除积丘细胞确定MII卵母细胞。早期去除卵丘细胞的人工授精比夜间人工授精更能客观地测定MII卵母细胞率。年龄分层根据美国疾病控制与预防中心(CDC, 2013)发布的《2013年辅助生殖技术国家总结报告》([18])进行分类。

统计分析

连续数据用均值±sd和25表示^th, 50^th, 75^th百分位数。不同年龄组的AMH患者特征和治疗结果采用单因素方差分析(单因素方差分析)，采用Tukey 's检验进行多重比较，卡方检验。妊娠率比较采用趋势卡方检验。双侧P < 0.05为差异有统计学意义。

结果

本次回顾性分析共纳入4516例患者(图1);3535例进行了第一次新鲜胚胎移植，981例在全胚胎玻璃化至少3个月后进行了第一次冷冻胚胎移植。4516例接受卵母细胞提取的患者平均年龄为31.2±4.63岁。平均血清AMH水平为3.88±3.18 ng/ml, BMI为22.07±2.69 kg/m²卵母细胞数为11.43±6.07(表1)。

图1所示。数据招聘流程图。

表1。根据卵母细胞提取中AMH百分位的患者特征(n=4516)。

	平均数±标准差	最低	25th百分位	50th百分位	75th百分位	最大
年龄(年)	31.2±4.64	20.	28	31	34	48
抗苗勒氏管激素(ng / mL)	3.876±3.179	检测不到	1.63	3.03	5.17	28.12
BMI(公斤/米2）	22.07±2.69	14.98	19.88	21.48	23.44	37.33
不。的卵母细胞	11.43±6.071	1	7	11	15	37
不。信息产业部的卵母细胞	11.43±5.99	1	7	11	15	37
MII率(%)	0.89±0.12	0.38	0.83	0.92	1	1
不。受精的卵母细胞	9.12±5.36	1	5	9	13	35
受精率(%)	0.81±0.21	0.02	0.71	0.86	1	1
不。发达的胚胎	4.56±3.32	1	2	4	6	27
开发出胚率(%)	0.64±0.26	0.01	0.45	64年0 . .	0.83	1

对各基线血清AMH亚组(未检出、0.06-0.49、0.5-0.99、1-1.49、1.5-1.99、2-2.99、3-3.99、4-4.99、≥5 ng/mL)按年龄(<35、35-37、38-40和>40岁)分层分析显示，各年龄组(<35、35-37、38-40和>40岁)的获卵母细胞数、受精卵母细胞数和发育胚胎数与基线血清AMH呈正相关(p<0.05)。年龄<35岁组成熟卵母细胞数与基线血清AMH呈正相关(p<0.01)。然而，各年龄组的成熟卵母细胞率和受精率与基线血清AMH无差异(p>0.05)。研究还表明胚胎发育的速度除> ~ 40岁组与基线血清AMH呈负相关外(p<0.05)。> ~ 40岁组胚胎发育率根据基线血清AMH无差异(p=0.63)(表2-5)。

表2。年龄<35岁组(n=3532)按血清AMH基线计算治疗结果。

	检测不到	0.06 - -0.49	0.5 - -0.99	1 - 1.49	1.5 - -1.99	2 - 2.99	3 - 3.99	4 - 4.99	≥5	P
不。病人	2	63	200	335	385	701	568	375	903
不。卵母细胞	11	4.43±2.72	6.77±3.43	8.32±3.98	9.71±3.95	10.82±4.68	12.49±4.86	13.35±4.94	14.65±5.87	< 0.01
不。信息产业部卵母细胞	10±1.41	3.5±2.06	5.26±2.18	7.42±3.99	8.66±3.91	9.48±4.55	11.38±4.99	11.99±5.02	12.11±5.77	< 0.01
信息产业部卵母细胞率	0.9±0.1	0.875±0.14	0.89±0.11	0.91±0.12	0.85±0.16	0.89±0.12	0.89±0.12	0.86±0.13	0.91±0.11	0.073
不。受精的卵母细胞	7.5±0.7	3.11±2.44	4.86±3.08	6.81±3.73	7.85±3.63	8.84±4.29	10.25±4.41	10.56±4.54	11.68±5.24	< 0.01
受精率	0.9±0.22	0.86±0.22	0.83±0.28	0.84±0.28	0.82±0.24	0.84±0.25	0.85±0.24	0.83±0.18	0.81±0.18	0.11
不。发达的胚胎	2	2.11±2.44	3.99±3.08	4.81±3.13	5.48±2.61	5.84±4.29	5.05±3.07	5.06±3.14	5.8±3.36	< 0.01
开发出胚率	０．２５	0.76±0.27	0.69±0.29	0.67±0.27	0.62±0.24	0.6±0.25	0.6±0.24	0.59±0.25	0.6±0.24	< 0.01

表3。35-37岁组(n=520)按血清AMH基线计算治疗结果。

	检测不到	0.06 - -0.49	0.5 - -0.99	1 - 1.49	1.5 - -1.99	2 - 2.99	3 - 3.99	4 - 4.99	≥5	P
不。病人	0	31	66	64	81	107	73	37	61
不。卵母细胞	-	4.12±2.43	6.03±3.52	7.41±4.01	9.28±4.11	10.11±3.86	11.42±4.21	13.08±3.83	14.08±5.52	< 0.01
不。信息产业部卵母细胞	-	3.81±2.07	5.85±1.95	5.83±2.45	8.41±3.98	9.24±4.86	11±5.66	11±5.89	11.57±6.33	0.33
信息产业部卵母细胞率	-	0.91±0.12	0.88±0.11	0.92±0.11	0.94±0.08	0.92±0.11	0.93±0.11	0.89±0.11	0.91±0.11	0.58
不。受精的卵母细胞	-	3.44±2.11	4.83±2.64	5.77±3.08	7.44±3.76	8.05±3.49	8.85±4.04	9.29±4.51	11.37±4.36	< 0.01
受精率	-	0.86±0.18	0.83±0.18	0.81±0.18	0.81±0.2	0.80±0.19	0.78±0.2	0.79±0.18	0.82±0.19	0.72
不。发达的胚胎	-	2.12±1.21	2.81±1.72	3.16±1.94	3.68±2.67	4.44±2.29	3.93±2.39	4.73±2.44	5.49±2.51	< 0.01
开发出胚率	-	0.875±0.22	0.76±0.25	0.71±0.24	0.67±0.25	0.69±0.21	0.58±0.23	0.58±0.21	0.62±0.22	< 0.01

表4。38-40岁组按血清AMH基线治疗结果(n=345)。

	检测不到	0.06 - -0.49	0.5 - -0.99	1 - 1.49	1.5 - -1.99	2 - 2.99	3 - 3.99	4 - 4.99	≥5	P
不。病人	1	28	60	68	53	62	43	13	17
不。卵母细胞	13	4.03±2.67	4.67±2.73	6.39±3.21	7.91±4.63	9.74±4.62	11.98±4.99	12.15±2.88	12.53±6.7	0.04
不。信息产业部卵母细胞	10	3.11±2.51	4.17±2.86	5±1.63	6.33±4.46	8.88±4.07	11.8±3.49	9.12±4.02	10.33±6.66	0.88
信息产业部卵母细胞率	0.76	0.81±0.14	0.94±0.09	0.86±0.12	0.78±0.23	0.92±0.11	0.92±0.15	0.81±0.15	0.83±012	0.66
不。受精的卵母细胞	7	3.01±2.51	3.73±2.28	4.55±2.88	5.41±3.46	7.93±4.6	9.67±4.3	8.38±3.2	7.35±5.3	0.03
受精率	0.54	0.91±0.15	0.84±0.21	0.83±0.22	0.81±0.21	0.83±0.17	0.81±0.19	0.85±0.15	0.71±0.3	0.09
不。发达的胚胎	2	2.21±1.23	2.37±1.43	2.69±1.37	3.45±2.34	3.77±2.18	4.86±3.26	5.23±2.59	4.12±2.57	0.01
开发出胚率	1	0.84±0.2	0.8±0.26	0.74±0.26	0.67±0.24	0.63±0.25	0.63±0.25	0.62±0.24	0.63±0.18	0.03

表5．> ~ 40岁组按基线血清AMH治疗结果(n=119)。

	检测不到	0.06 - -0.49	0.5 - -0.99	1 - 1.49	1.5 - -1.99	2 - 2.99	3 - 3.99	4 - 4.99	≥5	P
不。病人	6	22	36	23	11	16	1	2	2
不。卵母细胞	1.5±0.55	2.3±1.03	3.13±1.89	5.09±3.19	5.22±2.28	7.21±4.39	9	9.5±6.36	17±2.82	0.04
不。信息产业部卵母细胞	1.4±0.6	2.21±2.12	2.33±2.25	4.25±2.1	4.5±3.53	6.5±0.707	9	9	16	0.91
信息产业部卵母细胞率	0.9±0.2	0.88±0.19	0.86±0.22	0.88±0.21	0.87±0.05	0.85±0.01	1	0.9±0.14	0.9±0.14	0.82
不。受精的卵母细胞	1.3±0.55	1.76±0.84	2.07±1.43	4.04±2.91	3.74±2.84	4.19±3.17	8	8.5±7.07	13±1.41	0.04
受精率	0.9±0.15	0.81±0.26	0.86±0.19	0.91±0.14	0.75±0.21	0.79±0.24	0.89	0.9±0.14	0.77±0.04	0.44
不。发达的胚胎	1.2±0.5	1.43±0.55	1.86±0.75	2.96±1.02	2.82±1.99	2.87±1.4	5	5±5.66	2	0.05
开发出胚率	0.9±0.22	0.91±0.19	0.79±0.29	0.82±0.21	0.78±0.19	0.73±0.23	0.71	0.9±0.13	0.42±0.35	0.63

趋势卡方检验显示，<35岁、35-37岁和38-40岁年龄组的临床妊娠率与基线血清AMH呈正相关(p<0.05)(表6)。

表6所示。临床妊娠率根据基线血清AMH患者按年龄分层。

年龄	检测不到	0.06 - -0.49	0.5 - -0.99	1 - 1.49	1.5 - -1.99	2 - 2.99	3 - 3.99	4 - 4.99	≥5	趋势P
< 35	100％ (2/2)	49.2% (31/63)	58.03% (112/193)	58.21% (195/335)	56.36% (217/385)	60.63% (425/701)	60.74% (345/568)	66.40% (249/375)	63.96% (582/910)	0.002
35-37	-	53.13% (17/32)	42.42% (28/66)	53.13% (34/64)	45.58% (37/81)	49.53% (53/107)	39.73% (29/73)	56.76% (21/37)	65％ (39/60)	0.000
38-40	- 0/1	35.71% (10/28)	30% (18/60)	39.13% (27/69)	30.19% (16/53)	45.16% (28/62)	41.86% (18/43)	23.07% (3/13)	58.88% (10/17)	0.000
＞40	- (0/6)	- （0/21）	25％ （9/36）	26.08% (6/23）	14.29% (1/7)	25％ （4/16）	- (0/1)	33.33% (1/3)	- （0/6）	-

AMH未检出亚组和年龄为> ~ 40的组因分子为零，不计算趋势分析。

讨论

AMH已经在许多领域证明了它的有效性。它是卵巢储备的最佳激素标记物，是预测控制卵巢刺激的低反应和相反过度反应风险的有用工具[19]。我们的研究表明，较高的AMH与更多的回收卵母细胞相关，与年龄无关，这与之前关于卵巢储备的报道一致。AMH在直径小于4mm的第一、第二、窦前和窦早期卵泡中均有高表达，但在直径为8mm的卵泡中，AMH的表达急剧下降[20,21]。由于外周循环中AMH的浓度与原始卵泡池成正比，AMH可能间接代表卵巢储备和卵巢对促性腺激素刺激的反应。

AMH预测怀孕的能力是矛盾的，因为对个体患者数据的meta分析清楚地表明，AMH不能预测体外受精[22]的持续怀孕。然而，另一项诊断准确性的荟萃分析显示，AMH在预测活产方面增加了一些价值，而且这与年龄或可测定的免疫AMH[7]无关。据我们所知，这是调查第一次体外受精周期后血清AMH和临床妊娠率之间关系的最大的回顾性分析。我们的回顾性分层分析发现，<35岁、35-37岁和38-40岁组的临床妊娠率与基线血清AMH呈正相关，且与年龄无关。尽管一些研究者已经评估了AMH的临界值，以预测某些接受体外受精的妇女的临床妊娠率和活产率[2,4,7,10,23,24]，但只有一项研究表明卵泡液AMH与临床妊娠率和活产率[25]显著相关。以往关于AMH用于预测体外受精结果的报道大多是诊断性试验，或数据被证明为提取形式，原始数据被省略，或数据只能为进一步的随机对照研究提供有限的线索[2,4,7,10,23,24]。虽然由于回顾性设计，本研究存在固有的缺陷，但我们的大样本量和不孕不育的专业分布使本分析较少偏颇。此外，AMH小于5 ng/mL组的缩小使得结果比以前的诊断试验更加透明。

在受精卵和胚胎方面，我们的研究表明，高的AMH水平与高的受精卵绝对数量和发育的胚胎相关，但未观察到增加率;与此相反，除> ~ 40岁组外，其余各组胚胎发育率与基线血清AMH呈负相关。这可能是由于胚胎学家的主观判断，特别是与获得大量卵母细胞的患者相比，产生少量卵母细胞的患者，正常受精(2PN)胚胎显得尤为重要。虽然胚胎选择标准是客观的，但胚胎学家可能在判断上有偏见，由于样本量大而产生的累积效应可能改变发育胚胎率的趋势;这一结果与以往的报道不同[4,24,25]。

总之，我们在目前的研究中证明，高AMH水平的女性在所有年龄组都有更高的怀孕概率。然而，由于回顾性实验设计，需要未来的RCT研究来证实这些结果。

参考文献

1. Majumder K, Gelbaya TA, Laing I, Nardo LG(2010)使用anti-Müllerian激素和窦卵泡计数预测卵母细胞和胚胎的潜力。产科妇科再生生物学150: 166 - 170。(Crossref)
2. Lehmann P, Vélez MP, Saumet J, Lapensée L, Jamal W, et . (2014) Anti-Müllerian激素(AMH):体外受精中卵母细胞质量的可靠生物标志物。J协助重述吉内31日:493 - 498。(Crossref)
3. Nardo LG,2021版权所有。Yates A等人(2009)循环基础anti-Müllerian激素水平作为体外受精卵巢刺激妇女卵巢反应的预测因子。Fertil杂志92: 1586 - 1593。(Crossref)
4. Brodin T, Hadziosmanovic N, Berglund L, Olovsson M, Holte J (2013) Antimüllerian激素水平与辅助生殖后活产率密切相关。临床内分泌素Metab98: 1107 - 1114。(Crossref)
5. 美国生殖医学学会实践委员会(2015)卵巢储备测试和解释措施:委员会意见。Fertil杂志103: e9-9e17。(Crossref)
6. Tal R, Tal O, Seifer BJ, Seifer DB (2015) Antimüllerian激素作为辅助受孕后着床和临床妊娠的预测因子:系统回顾和荟萃分析。Fertil杂志103: 119 - 130。［Crossref]
7. Iliodromiti S, Kelsey TW, Wu O, Anderson RA, Nelson SM (2014) anti-Müllerian激素对辅助受孕后活产的预测准确性:文献的系统回顾和荟萃分析。哼天线转换开关的更新20: 560 - 570。(Crossref)
8. Nelson SM, Yates RW, Fleming R(2007)血清anti-Müllerian激素和卵泡刺激素:在刺激周期中预测活产和反应的极端情况——个化治疗的意义。哼天线转换开关22日:2414 - 2421。(Crossref)
9. 李宏，刘春春，黄成昌，谢坤昌，林明敏，等(2009)女性年龄和男性不育症对卵巢储备标志物预测辅助生殖技术周期结果的影响。天线转换开关性杂志7: 100。［Crossref]
10. Gleicher N, Weghofer A, Barad DH (2010) Anti-Müllerian激素(AMH)在卵巢储备严重减少的妇女中定义了低或好的活产机会，与年龄无关。Fertil杂志94: 2824 - 2827。(Crossref)
11. Arce JC, La Marca A, Mirner Klein B, Nyboe Andersen A, Fleming R (2013) Antimüllerian促性腺激素释放-激素拮抗剂周期中的激素:预测预后良好患者的卵巢反应和累积治疗结果。Fertil杂志99: 1644 - 1653。(Crossref)
12. 叶红，黄国宁，曾培华，裴磊(2009)黄体雌二醇(E2)在GnRH拮抗剂方案和标准长GnRH激动剂方案前预处理周期的IVF/ICSI结果:一项前瞻性和随机研究。J协助重述吉内26日:105 - 111。［Crossref]
13. 熊松，韩伟，刘建新，张旭东，刘伟伟，等。(2011)配子共孵育6 h后去除积云细胞对人体外受精结果的影响。J协助重述吉内28日:1205 - 1211。(Crossref)
14. 张晓东，刘建新，刘伟伟，高原，韩伟，等(2013)人工授精培养时间与体外受精结果:系统综述与荟萃分析。哼天线转换开关的更新19日:685 - 695。(Crossref)
15. 戴尔·B，艾尔德·k，体外受精。英国:剑桥大学;1997.115 - 6页。
16. Grace J, Bolton V, Braude P, Khalaf Y(2007)在之前失败的IVF/ICSI周期中，当胚胎质量最佳时，辅助孵化更有效。比较。Gynaecol27: 56 -。(Crossref)
17. salam HN, Sadek SS, Agameya AF(2003)辅助孵化——随机对照试验的荟萃分析。J协助重述吉内20: 332 - 342。(Crossref)
18. 辅助生殖技术全国总结报告(2013)http://www.cdc.gov/art/reports/2013/national-summary.html
19. La Marca A, Sighinolfi G, Radi D, Argento C, Baraldi E等(2010)抗苗勒氏激素(AMH)作为辅助生殖技术(ART)的预测标记。哼天线转换开关的更新16: 113 - 130。(Crossref)
20. Weenen C, Laven JS, Von Bergh AR, Cranfield M, Groome NP, et al.(2004)人类卵巢中的抗缪勒激素表达模式:初始和周期卵泡募集的潜在意义。摩尔哼天线转换开关10: 77 - 83。［Crossref]
21. Jeppesen JV, Anderson RA, Kelsey TW, Christiansen SL, Kristensen SG, et al.(2013)人类中哪一种卵泡产生最多的激素?卵泡选择时抗抗激素产量突然下降的证据。摩尔哼天线转换开关19日:519 - 527。［Crossref]
22. Broer SL, van DJ, Broeze KA, Dolleman M, Opmeer BC，等(2013)卵巢储备检测对患者特征在预测卵巢反应和持续妊娠中的附加价值:一种个体患者数据方法。哼天线转换开关的更新19: 26-36。［Crossref]
23. Koshy AK, Gudi A, Shah A, Bhide P, Timms P，等(2013)anti-Müllerian激素低于10%的女性妊娠预后。Gynecol性29日:662 - 665。(Crossref)
24. Kim JH, Lee JR, Chang HJ, Jee BC, Suh CS, et al. (2014) Anti-Müllerian排卵前卵泡卵泡液中激素水平:卵母细胞受精和胚胎质量的预测因子。韩国医学科学29日:1266 - 1270。(Crossref)
25. 林文琴，姚丽宁，张晓东，张伟，杨新军，等(2013)抗缪勒激素对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后胚胎质量、囊胚发育和妊娠率的预测价值。J协助重述吉内30: 649 - 655。［Crossref]