看看最近的文章

目前，实体器官移植(OT)领域仍然存在的主要问题之一是基于对移植物同种异体反应反应的免疫谱监测来获得更好的转归率。从这个意义上讲，药代动力学传统上是基于治疗药物监测的主要工具，包括测量生物体液中特定药物浓度以及这些药物浓度与药物剂量和最终临床事件的后续关系[1]。然而，这种方法可能受到环境和非遗传因素的很大影响，如肝肾功能障碍、激素水平以及与其他联合给药药物的潜在药代动力学相互作用。正如先前发表的[2]，在治疗过程中，所有这些重要的条件都可能以不同的方式发生显著变化。

在过去的几年里，新的方法提供了准确的证据，证明免疫抑制治疗的靶标是如何沿着细胞途径受到药物暴露的影响。从这个意义上说，血液或血浆药物浓度测量只是效果的替代。如果有可能直接测量这些药物的免疫抑制作用，也称为药效学，它们的使用将是不必要的。免疫抑制药物的药效学评价可以通过研究免疫抑制药物的作用机制所获得的特定生物标志物来实现。参与多种信号通路的不同种类的生物分子已被提出作为免疫抑制治疗的潜在药效学生物标志物。

这些移植细胞生物标志物可以在激活和增殖途径的不同阶段进行评估。最近，不同的研究小组已经研究了促炎和抗炎细胞因子和趋化因子，调节性淋巴细胞(Tregs, Bregs等)以及表面细胞生物标志物的表达作为药效学生物标志物。从这个意义上说，与健康对照相比，肾稳定移植受者(TR)的淋巴细胞增殖、t细胞表面活化抗原的表达和细胞内细胞因子的产生显著降低[3]。此外，其他作者通过流式细胞术研究了药效学对外周血单个核细胞细胞因子产生的最终影响，他们发现环孢素A或他克莫司治疗稳定型肾TR与对照组相比，Th1/Th2细胞因子表达模式存在重要差异[4]。最近，我们的同事发表了移植后第一周(PT)内，可溶性IFN-γ， %CD8抑制百分比的患者⁺干扰素-γ⁺和% CD8⁺il2⁺急性排斥反应发生率低于40%，对免疫抑制药物敏感性低[5]。

此外，在我们小组最近进行的两个独立的多中心研究中，我们还发现;1)活化Treg淋巴细胞(aTreg)的频率(随表型，CD4⁺CD25^高CD62L⁺CD45RO⁺)发生急性排斥反应的TR患者在基线时比未发生排斥反应的TR患者高。此外，肝移植(LT)前较高的aTreg频率将TR区分为肾脏TR急性排斥反应的风险增加[6,7]，2)CD4和CD8 t细胞上的细胞内IFN-γ和IL-2细胞因子以及IL-17A蛋白的产生能够在基线和PT第一个月内识别肝脏和肾脏患者急性排斥反应的高风险[8]。

目前，固体OT领域的主要目标之一是实现同种免疫反应的生物分子可以作为不同临床事件(如急性和慢性排斥反应或病毒感染)的潜在预测性生物标志物。最近，我们还分析和监测了一组选定的表面生物标志物在培养CD4细胞中的表达⁺和CD8⁺t淋巴细胞在第一年接受原位移植的TR患者中作为急性排斥反应的潜在预测性生物标志物。t淋巴细胞的百分比在移植前和移植后1年监测^圣星期2^nd周,1^圣， 2^nd3^{理查德·道金斯}和6^th如先前发表的[9]，在豆豆蛋白A多克隆刺激下，在全外周血培养物中评估生物标志物面板。在这项研究中，在PT的第一个月内经历过急性排斥反应的TR患者表现出更高的CD38水平⁺CD4⁺基线T细胞与具有稳定移植物功能的TR相比(图1A)。此外，CD154⁺CD4⁺发生急性排斥反应的TR中的T细胞也高于没有急性排斥现象的TR(图1B)。

移植前CD4 T细胞的CD38和CD154百分比被评估为急性排斥反应的最终生物标志物。基于AUC允许的ROC曲线分析显示，TR与lt前CD4百分比⁺CD38⁺超过64.85%的人发生急性排斥反应的风险增加。同样，同样的分析表明，TR与lt前CD4百分比⁺CD154的⁺高于2.98%的患者急性排斥反应风险增加。

事实上，CD38的基线百分比⁺和CD154的⁺在一项多变量logistic回归分析中，CD4 T细胞水平是唯一与急性排斥事件发生风险增加独立相关的变量。具体来说，肝移植前CD38百分比与急性排斥发生风险增加1.053倍相关，而CD154百分比与急性排斥发生风险增加0.816倍相关。该模型能够预测73%的急性排斥事件，以及%CD8联合的AUC⁺CD38⁺和% CD8⁺CD154的⁺是0.767。

另一方面，CD69和CD95的PT水平可以评估移植后第一个月内早期急性排斥反应的风险，因为与稳定移植后相比，在移植后第一个月内排斥的患者CD4上CD69水平较高(图1C)^nd周PT，以及CD8 T淋巴细胞在1^圣和2^nd此外，在2时，排斥者TR中CD4 T淋巴细胞上CD95的百分比也高于非排斥者TR^nd第1周^圣月(图1E) PT，而CD8 T细胞上的CD95在1^圣星期2^nd第1周^圣月(图1F)

图1所示。Pre-transplantation 1^圣和2^nd第1周^圣移植后一个月的CD38水平⁺、CD69⁺, CD95⁺以及CD154⁺在CD4⁺和CD8⁺T细胞作为早期急性排斥反应的预测性生物标志物。A) CD38的百分比⁺CD4⁺T细胞，B) CD154百分比⁺CD4⁺T细胞，C) CD69百分比⁺CD4⁺T细胞，D) CD69百分比⁺CD8⁺T细胞，E) CD95百分比⁺CD4⁺T细胞和F) CD95百分比⁺CD8⁺急性排斥反应(AR，黑圈)和移植功能稳定(NAR，白圈)的原位肝移植受者中的T细胞。这些线反映了每个研究组在任何时间点的四分位数范围的中位数。*P< 0.05, * *P< 0.01, * * *P< 0.0001。

预测%CD69急性排斥反应的截止值(ROC曲线的AUC)⁺CD4⁺, % CD69⁺CD8⁺, % CD95⁺CD4⁺和% CD95⁺CD8⁺在第一个月内，T细胞可以准确地区分有和没有急性排斥反应的TR。

然后构建了一个急性排斥反应的预测模型，以确定在排斥者TR和非排斥者TR之间具有最佳区分能力的生物标志物的最佳PT组合^圣和2^nd几周以及1^圣由于所有急性排斥反应发生在PT的第一个月。

急性排斥反应的发生与%CD8有显著的相关性⁺CD69⁺和% CD8⁺CD95⁺水平为1^圣多变量分析。首先是CD4水平⁺CD69⁺, % CD8⁺CD69⁺, % CD4⁺CD95⁺和% CD8⁺CD95⁺，该模型能够预测81.3%的急性排斥事件^圣周PT，当AUC为%CD8的组合⁺CD69⁺和% CD8⁺CD95⁺是0.767。第二，CD4水平⁺CD95⁺和% CD8⁺CD95⁺，该模型能够预测2岁时84.6%的急性排斥反应^nd周PT，当AUC为%CD4组合时⁺CD69⁺, % CD8⁺CD69⁺, % CD4⁺CD95⁺和% CD8⁺CD95⁺是0.775。最后，我们的模型能够预测75%的急性排斥反应1^圣%CD4的AUC为0.883⁺CD95⁺和% CD8⁺CD95⁺组合。

版权所有OAT。版权所有

需要能够反映每个TR中产生的个体反应的新方法来监测免疫抑制治疗并提高治疗的有效性和安全性[10]。因此，在过去的几年里，已经发表了一些研究来阐明T细胞活化表面抗原作为免疫抑制药物免疫调节作用的替代生物标志物的潜在作用。

我们的团队最近报道了一种有效的非侵入性方法，用于监测CD38、CD69、CD95和CD154对同种异体移植的频率，该方法采用回归模型，能够区分那些在移植后第一个月内急性排斥发作高风险的患者[9]。

鉴别肝移植前和肝移植后急性排斥反应风险的预测性生物标志物对于有效调整免疫抑制治疗至关重要，其中精确的剂量供应对维持免疫系统的正确状态起着关键作用。

我们观察到在有和没有急性排斥反应的患者之间，几种T细胞表面抗原的水平有显著差异。特别是，在最近的研究中，肝移植前CD38水平⁺CD4⁺和CD154的⁺CD8⁺在发生急性排斥反应的TR中较高，根据ROC曲线分析的AUC得到的截断值，可以识别具有急性排斥反应高风险的TR。此外，根据逻辑回归模型，这些标记的组合表明TR具有高水平的CD38⁺CD4⁺和CD154的⁺CD8⁺未来急性排斥反应的概率为73%[9]。

此外，在PT早期，我们还发现急性排斥的TR在CD4和CD8 T细胞中的CD69和CD95水平高于未发生排斥的TR。ROC曲线分析的截断值可以将这组TR患者与急性排斥反应高危患者进行分层。具体来说，逻辑回归模型指出CD69和CD95在CD8 T细胞上的结合在1^圣周PT预测81.3%的急性排斥反应;CD69和CD95在CD4和CD8 T细胞上的结合^nd周PT预测84.6%的急性排斥反应发生;最后，CD95在CD4和CD8 T细胞上的结合^圣月PT预测75%的急性排斥反应[9]。

我们的结果与几项研究一致，表明在发生排斥反应的实体器官TR中几种人白细胞膜蛋白水平较高。他们发现，与对照组相比，肾TR中几种T淋巴细胞表面抗原，如CD11a、CD154、CD25、CD71和CD95的表达模式不同[3]。

有相当多的研究表明，淋巴细胞早期激活标志物CD69在经历急性排斥反应的TR中的表达相关。CD69在CD3、CD4和CD8 T细胞上的表达在对照组和未发生同种异体移植排斥反应的TR中较低，反映了急性排斥反应发作时抗原表面表达的差异[11]。此外，其他作者将人类排斥异体心脏移植物的心内膜淋巴细胞浸润表型定为CD69⁺CD8⁺这表明CD69与CD8有关⁺细胞介导的移植物排斥事件[12]。其他作者将CD4和CD8外周T细胞中CD69的高表达与心脏异体移植排斥的组织学证据联系起来[13]。虽然这些研究只关注这些标志物在急性排斥反应中的表达，但我们的研究结果不仅在急性排斥反应中观察到更高水平的TR，而且还提出这些表面生物标志物可以预测急性排斥反应，并在第一次PT中监测对移植物的同种异体反应。

在PT前和PT早期进行生物标志物监测是有用的，因为它可以调整给每个TR的治疗方案，导致个体免疫抑制治疗，不仅可以预防急性排斥反应，还可以预防机会性感染。

我们已经证明，在PT第一个月内的任何时间点，急性排斥反应风险增加的肝TR在CD4和CD8 T细胞中都表现出更高水平的CD38、CD69、CD95和CD154表达。

我们的研究结果表明，监测外周T淋巴细胞上的CD38、CD69、CD95和CD154可能对临床医生有用，以便确定更好的免疫抑制药物剂量，特别是在基线，特别是在第一个月的PT中，LT急性排斥反应的发生率较高[14]。

尽管我们的研究和其他类似报道的研究可能存在局限性，但我们建议监测肝TR的T淋巴细胞外周细胞标志物的表达可能是评估TR免疫状态的有用的急性排斥生物标志物。

结论

我们的研究提供了第一种方法，即PT评估几种表面抗原百分比可能导致急性排斥发展高风险的肝TR分层，从而更有效地预测急性排斥和个性化免疫抑制治疗。

致谢

这项工作的完成得益于Fondo de Investigación Sanitaria [PI11/02686 & PI15/01370]和CIBERehd[由Salud Carlos III研究所(ISCIII)资助]项目的支持。

参考文献

1. 陈晓明，陈晓明，陈晓明(2004)免疫抑制药物的研究进展。Am J移植4: 299 - 310。
2. (2001)。免疫抑制药物——治疗药物监测的作用。临床药学杂志52(补充1):61S-73S。
3. 李建军，李建军，李建军，李建军，等(2003)肾移植术后肾细胞免疫抑制的定量分析。他们的药物监测25: 27。
4. Rostaing L, Puyoo O, Tkaczuk J(1999)根据免疫抑制(环孢素A与他克莫司)，流式细胞术检测稳定的同种异体肾移植受体中1型和2型胞浆内细胞因子的差异。中国移植13: 400 - 409。
5. Millán O, Rafael-Valdivia L, torrademovee, López A, Fortuna V(2013)细胞内IFN-γ和IL-2表达监测作为新肝移植受者急性排斥反应和个人药物反应风险的替代标志物。细胞因子61: 556 - 564。
6. San Segundo D, Millán O, Muñoz-Cacho P, Boix F, Paz-Artal E，等(2014)。高比例的移植前活化调节性T细胞(CD4+CD25highCD62L+CD45RO+)预测肾移植急性排斥反应:一项多中心研究的结果移植98: 1213 - 1218。
7. Boix F, Millan O, San Segundo D, Mancebo E, Miras M等。(2015)表达CD4(+)CD25(高)CD45RO(+)CD62L(+)生物标志物的活化调节性T细胞可能是肝移植排斥反应的危险因素。移植过程47: 2380 - 2381。［Crossref］
8. Millán O, Rafael-Valdivia L, San Segundo D, Boix F, Castro-Panete MJ等(2014)IFN-γ、IL-17和IL-2是否应被视为肝和肾移植急性排斥反应的预测性生物标志物?多中心研究的结果。中国Immunol154: 141 - 154。
9. Boix F, Millan O, San Segundo D, Mancebo E, Rimola A等(2016)培养的外周血T淋巴细胞中CD38、CD69、CD95和CD154生物标志物的高表达与肝移植受体急性排斥反应风险增加相关。免疫生物学221: 595 - 603。［Crossref］
10. Galián JA, Mrowiec A, Muro M (2016) b细胞的分子靶点预防和治疗器官移植中抗体介导的排斥反应。现在和未来。专家意见他们的目标20: 859 - 867。［Crossref］
11. 陈晓明，陈晓明，陈晓明，等。(2003)肾移植患者外周血CD8 T细胞CD69表达与急性排斥反应的相关性。移植76: 190 - 195。
12. Santamaria M, Marubayashi M, Arizon JM, Montero A, Concha M等。(1992)CD8+心肌内膜浸润T淋巴细胞选择性表达活化抗原CD69。哼Immunol33: 1 - 4。(Crossref)
13. Schowengerdt KO, Fricker FJ, bajat KS, Kuntz ST(2000)外周血淋巴细胞早期激活标志物CD69的表达与心脏移植排斥反应的组织学证据相关。移植69: 2102 - 2107。
14. 魏斯纳RH, Demetris AJ, Belle SH, seberg EC, Lake JR等。(1998)急性同种异体肝移植排斥反应的发生率、危险因素和预后影响。肝脏病学28日:638 - 645。