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摘要

本研究的目的是评估骨吸收标记物抗酒石酸酸性磷酸酶isoform5b (TRACP 5b)在检测肾细胞癌(RCC)患者骨转移中的诊断价值。对64例经组织学证实的肾细胞癌患者的血清样本进行分析。采用骨显像将患者分为两组:30例无骨转移的肾细胞癌和34例有骨转移的肾细胞癌。使用骨陷阱法分析血清中TRACP 5b的浓度。骨转移患者TRACP 5b浓度(中位数:31.9 U/L)显著高于无骨转移患者(中位数:8.7 U/L) (p=0.014)。提高TRACP 5b浓度检测骨转移的敏感性为76.5%，特异性为36.7%。TRACP 5b似乎是RCC患者骨转移的有效生物标志物。

关键词

TRACP 5b, ACP5，肾细胞癌，骨转移，骨吸收标志物

缩写

肾细胞癌：肾细胞癌，ROC：受试者操作曲线，T（+）BM(−): 组织学证实的肾细胞癌患者，无骨转移证据，T（+）BM（+）：组织学证实的肾细胞癌患者和骨转移患者，TRACP 5b：抗酒石酸酸性磷酸酶亚型5b，U/L：单位/升

介绍

肾细胞癌(RCC)占肾脏恶性实体病变的90%。在美国，每年大约有65000例肾癌新病例和近14000例肾癌死亡。肾细胞癌的发病率在60 - 70岁之间。危险因素为男性、吸烟、肥胖和高血压。

在过去几年里，观察小虽然在肾癌的发病率不断增加。影响肾癌的发病率的各种因素进行了鉴定。一个因素是生活方式的改变，特别是关于肥胖和吸烟的习惯。另一个重要因素是更好地诊断，即更频繁地使用高分辨率的技术设备，如超声，计算机断层扫描和磁共振成像。使用这些技术，早期肾癌往往是由事故检测。许多这些案件均为合格品根治性治疗[3,4]。

RCC的发生率表示的地区差异和3和10每100,000之间的范围内。RCC的所有阶段的5年存活率为40％和60％[3,4]之间估计。相比之下，RCC转移的5年生存率估计是不到10％。因此，为了确认或排除转移是用于患者的预后与RCC [2-4]是必不可少的。在诊断时，的RCC患者约20％-30％被发现具有转移。骨是在患者肺部[2,5,6]之后转移的第二最常见的部位与RCC。

关于肾细胞癌的治疗，区分转移性和非转移性疾病是很重要的。在大多数情况下，非转移性肾细胞癌患者可以手术治疗。如果发生转移，所有可用的治疗方案都是姑息治疗。化疗、放疗和免疫治疗只能在一定程度上延长预期寿命[2,5]。

由于转移性和非转移性肾细胞癌的预后和治疗本质上是不同的，因此有必要手头上有准确的诊断设备来检测或排除肾细胞癌的转移。关于肾细胞癌骨转移的诊断，骨闪烁扫描是金标准[2,7]。尽管灵敏度很高，骨闪烁扫描术缺乏特异性[8,9]。此外，骨闪烁扫描术与辐射暴露有关。Ghanem等人的一项研究[9]研究表明，接受骨骼闪烁扫描的患者吸收的有效剂量估计为4毫西弗。高成本、相当大的工作量和患者繁重的程序是骨闪烁扫描术的其他重要缺点[7]（图1和图2）。

图1。骨吸收过程中的多核破骨细胞

图2。TRACP 5b的血清浓度的患者无[BM（ - ）]，并与骨转移[BM（+）]

相比之下，骨形成和骨吸收标志物的分析提供了一种侵入性较小且相对便宜的方法。在大多数情况下，实验室测试只需要静脉血样本。近年来，人们分析了多种骨形成和骨吸收标志物对不同肿瘤骨转移的诊断价值。骨吸收标志物中最有趣的是抗酒石酸酸性磷酸酶5b (TRACP 5b)。

TRACP是一种酶，可以在单核吞噬细胞系统的不同类型的细胞中发现。它具有两种酶的功能。TRACP可能是一种磷酸酶;另一方面，它可能产生活性氧。在人血清中发现了两种形式的TRACP: TRACP 5a和TRACP 5b。TRACP 5a由巨噬细胞和树突状细胞产生，在炎症条件下可提高血清浓度[11,12]。

TRACP 5b中由破骨细胞，其主要功能是骨组织的再吸收产生的。因为TRACP 5b中似乎是由破骨细胞，Halleen独家生产等。还有叶利帕卡拉等。声称TRACP 5b是骨吸收[11,12]的特异性标记物。为TRACP的同工型5b免疫测定是市售的。

以往的研究Halleen等。[11], Lyubimova等。[13]，超等。[14]，和曜等。[15]显示不同肿瘤骨转移影响骨代谢，并诱导血清TRACP 5b水平显著升高。关于肾癌骨转移，荣格的一项研究等。[16] 似乎与上述报告相矛盾。本研究表明，RCC患者在有无骨转移的情况下，TRACP 5b水平没有显著差异。

由于TRACP 5b在不同癌症中对骨转移的诊断价值的不同研究存在差异，我们的目的是验证TRACP 5b是否是检测骨转移的有用诊断工具。类似于荣格等。，我们选择了RCC患者为研究对象。因此，本研究的目的是测试TRACP 5b的血清浓度升高是否可靠地指示骨转移的患者中的存在与RCC。

患者和方法

病人和血液样本

我们的非盲研究包括在法兰克福歌德大学医院接受治疗的64例经组织学证实的肾细胞癌患者。根据骨显像结果将64例患者分为2组：第一组包括30例经组织学证实的肾细胞癌患者，无骨转移迹象。在下文中，这些患者将被称为T（+）BM(−). 第二组包括其余34例经组织学证实的肾细胞癌和骨转移患者。这些患者被称为T（+）BM（+）。

所有受试者的入选标准为年龄> - 18岁，经组织学证实为肾细胞癌。排除标准为近期骨折、明显骨质疏松、甲状旁腺功能亢进和双膦酸盐治疗。两名患者因为甲状旁腺功能亢进而被排除在研究之外。

用血清管采集血样。在1小时内，所有样品以3000转/分钟的速度离心10分钟。血清随后保存在-80℃^°直到分析C。这些血液样本是在2006年1月至2007年7月期间在歌德大学医院采集的。

骨TRAP法

TRACP 5b数据使用Bone TRAP Assay (Immunodiagnostics Systems GmbH, Mainzer Landstrasse 49, 60329 Frankfurt, Germany)获得。这种分析方法半定量地测量体外检测血清中TRACP 5b片段的活性。在Bone TRAP试验的第一步，用涂有单克隆抗小鼠免疫球蛋白G抗体的微滴度板与单克隆抗tracp抗体结合。第二步，加入TRACP标准、对照和患者样本。释放试剂诱导TRACP从结合蛋白中分离出来，分离出来的TRACP分子与固定在微滴度板上的抗TRACP抗体结合。在pH值6.1(抑制TRACP 5a活性)时，加入对硝基苯基磷酸盐，骨陷阱检测的底物。最后，在孵育60分钟后，加入氢氧化钠终止酶-底物反应。在405nm处进行分光光度测量。

统计数据

确定T(+) BM()组和T(+) BM(+)组的中位数和范围。计算敏感性、特异性以及阳性和阴性预测值。绘制受试者工作曲线(ROC)。所有统计计算使用SPSS 16.0软件(SPSS Statistics)、Bias Windows 9.17版本(Epsilon)和Microsoft Excel 2007。

结果

在我们的研究中，TRACP 5b的血清浓度范围为1.0至55.4 U / L的组T（+）BM在（ - ）和从0.6至1000 U / L基团T中的（+）BM（+）。我们发现显著（P = 0.014）患者高TRACP 5b水平与RCC与成熟的骨转移（中位数为31.9 U / L）比在RCC患者无骨受累对照组（中位数为8.7 U / L）。

结果如表1所示。根据Salminen的一项研究，在本研究中，TRACP 5b的截止值为5.0 U/L等。[17]，他使用Bone TRAP Assay分析了前列腺癌患者的TRACP 5b作为骨骼变化的标志物。

表1。在RCC患者的TRACP 5b的值的描述性统计

研究小组	病人人数	TRACP 5 b (U / L)
中位数	范围
T (+) BM(−)	30.	8.7	1.0-55.4
T（+）BM（+）	34.	31.9	0.6-1000

两组中位数均为T（+）BM(−): 8.7U/L和T（+）BM（+）：31.9U/L显著高于本研究中使用的临界值（5.0U/L）。特异性为36.7%；敏感性为76.5%。我们使用TRACP 5b测试了不同的临界值是否更适合于RCC患者骨转移的诊断。使用ROC分析，我们确定了我们研究的现有值在50.0 U/L时的最佳临界值。曲线下面积（AUC）值为0.68。ROC曲线如图3所示。我们计算了临界值为50.0 U/L时的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值，并比较了临界值为5.0 U/L和50.0 U/L时TRACP 5b的诊断值。临界值为5.0 U/L和50.0 U/L时的质量参数如表2所示。

表2。TRACP 5b截止值为5.0 U/L和50.0 U/L时的质量参数

	灵敏度 （％）	特异性（％）	阳性预测值（%）	阴性预测值（%）
截止:5.0 U / L	76.5	36.7	57．8	57.9
截止:50.0 U / L	47．1	96.7	94.1	61.7

图3。ROC分析TRACP 5B

目前，RCC患者骨转移的诊断标准是骨显像[2,7]。尽管骨显像具有较高的灵敏度，但缺乏特异性。骨显像的进一步缺点是成本高，劳动强度大，辐射暴露。用于识别骨转移的其他诊断设备有常规x射线、磁共振成像、计算机断层扫描和正电子发射断层扫描/计算机断层扫描。除了常规的x射线成像，所有这些检查都需要大量的劳动。此外，它们是成本密集和耗时的[7-9]。

当前研究中特别感兴趣的是开发一种更准确、更经济的骨转移检测诊断试验。一种方法是分析骨代谢过程中产生的骨形成和吸收标记物[10,11,16,18]大量研究分析了不同肿瘤的骨转移对骨形成和骨吸收标志物的影响等。[10]和神谷等。[18]发现骨转移时不同骨形成和骨吸收标志物浓度显著升高。海伦的结果等。[11], Lyubimova等。[13]，超等。[14] ，和姚等。[15]显示骨吸收标志物TRACP 5b在骨转移问题中有很好的发现。

在我们的研究中，有骨转移的肾细胞癌患者（中位数：31.9）的血清TRACP 5b水平显著（p=0.014）高于无骨转移的患者（中位数：8.7 U/L）血液样本中TRACP 5b浓度升高表明骨转移的敏感性为76.5%，特异性为36.7%。ROC曲线下面积为0.68。因此，我们的研究表明，RCC患者中TRACP 5b浓度升高与骨转移之间存在显著相关性。

此外，我们的研究结果表明，需要进一步分析用于骨转移诊断的TRACP 5b截止值。对于本研究中获得的TRACP 5b浓度，我们在ROC分析中确定了最佳临界值为50.0 U/L。使用50.0 U/L的截止值而不是Salminen推荐的截止值5.0 U/L等。[17]， TRACP 5b分析的质量参数发生变化。敏感性由76.5%降至47.1%;然而，特异性从36.7%增加到96.7%。

以往关于TRACP 5b作为骨转移标志物的研究表明，可以采用不同的截止值。Korpela等。[19]识别它们与乳腺癌患者的研究中，最佳TRACP 5b的截止在3.65 U / L由ROC分析。姚明等。[15]测定非小细胞肺癌患者的TRACP 5b最佳临界值为2.551 U/L。这些截止值大大低于我们确定的截止值。TRACP 5b在骨转移诊断中的最佳截止时间尚未确定，因此需要进一步的研究。

大量研究证实TRACP 5b的相关性对于骨转移的诊断。Lyubimova等。在乳腺癌患者中，TRACP 5b检测骨转移的敏感性为82%，特异性为87%，在前列腺癌[13]患者中，敏感性为71%，特异性为83%。同样，Korpela的一项研究等。说明在乳腺癌患者骨转移时，TRACP 5b值显著增加。结果显示其敏感性为87%，特异性为62%。姚明等。分析TRACP 5b对非小细胞肺癌骨转移的诊断价值。根据他们的数据，骨转移患者的TRACP 5b显著升高，敏感性为63.9%，特异性为76.8%[15]。

荣格进行的一项研究结果等。与上述报道相矛盾。他们的研究结果没有显示有骨转移和无骨转移患者的TRACP 5b水平有显著差异。此外，在他们的研究中，非骨转移患者的TRACP 5b值高于骨转移[16]患者。我们的结果没有证实他们的发现，因为我们发现，与无骨转移的RCC患者相比，有骨转移的RCC患者的TRACP 5b水平显著升高。总之，根据我们的结果，尽管文献中存在争议，但TRACP 5b检测在骨转移诊断中的相关性是明显的。

总之，我们的研究结果表明，TRACP 5b是RCC患者骨转移的有效生物标志物。TRACP 5b可能是一种潜在的骨转移筛查工具或随访标记物。然而，由于该方法的敏感性为76.5%，特异性为36.7%，我们不推荐该方法替代传统方法，即骨闪烁造影检测骨转移。要证实TRACP 5b作为癌症患者骨转移标志物的意义和潜力，还需要进行更大规模、更多患者和不同癌症类型的研究。