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摘要

我们于2014年5月至9月在Liaquat医学和健康科学大学病学系和海得拉巴Isra大学医院合作开展了一项横断面研究，以确定慢性髓系白血病患者费城染色体的频率以及标准和变异易位的频率。根据纳入选择了145例诊断为CML的病例样本。骨髓和外周血标本采集于肝素化钠瓶中。根据ISCN的人类细胞遗传学命名指南进行核型分析，使用细胞视觉系统进行图像分析，逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)识别各种BCR- ABL转录本。Ph+和Ph-染色体分别为133例(91.7例)和12例(8.2%)。133条Ph+染色体中，标准染色体121例(90.9%)，简单变异9例(6.7)，复杂变异3例(2.2%)。Ph + 133(91.7%)在所有受试者中均为bcr-abl阳性。12例(8.2%)Ph-受试者中，7例(%)bcr-abl阳性，5例(%)bcr-able阴性。bcr-abl转录本的敏感性和特异性分别为95%和100%。本研究报告费城染色体为90.9%，变异细胞遗传学异常较低，与其他国家的报道相似。 Proper assessment of the variant translocations requires better categorization of these translocations.

关键字

费城染色体，慢性髓系白血病，信德省

简介

慢性髓系白血病(CML)是一种骨髓增生性疾病，其特征是费城染色体(Ph)的存在，这是易位t (9;22) (q34.1;q11.2)。由于这种重新排列，断点群集区域(BCR)位于22q11[1,2]位置的基因与c-Abelson (ABL1)基因在9q34，导致bcr - abl1融合基因，编码一个组成性活跃的酪氨酸激酶蛋白。这种异常的识别对于根据世界卫生组织肿瘤分类1确定的疾病的诊断和治疗是很重要的。首选的治疗方案是酪氨酸激酶抑制剂，[2]已显示出良好的治疗效果。约90%的CML患者通过g带核型检测到Ph值，其中5-10%的CML患者可能有不同类型[3-5]。变异Ph染色体的特征是除9号或22号染色体外，还涉及另一条染色体。它可以是只有一条额外染色体参与的简单型变异，也可以是除9号和22号染色体外有两条或两条以上染色体参与易位的复杂型变异[6,7]。不同的Ph值断点出现在整个基因组的热点，通常在g光带，在基因组[8]的胞嘧啶和鸟嘌呤(CG)最丰富的部分。然而，碱度变异的产生机制和碱度变异染色体之间生物学差异的分子基础还不完全清楚。最近,Albanoet al。[10]报告了他们对基因表达谱(GEP)进行的一项研究，使用微阵列来识别这些差异。

变异Ph染色体的预后意义已经被讨论过了[11]，已经证明变异畸变不影响细胞遗传学或分子反应，甚至不影响临床结果。变异Ph染色体与驱动疾病进展的附加染色体异常或克隆进化相区分。克隆进化是遗传不稳定性的反映，其特征是过渡到晚期[12]期。在这种情况下，i (17q)，第二个Ph和+8经常被发现[1]。对当地文献的搜索显示，只有少数的研究已经进行和报道，因此迫切需要进行更多的研究，以探索我们信德当地人群中慢性髓系白血病病例的细胞遗传学和分子异常。

对象和方法

该横断面研究于2014年5月至9月在Liaquat医学和健康科学大学病理科、Jamshoro和Isra大学医院海得拉巴进行。纳入145例新诊断的CML病例样本。急性白血病、红细胞增多症、原发性血小板增多症和骨髓纤维化、多发性骨髓瘤患者被排除在研究之外。包括确诊的CML病例，以及急性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤患者。从患者身上取下书面知情同意书。这项研究得到了海得拉巴Isra大学伦理委员会的批准。

采用适当的方法在肝素化钠抽真空器中采集骨髓和血液样本。在自动血液分析仪Sysmex XN 1000i上进行全血细胞计数。根据ISCN人类细胞遗传学命名指南进行核型分析，使用细胞视觉系统进行图像分析，逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)用气归血试剂盒鉴定各种BCR- ABL转录本。

数据采用SPSS 21.0版本(IBM, Corporation)和Microsoft excel进行分析。连续变量以均数±标准差表示，并采用学生t检验进行分析。分类变量分析采用卡方检验，结果以频率表示和百分比。数据以表格、图形和图表的形式呈现。p值≤0.05为显著性。

结果

年龄平均±SD为36±11.7岁。145例病例中，20-29.9岁和30-39.9岁年龄组分别占47.5%和44.8%。145例中男性109例(75.1%)，女性36例(24.8)(p=0.001)。74.4%的病例出现贫血，46.2%的病例出现红细胞压积(<20%)。68.5%的病例出现>5万/ μ L的白细胞增多。

Ph+和Ph-染色体分别在133例(91.7)和12例(8.2%)病例中出现(图1)。在133例Ph+染色体中，标准染色体121例(90.9%)，简单变异9例(6.7%)，复杂变异3例(2.2%)，见表1和图2。简单和复杂的变异易位见表1。Ph + 133(91.7)在所有受试者中均为bcr-abl阳性。在12例(8.2%)Ph-受试者中，7例(%)为bcr-abl阳性，5例(%)为bcr-abl阴性(图3)。计算bcr-Abel转录本的敏感性和特异性分别为95%和100%。

表1。费城染色体的简单和复杂变异(n=12)

	Ph值变异染色体	染色体易位
1.	简单的变体Ph值	46 xy t(16、22)
2.	简单的变体Ph值	46 xx t(19、22)
3.	简单的变体Ph值	46 xx t (13; 22)
4.	简单的变体Ph值	46 xy t(17、22)
5.	简单的变体Ph值	46 xx t (11; 22)
6.	简单的变体Ph值	46 xx t(18、22)
7.	简单的变体Ph值	46 xy t(15、22)
8.	简单的变体Ph值	46 xx t(14、22)
9.	简单的变体Ph值	46 xx t(12、22)
10.	复杂的变体Ph值	46 xy t(6、9、22)
11.	复杂的变体Ph值	46 xx t(5、9、22)
12.	复杂的变体Ph值	46 xx t(7、9、22)

图1所示。费城染色体频率

图2。费城染色体变异的频率

图3。研究人群中bcr-abl转录本的频率

CML -慢性期、加速期和爆发期转录本的细胞遗传学和分子分析见表2。最常见的细胞遗传学异常是B3a2、b2a2和B3a2 +b2a2，分别在70%、34%和2%的病例中发现。

表2。病例转录本的细胞遗传学和分子分析

成绩单	慢性阶段	加速	爆炸
	(n = 130)	阶段(n = 9)	危机(n = 6)
b3a2	70％	3％	-
b2a2	24%	-	1%
b3a2 + b2a2	34%	-	-
b3a2 19 a2 + e	2%	-	-
b2a2 19 a2 + e	-	-	2%

Disscussion

CML是一种典型的骨髓增生性疾病。CML是白血病的一种，可以通过典型的临床、血液学和形态学特征进行诊断，如果在适当的临床背景下进行解释。费城染色体(Ph)是a必要条件CML。费城染色体和bcr-abl细胞遗传学异常必须在所有慢性、加速和爆发危机期的CML病例中检测到[13-15]。

在本研究中，90.9%的病例检出了pH染色体，这与以往报道的90-95%的病例检出pH染色体的结果一致[14-16]。在本研究中70%的病例中检测到额外的细胞遗传学异常，如表2所示。

这一发现与以往研究报道的70- 80%的频率完全一致[15,16]。最常见的细胞遗传学异常为b3a2、b2a2和b3a2+b2a2，分别在70%、34%和2%的病例中发现(表2)。这一发现与西方国家以往的研究结果一致[17-21]。然而，此前的另一项研究报告，在[22]病例中，b3a2和b2a2的频率分别为55%和40%。这些差异可能是由于样本量、抽样技术、研究设计以及地域差异所致。Paz-y-Minoet al。发现在厄瓜多尔Mestizos CML患者中b3a2转录本的频率为5.4%，b2a2转录本的频率为94.6%。研究结果与本研究结果相反(表2)等．发现b3a2bcr - abl在97例费城阳性墨西哥CML病例中，28%的病例有转录本，59%的病例有b2a2, 13%的病例同时有b3a2/b2a2转录本。研究结果与本研究不一致(表2)。Ruiz-Argüelles等艾尔。研究了238例Ph阳性CML的墨西哥meestizos患者;54.2%为b3a2亚型，43.2%为b2a2亚型，2.5%为b3a2/b2a2亚型。研究结果与本研究一致(表2)et al。进行了RT-PCR检测bcr - abl22例CML患者。其中15例(68%)处于慢性期，5例(23%)处于加速期，2例(9%)处于囊胚期;59%的患者有b3a2, 41%有b2a2转录本。之前的研究结果与现在的研究结果非常接近。Yaghmaieet等人研究了75名伊朗成年CML患者;83%的患者表达其中一种p210bcr - abl转录本(b3a2, 63%， b2a2, 20%)，其余显示b3a3、b2a3、e1a2的一个转录本或b3a2和b2a2的共表达。B3a2和b2a2在5%的患者中共表达。Mondal等艾尔。[23]研究了122例CML患者，细胞遗传学分析细节未提供。在122例患者中，112例(91.8%)患者对四种连接类型中的一种或多种检测呈阳性。上述研究结果与本研究结果一致。Polampalliet al。[24]研究了202例CML患者;138人(68%)有过b3a2bcr型转录本在本研究中的一致性为70%。64人(32%)有b2a2类型，这也与我们在表2中34%的调查结果一致。本研究的Ph阳性结果与印度此前报道的研究结果相比较[25-28]。本研究报道了费城染色体及其变异和细胞遗传学异常，与文献中大多数研究一致。本研究的优势在于前瞻性设计、纳入和排除标准。目前的局限性可能是样本量小，由于缺乏现代化的实验室设施和资金问题，我们无法分析所有的细胞遗传学异常。

结论

本研究报告费城频率为90.9%，细胞遗传学异常与其他国家的报告相似。为了更好地管理我们当地的CML病例，必须进行细胞遗传学和分子研究。总之，这项研究提供了对CML病例中细胞遗传学和分子异常的进一步了解。

利益冲突声明

所有作者声明他们没有任何利益冲突需要声明。

鸣谢

我们感谢以色列大学和利亚卡特大学的临床工作人员，他们为这个项目提供了艰苦的帮助。我们感谢Khaskali博士，他帮助我们塑造了这份手稿。

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