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摘要

摘要目的:试验反复应用“Munari”卡宴辣椒巴布质单独(MUN)或联合使用(COMB)与神经肌肉电刺激(NMES)和按摩对非特异性慢性腰痛(LBP)的安全性、镇痛、功能和活动能力的累积效应。

设计:干预试验前后。非特异性慢性LBP患者3周内用“Munari”治疗10次。在COMB中，在“Munari”之后，进行15分钟的按摩和15分钟的NMSE。研究开始前评估血压、急性期蛋白(ESR、CRP、CK、白蛋白)、皮质醇和炎症生物标志物(TNF-a、IL-6、sp-选择素)的循环水平^圣在10点之后^th治疗。在同一时间点，测量包括VAS问卷、功能和活动能力测试(ODI, Schober)和血清中参与炎症、疼痛信号和肌肉内稳态的mirna水平。

结果:模联时，血压和疼痛明显减轻。在COMB测试中，功能和活动能力测试得分明显提高。在两组中，急性期反应或炎症生物标记物的循环水平没有增加，调节疼痛信号的mirna明显被调节。

结论:反复使用Munari治疗非特异性慢性腰痛是安全有效的，特别是结合NMES和按摩时。

关键字

腰痛;辣椒素;trpv1受体;按摩,nmse

简介

下腰痛(LBP)被定义为肋缘和臀下皱襞之间的疼痛，伴或不伴腿痛[1]。在绝大多数病例(高达90%)中，它是非特异性的，与全身状况、骨折或直接创伤无关。只有10%的病例与特定的病理有关。慢性腰痛的定义是——持续至少三个月的腰痛。

低成本的治疗方法，如天然药物常用于治疗急性或慢性腰痛的疼痛部位[2-5]。许多疗法包括局部草药应用，其中含有发红物质(如辣椒粉，CP)或通过活性炭和铁粉的化学反应产生局部热量的包裹。CP中最丰富的生物碱是辣椒素，一种瞬时受体电位香草素1 (TRPV1)[6]的高选择性激动剂。该通道可渗透钙离子^{2 +})位于皮肤和肌肉痛觉感觉神经上，这些神经携带传入性疼痛[6]。

辣椒素与TRPV1结合增加细胞内Ca^{2 +}浓度、激活钙^{2 +}直接抑制线粒体电子传递链，从而诱导线粒体功能障碍[7,8]。这两种机制导致神经纤维的去功能化，并负责减轻疼痛和治疗区域[9]的长期脱敏。

1909年，Giuseppe“Munari”博士描述了一种由发红物质组成的制剂，它能在治疗区域产生血管舒张和增加血液循环。这种方法被用来治疗肌肉骨骼系统不同部位的疼痛，并在意大利和邻国闻名。在奥地利，一种类似的应用包括CP和高岭土粉(所谓的“Munari”)，含有低剂量的辣椒素，仍然常用来治疗腰痛和其他肌肉骨骼功能障碍[4]。尽管该疗法应用频繁，且耐受性良好，但关于其治疗效果的科学论文却非常少[4,10]。在某种程度上，这是因为这种治疗在物理医学中有着悠久的历史，可以追溯到药物是根据经验观察开发出来的时候。

然而，新方法的获得并不一定意味着“历史”疗法就没有治疗效果。不幸的是，一项由奥地利社会保险实体联合会资助并由Enthaler等人进行的研究[12]。他的结论是，缺乏低剂量CP应用的证据等于没有治疗效果。只提到了可能的副作用，没有证据。目前尚无关于此类治疗的潜在风险和副作用的研究和数据。

到目前为止，有关辣椒素治疗LBP的科学研究只调查了高剂量CP贴剂(Qutenza^®含有8%辣椒素)[7,8,13,14]。

到目前为止，没有任何循环的生物标志物可以被认为是LBP的特异性或可以预测疾病的易感性或疾病进展。除了多肽和蛋白质，microRNAs (miRNAs)作为信号分子或损伤生物标志物越来越受到关注。MiRNAs是小的非编码rna，在转录后水平负调控基因表达[15]在广泛的生物学和病理过程中发挥作用。miRNAs的表达变化也被观察到在各种疼痛条件下[16]，但目前在疼痛生理学中几乎没有研究。由于其大小、丰度、组织特异性和在血浆中的相对稳定性，miRNAs有望成为监测组织损伤或对治疗方式的反应的唯一可及生物标志物。

在我们之前的研究中，我们已经表明，一次20分钟的低剂量CP(含0.09%的辣椒素)应用对选定的功能和流动性参数有积极的影响，对选定的炎症生物标志物[10]的循环水平没有副作用。

本研究的目的是研究重复低剂量CP巴布质(CPC)作为单一疗法(MUN)或联合神经肌肉电刺激(NMES)和按摩(COMB)治疗慢性非特异性LBP的效果。使用在1^圣在10点之后^th我们分析了一系列生物标志物的循环水平表达，包括与炎症、疼痛和辣椒素相关的作用机制有关的mirna，这些作用机制与疼痛、活动能力和功能参数有关。

材料和方法

参与者:慢性非特异性LBP男性患者按出现顺序交替分为两组:“Munari”组(MUN, n=10，平均年龄65.3±7.3岁，BMI 27.6±4.1kg/m)²)和联合治疗组(COMB, n=10，平均年龄57.7±5.3岁，BMI 27.7±2.7 kg/m²)．所有受试者自愿参加研究，并给予书面知情同意。负责的伦理委员会获得了Comenius大学、布拉迪斯拉发体育学院(nr. 2017LBI01)的批准，并在clinicaltrials.gov下进行了临床试验注册，编号为NCT03440125。所有受试者的入选标准为:男性，年龄18-75岁，BMI低于35 kg/m²患有非特异性慢性腰痛(至少3个月)。敏感性障碍(如神经系统疾病引起的)、损伤、干预区域的开放性伤口或皮疹、已知对应用物质的过敏、艾滋病毒、丙型肝炎和其他血液传染病是所有受试者的排除标准。招募、测量和治疗在科美纽斯大学体育学院进行，布拉迪斯拉发(斯洛伐克)。

实验设计:两组中，MUN和COMB的每个受试者都在3周内涂抹5% CPC贴剂(0.09%辣椒素含量)10次，持续20分钟，如[10]所述。在COMB组，患者在接受综合治疗后，首先进行i) 15分钟的经典背部按摩，最后使用Stimulette rx器械对腰部进行15分钟的NMES (Dr. Schuhfried Medizintechnik GmbH, Van Swieten-Gasse 10, a -1090 Wien，奥地利)。采用以下参数进行调频刺激:双相三角脉冲，脉冲宽度为0.8 ms，脉冲间隔为1秒，每3秒从3.3 Hz调制到32.9 Hz。物理治疗师提供Munari应用程序和联合疗法。

血液采样:从未禁食的受试者中采集血液样本^圣在10点之后^th治疗，0.5小时后和48小时后10^th，以评估急性和长期影响。

静脉血样本(7.5 ml)收集在血清分离收集管中进行血清分离，并在EDTA管中进行血浆分离，以3000转/分离心10分钟。

测量程序和临床试验

血压:使用自动气压计测量血压，袖带环绕上臂。两次测量，一次在第一次之前，另一次在第10次结束时^th治疗。整个测量过程是根据制造商的使用说明在两个手臂上运行的。

研究前进行问卷调查(VAS)和临床试验(ODI和Schober)^圣10小时后48小时^th治疗后取血样，以避免临床检测性能上可能出现的血液参数变化。

视觉模拟比例尺测量范围为0-100 mm，用于评估评估前48小时内日常生活活动(VASr)和活动中(VASa)的平均疼痛。值0表示没有疼痛，值100表示可能出现的最严重疼痛。

Oswestry残疾指数[17]是一份用于测量受试者因LBP而导致的永久性功能障碍的标准问卷。它包含十个主题，评分范围为0 - 5。所有分数相加，然后乘以2得到指数。0表示没有残疾，100表示可能的最大残疾。

Schober的测试用来测量下背部的弯曲能力。受试者保持直立姿势，不穿衣服(内衣除外)[18]。然后检查者定位棘突S1，标记它并在头颅10cm处做第二个标记。要求患者做三次躯干最大屈曲，膝盖伸直。在三次重复中，取这两个标记之间最大的距离作进一步统计分析。

血清学评估

临床化学及实验室参数:用Alifax THL沉降仪计算红细胞沉降率(ESR)。血清样本中的c反应蛋白(CRP)、白蛋白和肌酸激酶(CK)用Siemens Dimension Vista 1500多参数分析仪分析，皮质醇用Siemens Centaur XP免疫分析系统分析。整个程序是按照制造商的使用说明运行的。

炎症生物标记:ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)和可溶性血小板选择素(sp -选择素)的含量。所有试剂盒均购买自研发系统(人TNF-α免疫分析法HSTA00D、人IL-6免疫分析法HS600B和人sp -选择素/CD62P免疫分析法BBE6)。所有程序都是按照制造商的使用说明运行的。为避免分析间差异，所有样品在同一天用同一试剂盒重复分析。

microrna的简介:我们根据先前的证据选择了一组miRNAs，这些miRNAs在炎症和辣椒素局部治疗调节的细胞过程中起作用。具体来说，我们选择了调节TRPV1转录的mirna (miR-199a和miR-199b)[19,20]，炎症介质(miR-155, miR-21)[21,22]，内皮细胞损伤(miR-126)[23]线粒体Ca^{2 +}摄取(miR-25)[24]和骨骼肌内稳态(miR-1, miR-133和miR-206)[25,26]。为了选择三个最合适的miRNAs进行归一化，我们对我们的数据应用了一种类似genom的算法。算法识别出hsa-miR-146a-5p、hsa-mir-23a-3p、hsa-miR-191-5p，对实验数据进行归一化处理。Hsa-mir-451a和hsa-mir-486-5p也被纳入面板作为溶血标记，用于检测纯血浆样本中的血细胞污染。miRNA检测使用FireflyTM颗粒技术进行多重循环miRNA检测，这是一种新技术，可以直接从血浆中分析选择的miRNA，不需要在标准流式细胞仪[27]上进行RNA纯化。使用FirePlex Analysis Workbench对原始数据进行分析。凝胶-颗粒杂交流式细胞术实验的折叠变化差异表达量计算为最后一次处理后(0.5 h后和48 h后)各miRNA归一化表达量与处理前各miRNA归一化表达量之比。

统计分析:统计分析(使用SPSS 20.0软件，SPSS Inc.， Chicago, USA)如下所示。对所有参数进行描述性统计计算，并以均数±标准误差(SEM)报告。采用Shapiro-Wilk检验评价数据的正态分布。采用2-方差分析(时间(3)×条件(2))对不同治疗方式在3个时间点的效果进行评价。对于仅在两个时间点进行评估的参数，将其简化为时间(2)×条件(2)。此外，在每组中分别进行重复方差分析测量或配对t检验来评估治疗效果。效应大小用η进行评估²测试并解释为小(~0,01)、中(~0,06)或大(~0,26)。用Bonferroni校正t检验计算2-way ANOVA的两两比较。

结果

所有入选的受试者(n=20)完成了所有测量程序和临床试验。

反复使用“Munari”可以降低血压:这是昆坦扎单次治疗的副作用之一^®贴片(8%辣椒素含量)是血压升高[28]。在我们的研究中，10次“Munari”应用(0.09%辣椒素含量)后，收缩压显著降低(139.40±4.37)vs。132.60±4.11 mmhg, p=0.05)和舒张压(86.00±4.62vs。MUN组血压为81.10±3.63 mmhg, p=0.03)。血压和收缩压(127.25±3.56)无明显变化vs。后127.75±2.61 mm Hg)和舒张压(86.00±2.38)vs。术后83.17±1.46 mm Hg)。

反复“Munari”治疗后，急性期反应和炎症生物标志物的循环水平没有增加:Qutenza^®贴敷会引起局部的副反应，如发红、瘙痒、灼烧和肿胀，这是由敷处的炎症反应引起的。“Munari”治疗包括低剂量的辣椒素，在应用后立即引起炎症的一些迹象，但在短时间内，在几个小时内消除。

应用部位炎症反应的激活不会导致急性期反应生物标志物(CRP, ESR，白蛋白和CK，表1)或促炎细胞因子TNF-α(表1)的显著或持久变化。在MUN组中，我们观察到抗炎细胞因子IL-6在治疗反应中有升高的趋势(表1)。在两组中，神经源性炎症反应生物标志物(皮质醇，(表1)。虽然皮质醇水平的变化在正常范围内，但sp -选择素在各个时间点的变化都高于参考值。

表1．血清中检测的生物标志物水平^圣在10点之后^th治疗。CRP, ESR，白蛋白，CK和皮质醇参考范围包括在每个包装插入说明。TNF-a、IL-6、sp -选择素参考值与实验室测定的同年龄健康人血清平均浓度相对应。数值以平均值±SEM表示，显著值以粗体表示;^＄事后t测试0.029 vs. 10后0.5小时^th；§事后t检验0.04 vs. pre1^圣；°事后t检验0.002 vs. pre1st;*事后t测试0.006 vs. 10后0.5小时^th；^＆事后t检验0.017 vs.前1^圣．

妈妈	参考价值	前1圣	0.5小时后10th	48小时后10th	RANOVA
CRP(毫克/毫升)	0 - 5	3.8±0.9	3.0±0。1	3.15±0.2	0.438
ESR 1小时(毫米)	主	8.0±6.4	留言。	9.0±8.0	0.362
白蛋白(g / L)	35-52	39.5±0.9	39.9±1.3	39.6±1.3	0.941
CK (U / L)	0 - 190	123.1±14.4	132.6±24.6	117.1±13.7	0.957
皮质醇(µg / dl)	4.3 - -22.4	12.2±1.7	8.4±0.8	11.1±0.8＄	0.024
TNF-a (pg / ml)	1.76	1.2±0.2	1.2±0.2	1.2±0.2	0.962
il - 6 (pg / ml)	1.26	1.7±0.3	1.9±0.4	2.0±0.6	0.871
sP-selectin (ng / ml)	41.62	45.2±5.5	38.3±13.7§	41.26±4.8	0.03
梳子
CRP(毫克/毫升)	0 - 5	3.0±0。1	2.9±0.0	2.9±0.0	0.429
ESR 1小时(毫米)	主	6.0±5.6	留言。	4.0±2.9	0.393
白蛋白(g / L)	35-52	40.8±0.7	39.9±0.5	40.2±0.6	0.542
CK (U / L)	0 - 190	138.6±14.6	132.8±15.1	125.8±13.3	0.313
皮质醇(µg / dl)	4.3 - -22.4	11.9±0.8	9.4±0.9°	10.8±1.5＊	0.009
TNF-a (pg / ml)	1.76	0.8±0.1	0.8±0.1	0.8±0.1	0.344
il - 6 (pg / ml)	1.26	1.4±0.2	1.3±0.2	1.5±0.3	0.957
sP-selectin (ng / ml)	41.62	60.8±4.5	50.5±2.3＆	58.1±5.6	0.538

反复“Munari”治疗在减轻疼痛和改善行动能力方面是有效的:最常见的临床经验是，慢性腰背痛患者受疼痛制约，通常表现为髋部活动能力下降(在躯干弯曲和抬起时，腰部倾斜有限)和脊柱(躯干)的胸椎和腰椎水平过度屈曲。经过经典的物理康复治疗，在大多数接受治疗的患者中，临床检查显示肌肉紧张和压力敏感性降低，疼痛减轻和活动能力改善。

就像在我们的临床经验中一样，在反复应用低剂量CP治疗的受试者组中，我们观察到疼痛显著减少，残疾测试分数显著提高(表2)。通过VAS问卷评分降低，接受治疗的受试者描述了治疗后疼痛减轻的情况。只有模联组在活动过程中疼痛明显减轻(表2)。

在COMB组中，评估永久性功能障碍(ODI，表2)和躯干功能活动能力(Schober测试，表2)的评分显著降低。在模联组中，对移动能力的影响较轻，因为移动能力测试分数没有变化，ODI测试分数没有显著下降，尽管观察到明显的下降趋势(表2)。

表2．问卷调查和功能测试。数值表示为平均值±SEM;静止视觉模拟比例尺;VASa =活动过程中的视觉模拟刻度;Oswestry残疾指数;重要值以粗体显示。

		VASr	“瓦萨”号	海外开发	Schober
方差分析(交互)	F	5.147	9.148	2.158	0.554
	p	0.036	0.007	0.157	0.466
	η²	0.222	0.337	0.108	0.030
妈妈	前1圣	2.76±1.69	3.74±2.16	13.0±4.6	14.6±1.2
	邮报》10th	1.35±1.44	1.83±2.23	10.1±5.8	14.7±1.3
	P价值	0．10	<0.05	0．10	0.80
梳子	前1圣	1.94±1.94	3.37±2.41	19.4±9.6	14.9±0.61
	邮报》10th	1.17±1.48	1.78±2.36	12.2±7.8	14.7±0.5
	P价值	0.20	0.13	<0.05	<0.05

2-way方差分析显示VAS评分在休息时存在显著的时间×组间交互作用(F=5.147;p = 0.036;η²=0.222)和运动过程中(F=9.148;p = 0.007;η²=0.337)，这意味着两组VAS评分在10点前和10点后的变化差异具有统计学意义。

反复“Munari”治疗并没有显著调节炎症反应的循环mirna水平:与检测到的炎症蛋白图谱一致，与炎症通路相关的协调多个信号级联的这些miRNAs的循环水平没有明显的调节。在所有接受治疗的受试者中，调节免疫炎症反应和血管生成的miR-155、miR-21和miR-126的血浆谱21-23没有变化。

在我们的分析中，我们检测了miR-451和miR-486-5p作为溶血生物标志物。我们没有发现miR-451和miR-486-5p的显著升高，这表明在我们的样本中没有红细胞污染。此外，由于miR-451在调节促炎细胞因子TNF-α和IL-6的转录方面具有生理作用，我们考虑其血清水平进行分析。的确，在COMB组中，我们观察到miR-451的短暂变化:其血清水平在末次治疗后0.5小时升高，48小时显著下降，几乎回到基线水平(1号前)。

肌肉特异性miR-1和miR-206血清图谱不受重复“Munari”治疗的影响:治疗后观察到LPB患者肌肉张力降低。为了验证骨骼肌适应是否与组织再生有关，我们还检测了那些调节肌源性分化和增殖的mirna (miR-1、miR-206和miR-133)的表达[25,26]。在两组中，我们没有观察到miR-1和miR-206的循环水平有任何显著变化。在模联组中，miR-133的循环水平在0.5小时内短暂下降，在10^th处理(图1A，表3)。

图1A及B:处理诱导MUN (A)和COMB (B)中miRNA水平的显著变化。与治疗前的基线miRNA水平相比，治疗后不同时间点(0.5小时后和10小时后48小时后)的测量值被分配为1的倍数变化(Pre 1)。在所有面板中，使用条形图和须形图，其中水平线表示统计中值，交叉表示统计平均值，误差柱表示最大值和最小值。* p < 0.05;* * p < 0.0

重复的“Munari”应用特异性地调节调节线粒体Ca的miRNAs^{2 +}摄取和疼痛信号:细胞内钙失调^{2 +}内稳态是辣椒素诱发疼痛缓解的机制之一。因此，我们检测了miR-25的表达，它是MCU通道的负调控因子，负责Ca^{2 +}进入线粒体缓冲胞质钙^{2 +}．在两组中，血浆中miR-25水平在10^th我们还检测了调控TRPV1受体转录的mirna 199a和199b的表达，TRPV1受体负责痛觉和辣椒素的特异性靶点。在模联组中，只有miR-199a水平在10^th(图1A，表3)，而在COMB组中，miR-199a和miR-199b在治疗后0.5小时(miR-199b)和48小时(miR-199a)均显著升高(图1B，表3)。

表3。治疗后LBP受试者的miRNAs表达谱显著失调，与疼痛和活动状况相关。单片机=线粒体钙Uniporter;TRPV1=瞬时受体电位排泄通道亚族V成员1;↑或↓=增加/减少;*统计上显著的变化。

uestionnair	时间检查
	0.5小时后	48小时后	目标	疼痛	流动性
妈妈	-	miR-25↓	单片机	降低了*	不变
	-	mir - 199——↓	TRPV1
	mir - 133——↓	-	骨骼肌
梳子	-	mir - 451↓	炎症	减少	改进的*
	-	miR-25↓	单片机
	-	mir - 199↑	TRPV1
	mir - 199 b↑	-	TRPV1

2-way ANOVA统计分析显示，除miRNA 199a外，无时间×组间相互作用(F=4.505;p = 0.019;η²=0.231)，这意味着两组患者血清miRNA 199a水平在10点前和10点后的变化差异有统计学意义。

讨论

含有低到非常高剂量CP的乳霜、膏药和贴片通常用于治疗几种肌肉骨骼功能障碍，包括慢性腰痛[2,13,29]。尽管有严重的局部反应(疼痛、红肿、瘙痒、肿胀、灼烧、干燥、皮疹或肿块)和全身副作用(血压升高、流鼻涕或鼻塞、喉咙痛、咳嗽、恶心或呕吐)，单次使用高剂量CP贴剂(含8%辣椒素的Qutenza®)是很受医疗保健提供者或社会保险机构认可的[7,8,29]。相比之下，“奥地利社会保险实体联合会”仅基于可能的副作用[12]，不推荐低剂量的CP治疗(含有0.09%辣椒素的“Munari”)。因此，本研究旨在测试“穆那里”作为单一疗法(MUN)或与NMES和经典按摩(COMB)联合应用的10种缓解慢性非特异性腰痛的累积效果。

我们的研究结果显示，当与NMES和经典按摩(COMB)结合使用时，重复的低剂量“Munari”治疗具有有益的镇痛效果，改善功能和活动参数(表2)，仅在应用部位产生短期充血反应，没有长期持续或负面的副作用。此外，在模联组中，观察到收缩压和舒张压有积极的长期副作用，这表明由于疼痛缓解，可能有抗高血压的作用。无论如何，要检验这种效应，还需要进一步的、更有针对性的研究。

对炎症级联的影响:我们测试了10次“Munari”治疗的安全性和有效性，分析了主要急性期反应和炎症生物标志物的循环水平。在两组中，所选的生物标志物均未观察到明显变化(表1)，这表明重复应用低剂量辣椒素不会诱导上皮细胞或血管损伤，激活炎症反应级联。尽管如此，在COMB组中，TNF-α和IL-6的负调控因子miR-451在急性期升高，尽管不明显，但在10^th研究表明，mir -451治疗类风湿关节炎的小鼠(SKG小鼠)可以降低关节炎的严重程度和浸润细胞的数量，抑制中性粒细胞趋化，从而减少炎症反应[30]。因此，在COMB治疗后获得的miR-451的长期降低可能导致可能的抗炎作用。

通过皮质醇和sp -选择素测试还观察到了神经源性炎症反应的调节。皮质醇(分解应激激素，也受炎症调节)血清水平的显著变化在急性期或慢性期反应后10^th应用程序。然而，血清皮质醇水平在治疗后相对于预值有所降低，这是治疗的一个积极的长期效应。此外，两组血清sp -选择素水平仅在短期内(应用后0.5小时)下降。由于该蛋白在急性炎症反应(如单纯的血管舒张)中由激活的内皮细胞和血小板表达，观察到的短暂变化可能解释了涂抹后不久皮肤发红、瘙痒和灼烧感，但这不会永久持续。反过来，这些临时的局部部位反应是治疗有效性的积极指标。

与这些研究结果一致的是，作为治疗安全性的标志，未观察到参与免疫炎症反应和生理性血管生成的miRNAs (miR-155, miR-21和miR-126)的血浆谱发生显著变化[21-23]。当新血管的形成对恢复损伤后的血流有必要时，血管生成就会被激活，因此，那些调节血管生成的mirna的循环水平没有显著变化，可能表明在治疗区域没有发生血管损伤。红肿、瘙痒和灼烧感是Caspaicin与表皮细胞上的TRPV1受体结合后激活的生理过程，这反过来又表明了治疗的特异性。

对骨骼肌稳态的影响:在骨骼肌中表达的mirna在骨骼肌生长、发育和维持等多种生物过程中被调节，包括萎缩和肥厚过程。众所周知，miR-1、miR-133和miR-206在产后生长期间的肌形成和对[26]损伤的反应中发挥重要作用。C2C12肌细胞系实验表明，miR-1或miR-206过表达可促进肌源性分化，而miR-133过表达可促进成肌细胞增殖，但抑制分化[25,26]。“Munari”治疗后，miR-1和miR-206的循环水平未受影响，而仅在MUN中，miR-133的值仅在急性期下降(图1A，表3)，可能调节成肌细胞增殖。这些结果表明，重复低剂量辣椒素不会引起骨骼肌损伤，因为调节肌肉肌纤维再生和分化的miRNA通路不是长期激活的。尽管如此，miR-133的调节可能是骨骼肌组织重构的信号，在治疗后肌肉张力降低的临床观察基础上。

对疼痛信号的影响:摄动Ca^{2 +}内稳态是导致传入痛传导神经纤维去功能化的可能机制之一。研究表明，miR-25是MCU的负调控因子，是驱动Ca的通道^{2 +}进入线粒体。在MUN组和COMB组中，miR-25血浆水平在末次治疗后48小时显著下降。miR-25血浆水平的显著降低对MCU转录有积极影响，因此对线粒体Ca也有积极影响^{2 +}也有助于胞质钙的摄取^{2 +}缓冲。这些结果表明，“Munari”治疗可特异性激活调节细胞内Ca的信号通路^{2 +}这是缓解疼痛的基本机制[7]。

在模联试验中，观察到miR-199a血浆水平显著降低是一种急性反应，与疼痛减轻有关。在COMB中，miR-199a和miR-199b均在急性期和长期期显著升高。此外，COMB治疗在缓解疼痛和改善活动能力方面效果显著。MiR-199a和miR-119b被认为是TRPV1表达的负调控因子[19,20,29]。miR-199a在体内的上调通过抑制TRPV1信号来减轻内脏疼痛。而在LBS患者中，miR-199 a/b与内脏疼痛评分之间的负相关已被证实为[20]。这些结果表明，当与NMSE和按摩相结合时，CPC治疗可以调节辣椒素结合受体TRPV1的表达，从而减轻疼痛并改善活动能力(表2和3)。

结论

在本研究中，我们证明了重复使用含有0.09%辣椒素的5% CP，也被称为“Munari”，是一种安全、有效、低成本的治疗非特异性慢性腰痛诱导疼痛缓解的疗法，并可特异性调节炎症和疼痛信号传递相关的miRNAs。当结合NMES和经典按摩时，“Munari”也能促进功能和活动能力的改善。

需要进一步的研究来了解所观察到的miRNAs变化的生物学意义和潜在机制。尽管如此，我们的研究结果表明，miRNAs是更好地表征疼痛的病理生理学以及监测物理医学和康复中不同疗法效果的血清学生物标志物的有前途的候选者。

作者的贡献

SZ进行miRNA分析，解释结果，并撰写稿件;NS进行统计分析;NS, SL, CH, JC, MS, MK进行受试者登记，功能分析，人口统计数据收集，解释结果并参与讨论;SL、CH负责血清和血浆样本的管理、储存和组织运输;SS, FK，解释结果并参与讨论;WH对实验室参数和炎症生物标志物进行了临床化学和血清学分析;香港监督登记和功能分析，解释结果，并参与讨论。

SZ Sandra Zampieri, NS Nejc Sarabon, SL Stefan Löfler, CH Christian Hofer, SS Sascha Sajer, FK Felix Kabas, JC Jan Cvecka, MS Milan Sedliak, MK Mathias Kern, WH Wolfgang Hübl, HK Helmut Kern

致谢

作者要感谢路德维希·玻尔兹曼学会(奥地利维也纳)的财政支持。

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