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摘要

背景和目标：Klotho作为抗衰老激素，通过调节内皮细胞功能和氧化应激参与血管健康。我们设计了一项横断面研究来检验Klotho与中国成年人CAD之间的关系。

方法和结果:共征收冠状动脉造影的100名患者，分为两组。一组由CAD（n = 50）的患者组成，另一组没有CAD（n = 50）。通过使用ELISA获得血清Klotho。与非CAD组相比，CAD组中的血清Klotho水平显着下降（443.0±29.8pg / mlvs。616.5±29.4 pg / ml,P.<0.001）。多重逻辑回归分析显示，Klotho水平的100pg / mL降低与CAD发病率的平均增加30％。

结论：CAD患者血清Klotho水平显着降低。我们得出结论，患者Klotho的缺乏可能是CAD的重要预测因素。

介绍

尽管在预防和治疗方面取得了重大进展，冠状动脉疾病(CAD)仍然是世界范围内死亡的主要原因。不健康的生活方式，如缺乏运动、吸烟和高热量快餐饮食，已被量化为心血管疾病(CVD)的经典危险因素，但CAD的易感性和进展尚未完全阐明。最近，许多新的生物系统被提出，以提供更多关于CVD的信息，从而提高我们对动脉粥样硬化病理生理学和心血管风险评估的理解。

1997年最初在肾远离管状上皮细胞中鉴定Klotho基因[2]。130 kd基因编码新的蛋白质，即克罗托，其被假定为人类衰老过程的调节剂。在小鼠中Klotho基因表达的缺陷导致类似于早产的表型，包括内皮功能障碍，进行性动脉粥样硬化和缩短的寿命[2,3]。可溶性Klotho，Klotho细胞外域的蛋白水解裂解，可检测血液，尿液和脑脊液[4]。易溶克罗索已被证实与血管内皮细胞的抗凋亡作用和心血管保护特性有关[5,6]。Klotho缺乏与血管疾病的加速发展有关[7,8]。最近，一些研究表明，较低的可溶Klotho浓度与较高的心血管疾病可能性独立相关[9-12]。

关于中国成年人血清Klotho水平改变与CVD之间的联系，文献中数据仍然匮乏。我们进行了一项横断面研究，以检测血清Klotho浓度与中国成年人冠状动脉疾病的相关性。

材料和方法

主题

我们招募了100名接受冠状动脉造影的患者陕西省人民医院，包括50例患者作为冠心病和50例没有冠心病。患者少于70岁。简要介绍了一份简短的医疗问卷。排除标准如下：严重的慢性心力衰竭，入学后2周内的传染性进程，慢性肾脏疾病，肾上腺功能障碍或甲状腺功能障碍，或恶性肿瘤和患者用类固醇，非甾体抗炎药或免疫抑制药物治疗。本研究经陕西省人民医院伦理委员会批准。从所有参与者获得书面知情同意书。

冠状动脉造影

根据犹太人技术的股骨或径向动脉法进行冠状动脉造影，并以15帧/秒的速率记录。显着的CHD被定义为至少一个具有> 50％狭窄的主要心外膜血管，而对照被定义为每种主要心外膜血管内的<50％狭窄。

生化分析

所有患者均于禁食8小时后早晨采集血样。用于测定空腹血浆的血液样本克罗索在edta -抑蛋白管上收集浓度，并立即在4°C下离心，收集血浆并在−80°C下保存直到分析。克罗索使用具有Klotho特异性抗体（Cusabio Biotech Co. Ltd.，China）的验证的夹心ELISA测定浓度。用于Klotho的五个等离子体样品用于评估分析内和测定的内部变异系数，其范围为3.5％至4.7％（平均值，4.2％）和4.8％至6.2％（平均值，5.4％）。

统计分析

数据显示为平均值±SD。通过单向分析来计算生化标记物之间的差异（ANOVA）。通过多变量分析来调整年龄，性别和BMI。使用多元逻辑回归分析来识别CAD外观上的有影响力的参数。使用SPSS 16.0进行窗户进行计算。使用双尾P值的<0.05来评估概率，以描述统计显着性。

结果

研究对象概况

表1总结了CAD组(n=50)和非CAD组的人群特征CAD（n = 50）．患者年龄与40至68岁相似（P.> 0.05）。血脂血症，DM，肥胖和吸烟的状态不是重要的莉。CAD组高血压频率较高。

表1。基线入组患者的人口学和临床特征。

范围	所有的病人(N = 100)	CAD组 (N = 50)	无CAD组 (N = 50)	P值
平均年龄(年)	58.2±6.67	58.8±6.64	57.6±6.72	0.363
性（M / F）	59/41	31/19	28/22	0.342
体重指数，kg/m2	22.4±3.2	23.0±2.1	21.9±2.9	0.632
HBA1C（％）	6.01±0.75	5.88±0.48	6.17±0.86	0.264
尿素氮，mmol / l	5.04±1.53	4.73±1.50	5.35±1.51	0.063
肌酸酐,mmol / L.	72.4±16.7	73.1±18.8	71.6±14.5.	0.652
半胱氨酸蛋白酶抑制物c,更易与L	1.04±0.44	0.98±0.29	1.09±0.54.	0.248
甘油三酯,更易与L	1.61±0.83	1.60±0.77	1.61±0.91	0.961
低密度脂蛋白胆固醇,更易与L	2.24±0.82	2.34±0.99	2.14±0.59	0.234
HDL-胆固醇，MMOL / L.	1.07±0.24	1.10±0.27	1.03±0.21	0.152
吸烟状况,(y / n)	54/46	28/22	26/24	0.421
高血压，n（％）	57（57）	34 (68)	23日(46)	0.021
糖尿病，N（％）	20（20）	9（18）	11 (22)	0.402

血清Klotho浓度与CAD

如图1所示，血清克罗索冠心病组为443.0±29.8 pg / ml和....相比616.5±29.4 pg / ml与非elc组相比，差异达到显著的统计学意义．在调整了年龄和性别后多重逻辑回归分析显示Klotho水平是影响CAD外观的参数(比值比=1.003,95%可信区间= 1.002-1.005,p < 0.001)，即Klotho水平降低100 pg/ml与CAD发病率平均增加30%相关。

图1。冠心病组血清Klotho水平为443.0±29.8pg/ml，非elc组为616.5±29.4 pg/ml。

讨论

我们在此发现血清Klotho水平明显降低的中国患者CAD。在logistic回归分析中，Klotho水平降低100 pg/ml与CAD发病率平均增加30%相关。

中国仍然是世界上最大的国家，超过13亿人，在过去30年内，CAD的发病率和死亡率显着增加。动脉粥样硬化是中国残疾和死亡的主要来源，过去二十年后死亡率增加了一倍多，每年超过100万人死亡。因此，在寻找新的生物学系统中探索动脉粥样硬化病理生理学和对心血管风险的评估变得越来越迫切。

Klotho是一种抗衰老蛋白，在许多控制衰老的途径中发挥作用，在血管生物学中引起了广泛的关注。两种形式的Klotho，膜性Klotho和分泌性Klotho，已经被描述，发挥不同的功能[7,8,14]。Klotho作为可溶性的辅助受体，通过介导血管内皮生长因子(VEGF)诱导的内化，参与调控内皮细胞一氧化氮的生成，维持内皮的完整性[15-18]。Klotho还可通过丝裂原活化蛋白激酶途径抑制内皮细胞凋亡，降低肿瘤坏死因子α诱导的核因子κB活化[19-21]。动物研究表明，Klotho缺陷的血管表型与人类衰老和“加速”衰老非常相似，如动脉粥样硬化、血管钙化和内皮功能障碍[2,22,23]。此外,重组可溶性克罗索给药可延长寿命，改善与过早衰老相关的表型．

最近，一些研究表明，克罗索缺乏症可能是是心血管疾病发展的一个重要因素．Navarro-González，et al。[9]进行了横截面研究，其显示CAD患者目前降低可溶性浓度的Klotho和血管壁中的Klotho基因表达水平降低。在内的“衰老在内皮区域”（Chianti地区）（Chianti）的研究发现，包括1023的研究发现，较高的血浆Klotho浓度与社区住宅成年人中具有心血管疾病的较低可能性有独立相关[10]。本研究还发现CAD组中的血清Klotho水平显着下降，这与先前的研究一致。

本研究的实力是患者被年龄匹配募集，慢性肾疾病被排除在外，并且还进行了多元逻辑回归分析，因此应最小化由于这些曝光而产生的混杂。此外，我们使用冠状动脉血管造影进行CHD的诊断。同时，目前分析的一些局限性值得讨论。样本量小，需要进一步的研究在更大、更多样化的样本中验证我们的发现。

结论

总之，本研究表明，克罗托浓度降低的中国患者具有更高的冠状动脉疾病风险。较低的Klotho可能代表冠状动脉疾病的潜在危险因素，并在未来的治疗干预措施下揭示一些新的光线。

确认

本研究由陕西省自然科学基础研究计划项目(No. 2017kjxx -70)、中国博士后科学基金特别资助项目(No. 2017T100789)和陕西省自然科学基金项目(No. 2016JM8025)资助。

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