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摘要

评价二氯甲烷馏分(DCM-F)的影响大片mucronata对非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)大鼠进行研究，并通过对接实验研究其生物学作用。大鼠口服DCM-F (100 mg/kg b.t wt.) 45天。利用血液样本的不同生化谱，另外，估计了动物肝脏组织中糖酵解酶的水平，然后，高效液相色谱-光二极管检测器质谱(HPLC-DAD-MS)用于DCM-F中活性化合物的鉴定。此外，DCM-F中的活性分子与可能的抗糖尿病靶点有对接。DCM-F治疗组大鼠血糖、糖化血红蛋白(HbA1C)、体重、高密度脂蛋白(HDL)、血浆胰岛素和己糖激酶活性均显著降低(p<0.01)。DCM-F治疗可降低血清谷草转氨酶(SGOT)、谷丙转氨酶(SGPT)、碱性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)的作用以及肌酐和尿素的强度。HPLC-MS鉴定出DCM-F中存在ajmalicine, catharanthine，秋水仙碱，筱胺，利血平和vindoline。对接模拟证实，阿马霉素与二肽基肽酶-4 (DPP-4)和酪氨酸蛋白磷酸酶非受体1型(PTPN1)互作，而卡特兰嘌呤与胰岛素受体酪氨酸激酶(IRTK)产生更多亲和力和结合能。本研究推断DCM-F为r . mucronata作为抗糖尿病药物开发的一个有前途的来源。

关键字

阿玛林，二氯甲烷，DPP-4，红树林，长春碱

介绍

糖尿病是一种因胰岛素抵抗或胰岛素分泌不足而导致血糖升高的内分泌代谢性疾病。世界上有7%以上的人被诊断患有非传染性糖尿病，并被认为是死亡的最主要原因[2]。血管、眼睛、心脏、肾脏和神经等人体主要组织和器官的衰竭是糖尿病严重阶段的常见症状。大量的报道描述了NIDDM的特点，以及上市药物[3]的不利结果。然而，在亚洲、非洲、美洲和欧洲人群中，植物医学作为抗糖尿病药物的实践仍在增加。

研究报告称r . mucronataPoir (Family: Rhizophoraceae)具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、抗疟原虫、清除自由基的作用，对α-淀粉酶具有抑制α-葡萄糖苷酶的作用[4-10]。内摩尔化学物质已在r . mucronata如萜类、挥发性衍生物和酚类成分[11-13]。此外，计算研究报告生物碱及其衍生物r . mucronata对依赖于α酮戊二酸的双加氧酶和环氧合氧酶II受体活性具有有效的抑制作用[14-16]。之前，我们报道了二氯甲烷的分数r . mucronata解释不同糖尿病动物模型中潜在的降糖和降血脂活性[17]。在继续的早期研究中，研究植物的活性DCM-F具有控制血糖的能力，并在非胰岛素依赖型糖尿病大鼠模型上进行了评估。HPLC-DAD-MS鉴定DCM-F中的活性分子。此外，DCM-F中的活性分子有对接可能证明生物相互作用。

材料与方法

植物材料

在2010年1月，树叶r . mucronata从泰米尔纳德邦的微咸水域收集到的。凭证样本(#AUCASMB 11/2010)经过验证并存放。之后，清洁叶片，遮光干燥和粗粉。

馏分的提取和制备

取约1500克粉状物，用轻质木质素(3L)在27℃下提取24小时，去除蜡和脂肪物质。然后去除溶剂，滤液用1000ml乙醇(80%)在27℃下提取至多5次。除去溶剂后得到的乙醇萃取物块状为绿色-深棕色。然后，盐酸(1N;500毫升)用于酸化后，与氢氧化钠(NaOH)中和残渣。进一步，分离DCM-F用于实验研究。

实验动物

雄性Wistar白化大鼠(200-250克)，购自安纳马拉莱大学中央动物馆。大鼠饲喂标准颗粒饲料和水，在卫生条件下(27±2℃，湿度50%;12小时明暗循环)。该研究方案已获得阿纳马拉莱大学Rajah Sir Muthiah医学院和医院动物伦理委员会的批准。号:928)印度。

糖尿病的诱导

单剂量腹腔内注射链脲佐菌素(60 mg/kg b.t wt.)诱导过夜禁食大鼠糖尿病，15分钟后注射烟酰胺(I.P, 120 mg/kg b.t wt.)。注射STZ时，给予大鼠5%葡萄糖口服以避免低血糖。通过口服糖耐量试验(OGTT)和空腹胰岛素抵抗指数(FIRI)[18]证实NIDDM为大鼠。

DCM-F对糖尿病大鼠长期治疗的影响

40只大鼠被分为5组(24只糖尿病大鼠和16只非糖尿病大鼠)。格列本脲(600 μg/kg)或DCM-F灌胃45 d。

第1组:正常对照大鼠(0.5% CMC, 1 ml/kg)

组2:正常大鼠+ DCM-F (100 mg/kg)

组3:阴性对照组(糖尿病大鼠;水)

4组:糖尿病大鼠+ DCM-F (100 mg/kg)

组5:阳性对照组(糖尿病大鼠+格列本脲;600μg /公斤)

在实验的第一天和最后一天记录每只实验大鼠的体重。实验动物在早晨7时30分FBS测定用葡萄糖氧化酶-过氧化物法测定1^圣, 8^th, 15^th, 30^th、45岁^th天(Trinder 1969)。根据Asritha Diatech (Hyderabad, India)的协议，还使用诊断试剂盒在大鼠中估计血清HDL-C、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)。

实验最后一天，用氯胺酮注射液(24 mg/kg/b.wt.;即时消息)。使用或不使用抗凝管进行血清和血浆分离的血液样本。在抗凝处理过的试管中，细胞在2000克离心10分钟以分离血浆。ELISA试剂盒(Linco Research, USA)[19]测定血浆胰岛素水平。未使用抗凝剂的血液样本在27℃下凝血20分钟，然后在2000 g离心10分钟分离血清，去除凝块。血清样本糖化血红蛋白(HbA1c)和血红蛋白的测定[20,21]。随后，SGPT、SGOT和ACP测定肝细胞损伤[22,23]。为了评估胆道和肾脏的作用，用标准方法测定了ALP、胆红素、尿素和肌酐[24,25]。取1克干净的肝组织切片，在15ml冰镇蔗糖(250 mM)中匀浆2分钟，10000 × g离心30分钟。在肝匀浆上清液中测定蛋白浓度、fbp酶、G6Pase和HK及标准方法解释的水平[26-29]。

HPLC-DAD-MS鉴定活性代谢物

DCM-F采用HPLC-DAD-MS (Agilent, Waldbronn, Germany)分析。它的作用是识别测试样品中的单个代谢物。样品稀释四倍后，经0.45 μ m Millipore过滤器过滤后自动注入。HPLC分析采用Sep-Pak C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm id, 5µm)，室温。甲醇:乙腈:水作为流动相，体积比为15:38:47，流动相为0 - 22 min，流动相体积比为45:38:17，流动相为22 - 65 min。流动相流速为1ml /min。用光电二极管阵列检测器在254 nm记录流出物。质量量化使用威利国家标准与技术研究所(NIST) 2008图书馆。

在网上对接研究

受体的制备

本研究中使用的靶蛋白DPP-4 (PDB ID: 2RIP)、IRTK (PDB ID: 1IR3)和PTPN1 (PDB ID: 2F70)均来自蛋白质数据库(PDB)。LigPlot工具用于清除其靶蛋白肽序列中的突变。

配体的制备

本研究中使用的配体来自PubChem数据库。经过优化，配体已用于对接研究。

分子对接

Auto-Dock工具4.0用于计划、运行和检查对接复制品。可尔曼电荷、极性氢和溶剂化特性包括在对接繁殖的受体中。用于执行对接的特性包括网格框大小(x、y和z): 60、60和60 Å;格点间距:0.451 Å;最佳构象算法:拉马克遗传算法23符合数:10;人口规模:150人;不。活力评估:25万;不。 of generation: 54000; Torsion angle 5.0°; External grid energy: 1000; Maximum number of retries; 10000. Binding energy calculates with adding intermolecular energy, total internal energy, torsion free energy and with subtracting unbound energy.

统计分析

方差分析与Dunnett的多极差检验。用于区分生化检验结果有统计学意义(p<0.05)。GraphPad Instat (GraphPad Software, Inc.， USA)用于统计分析的程序。

结果

DCM-F对血糖、体重、糖化血红蛋白和血脂的影响

本研究使用大鼠31只，9只大鼠在研究完成过程中死亡(1- 2组;组2 - 1;3 - 3组;4 -1组;组5 - 2)。实验大鼠血糖情况见表1a。4组大鼠血糖明显低于3组(p<0.01)。与1组相比，3组大鼠体重显著下降(p<0.05)。与3组大鼠相比，4组大鼠的体重显著增加(p<0.01)(表1b)。

表1。DCM-F治疗正常和糖尿病大鼠血糖水平和体重的变化。

正常的控制			控制+ DCM-F		糖尿病控制		糖尿病+ DCM-F		糖尿病+格列本脲
(a)血糖(mg/dl)
0th一天	90.50±7.87c、f		88.67±6.83a, c, e		388.83±20.95b、h		396.67±14.21b, e, f		382.83±14.44b, e
7th一天	89.33±7.28c、f		89.17±7.49a、c、f		391.34±21.69b, g		369.67±13.59b, d, h		367.00±19.31b, d
15th一天	90.67±5.92c、f		87.10±5.14a、c、f		407.67±17.91b, f		302.83±35.53b, c, h		321.83±16.85b, c
30.th一天	83.83±7.08c、f		83.17±7.19a、c、f		451.67±33.24b, f		164.83±30.21b, c, h		171.17±17.16b, c
45th一天	81.83±2.32c、f		86.17±9.43a、c、f		465.67±28.27b, f		126.10±11.45b, c, h		135.17±13.67b, c
(b)体重(g)
最初的	204.2±0.90	204.2±1.12		216.9±2.6		215.8±1.32		212.8±1.2
最后	213.3±0.88c、f	210.1±0.83a、c、f		103.4±0.60b, g		155.2±2.62b, c, h		168.5±0.60b, d
变化	9.1	5.9		- 93.5		- 60.6		- 44.3

数值为平均值±标准差。与对照组相比，A - ns(不显著);与对照组相比，B - p<0.01;与糖尿病对照组比较，C - p < 0.01;与糖尿病对照组比较，D - p < 0.05;与糖尿病对照组比较E - ns(不显著);与格列苯脲治疗的糖尿病大鼠比较F - p < 0.01;与格列苯脲治疗的糖尿病大鼠比较，G - p< 0.05;H - ns与格列苯脲治疗的糖尿病大鼠比较无显著性差异

实验大鼠血红蛋白、糖化血红蛋白、血浆胰岛素、血脂谱、血清肝脏标志物、尿素、肌酐和碳水化合物代谢酶的变化见表2。3组大鼠血红蛋白明显低于1组(p<0.05)。与3组相比，4组大鼠血红蛋白明显升高，HbA1c明显降低。45天后，第3组大鼠血浆胰岛素水平较第1组大鼠明显下降。第4、5组与第3组比较，DCM-F和格列本脲组大鼠血浆胰岛素升高。表2b阐明了实验动物的脂质谱结果。与1组大鼠相比，3组大鼠血清TG、TC升高，HDL水平降低。与第3组相比，第4组和第5组DCM-F和格列本脲治疗组大鼠TG、TC降低，HDL水平升高。2组大鼠与1组大鼠相比，无明显变化。

表2。DCM-F对正常和糖尿病大鼠生化指标的影响。

集团	正常的控制	控制+ DCM-F	糖尿病控制	糖尿病+ DCM-F	糖尿病+格列本脲
(a)血红蛋白、蛋白质和胰岛素
血红蛋白(g %)	13.43±0.59d、e	13.31±0.47,维g	8.03±0.26b, f	12.21±0.97b, d, f	14.26±0.30,维
糖化血红蛋白(毫克/克)	0.18±0.02d、e	0.19±0.01a、d、e	0.62±0.06b, f	0.21±0.01b, d, f	0.20±0.02,维
蛋白(g / dL)	5.59±0.31d、e	5.75±0.24a、d、e	3.17±0.47b, f	5.22±0.25b、d、g	5.87±0.26,维
血浆胰岛素(U/ml)	19.11±0.72d, f	19.03±0.26a、d、e	4.11±0.25b, f	14.66±0.54b, d, e	15.26±0.59,维
(b)血清脂质谱
TC (mg / dL)	84.67±4.93d、e	83.50±2.41a、d、e	168.83±8.98b, f	81.17±4.36b, d, e	78.18±6.79,维
TG (mg / dL)	82.00±3.03d、e	84.50±3.51a、d、e	164.67±6.56b, f	95.17±3.06b, d, f	85.00±4.65,维
高密度脂蛋白(mg / dL)	53.50±2.95d、e	51.83±2.48,维f	33.34±3.56b, f	58.17±3.19c, d, e	57.50±1.38,维
(c)血清肝脏标志物酶
血清(µg / dL)	41.53±4.89d, f	40.48±3.53a、d、e	85.44±2.04b, f	54.51±3.69b, d, e	52.25±2.78b, d
血糖(µg / dL)	39.60±1.80d、e	39.67±2.50a、d、e	112.50±10.7b, f	47.67±3.60b, d, e	41.78±1.60,维
高山(µg / dL)	12.08±1.90d、e	12.15±1.41a、d、e	42.83±3.29b, f	17.33±3.29c, d, e	13.67±1.81,维
运河管理局(µg / dL)	9.31±1.30d、e	9.20±1.29a、d、e	28.00±1.29b, f	15.04±2.61c、d、g	10.55±1.70,维
胆红素(mg / dL)	0.68±0.08d、e	0.67±0.07a、d、e	5.28±1.60b, f	0.92±0.08b, d, e	0.84±0.15,维
(d)血清肾功能检查
尿素(mg / dL)	14.90±1.30d、e	14.40±1.30a、d、e	37.80±3.01b, f	13.41±1.51b, d, e	12.71±1.51,维
肌酐(mg / dL)	0.63±0.05d, f	0.62±0.04,维f	1.25±0.14b, f	0.98±0.02b, d, e	0.89±0.06b, d
(e)肝组织中的碳水化合物代谢酶水平
HK(单位a/毫克蛋白质)	0.252±0.028d、e	0.242±0.022a、d、e	0.081±0.009b, f	0.233±0.02a、d、e	0.233±0.233,维
G6Pase(单位b/mg蛋白质)	0.186±0.006d、e	0.174±0.011a、d、e	0.403±0.055b, f	0.204±0.05a、d、e	0.203±0.203,维
FBP(单位c/毫克蛋白质)	0.421±0.021d、e	0.435±0.011,维g	0.688±0.025b, f	0.459±0.01a、d、e	0.464±0.464,维

数值为平均值±标准差(n=6)。与对照组相比，A - ns(不显著);与对照组相比，B - p<0.01;C - p与对照组比较< 0.05;与糖尿病对照组比较，D - p < 0.01;E - ns与格列苯脲治疗的糖尿病大鼠比较无显著性差异;与格列苯脲治疗的糖尿病大鼠比较F - p < 0.01;g - p< 0.05与格列苯脲治疗的糖尿病大鼠比较(HbA1c -乙醛化血红蛋白;ACP -酸性磷酸酶;碱性磷酸酶，ALT -丙氨酸转氨酶; AST -aspartate amino transferase; HK- hexokinase; G6Pase – glucose 6 phosphatase; FBP – fructose 1,6 bis phosphatase)

DCM-F对肝肾功能检测的影响

组3大鼠SGOT、SGPT、ALP、ACP、胆红素、尿素、肌酐水平较组1大鼠明显升高(p<0.05)。与第3组相比，第4组DCM-F降低SGOT、SGPT、ALP、ACP、胆红素(表2c)、尿素、肌酐，增加蛋白质。DCM-F和格列本脲治疗的大鼠之间没有明显区别(表2d)。

DCM-F对碳水化合物代谢酶的影响

3组大鼠与1组大鼠相比，己糖激酶作用减弱，G6-Pase和fbp酶作用基本增加(p<0.01)。与组3相比，DCM-F和格列本脲治疗组大鼠己糖激酶活性增加，G6-Pase和FBPase作用减弱。在1组和2组大鼠的特征中，无统计学意义(表2e)。

DCM-F中活性成分的鉴定

DCM-F中的代谢物r . mucronata已经根据它们的吸光度、质谱碎片(MSF)模式和保留时间进行了识别，如果可能的话，还通过与真正的标准品共色谱进行了识别。一些生物碱起源于r . mucronata不以净化的形式存在。这些化合物是根据MSF数据和以前报告中的特征确定的(表3;A1)。已识别的生物碱见图1。

附录1。HPLC-DAD-MS色谱法测定臭茅DCM-F生物碱洗脱液。

图1所示。经鉴定的生物碱的化学结构r . mucronataDCM-F。

表3。HPLC-MS鉴定了活性DCM-F中的化合物r . mucronata。

不。的峰值	保留时间(t)R）	λ马克斯	[M + H]+ M /z	化合物名称
峰1	8.944分钟	230海里	353	Ajmalicine
峰2	14.129分钟	284海里	765	Catharanthine
峰3	16.786分钟	350海里	358	秋水仙碱
峰4	19.879分钟	271海里	290	莨菪碱
峰5	28.210分钟	420海里	555	Vindoline
峰6	31.620	225海里	609	利血平

已识别生物碱与靶标的对接研究

除利血平外，所有配体均采用Lipinski's rule 5(表4)。所有配体与靶体的对接模拟产生了构象簇。采用均方根差(RMSD) 2.0 Å对精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、丝氨酸、色氨酸和酪氨酸(ARG;ASN;GLN;赖氨酸;TRP;SER;刺;TYR)。表5列出了所选配体与靶受体的氢键供体和受体、分子间能、抑制常数和结合能。 The result exposed ajmalicine, catharanthine, and colchicine showed the principal interaction with DPP-4, IRTK, and PTPN1, respectively (Figure 2).

图2。生物碱的r . mucronataDCM-F与DPP-IV、胰岛素受体酪氨酸激酶和PTP-1B受体对接。受体与配体的相互作用用灰色、蓝色、绿色、品红和亮橙色表示。配体与受体之间的相互作用键以亮橙色表示(一个) DPP-IV受体ARG356(洋红色)的HH12原子与ajmalicine的氧原子(b)胰岛素受体中LYS1030的HZ3原子(洋红色)与catharanthine的氧原子(c) PTP-1B受体中SER 80的HN原子(洋红色)与秋水仙碱的氧原子之间的相互作用。

表4。化合物的ADMET图谱r有短尖头的．

化合物名称	兆瓦	logP	tPSA	供体肾	HB受体	利平斯基侵犯	溶解度 (毫克/升)	口服生物利用度(VEBER)	Phospholipidosis	PPI_Friendly
Ajmalicine	352.43	2.75	55.76	1	5	0	8216.11	好	Noninducer	没有
Catharanthine	336.43	2.8	46.53	1	4	0	8940.7	好	Noninducer	没有
秋水仙碱	399.44	1.96	83.09	1	7	0	13337.75	好	诱导物	没有
莨菪碱	289.37	2.27	50.97	1	4	0	16989.66	好	诱导物	没有
利血平	608.68	4.04	118.98	1	11	2	2181.78	低	Noninducer	是的
Vindoline	456.53	2.36	89.74	1	8	0	9915.06	好	Noninducer	没有

讨论

世界卫生组织(WHO)推荐世界各地的多种植物用于治疗糖尿病。早期使用动物模型的研究已经降低了一些红树林物种[30]的血糖。然而，关于从红树林植物中提取的新型治疗分子的知识仍然不足。因此，我们评估抗糖尿病的影响r . mucronata通过动物和计算研究。STZ的结构类似于葡萄糖，用于诱导β细胞坏死。它与NAD浓度[31]的快速下降有关。用水溶性维生素烟酰胺诱导糖尿病前期大鼠胰岛素的稳定变化和下降[32,33]。本研究采用STZ/烟酰胺糖尿病大鼠确诊NIDDM。葡萄糖是一种合成分类器，它把碳水化合物作为能量分子提供给细胞。

肝糖原分解、糖异生和细胞摄取葡萄糖量有限是血中葡萄糖水平升高的主要原因。DCM-F处理后的大鼠通过增加血红蛋白含量和降低血糖来保持肝脏的自我调节作用。糖尿病大鼠血糖升高导致葡萄糖附着到血红蛋白中。值得注意的是，糖化血红蛋白(HbA1C)在糖尿病大鼠中升高，并引起多种微血管和大血管并发症[35]。我们注意到糖尿病大鼠的糖化血红蛋白升高是肝脏内稳态不正常的结果。解释了高脂血症合并糖尿病特征性症状高血糖。然而，在糖尿病对照组大鼠中，低胰岛素血症的情况是渐进式的。同时，DCM-F对四组大鼠的降血脂作用明显优于三组大鼠。说明该组分中活性物质对治疗糖尿病大鼠的胰岛有恢复作用。

同样，SGOT、SGPT、ALP、ACP和胆红素是显示肝脏代谢能力的标志化合物。酸性和可溶性磷酸酶催化无机磷酸盐的水解，这些酶在糖尿病大鼠[37]中可耐受扩增。dcm-f治疗证实了这些蛋白质水平的严重下降。糖异生激素[38]的巨大作用延长了糖尿病患者的SGOT和SGPT肝脏标志物。Sellamuthuet al。[39]报道了升高血浆SGOT对大鼠线粒体和细胞层的破坏。DCM-F治疗可降低糖尿病大鼠的这种酶作用。它代表了DCM-F中活性物质对肝肾组织的更新能力。

因此，胆红素由肝脏排出;具有普通肝容量的屏障影响其结合和解散率。通过这种方式，胆红素的异常状态被用作肝功能和无胆状态[40]的记录。本研究解释了糖尿病未治疗大鼠胆红素的急剧增加。这些水平在治疗后降低，建议使用DCM-F改善肝脏功能。本研究证实糖尿病大鼠血清总蛋白水平急剧下降。糖尿病动物血清蛋白的降低表现为肾小管破裂。它在组织DCM-F后扩展。

己糖激酶是糖酵解过程中葡萄糖转化为葡萄糖6-磷酸的关键蛋白之一。从现在开始，糖尿病肝[41]中G6Pase和FBPase的过量增加。与此同时，作用于己糖激酶的己糖激酶在未治疗的高血糖大鼠中有效降低。DCM-F治疗的糖尿病大鼠糖酵解代谢通路高度激活。这可能是己糖激酶升高的原因。G6pase也是一种葡萄糖稳态蛋白，因为它催化糖原分解和糖异生[42]的生化反应。在血糖升高的大鼠中，G6Pase运动增加提供氢，而氢与NADP+结合为NADPH，促进脂肪生成，最后增加血液中葡萄糖水平的增加。糖异生的驱动是由于胰岛素不足的情况，因为在典型情况下，胰岛素能作为这种蛋白质的消音器。果糖-1,6-二磷酸酶(FBPase-1)在胰岛或胰腺β细胞系中表达上调，呈现出高脂肪量。这种蛋白质不受调控，可以催化FBPase-1的去磷酸化转化为FBPase[43]。 Total triglycerides and cholesterol in diabetic control upgrades acting FBPase-1, and it gets to standardize when the treated with DCM-F of R. mucronata. Creatinine and urea level depict the function of the kidney. Increased urea production in diabetic rats breakdown the plasma and liver proteins. DCM-F action has clearly standardized the role of protein and urea. In untreated diabetic rats, creatinine increase in the serum, proposing a difficulty of kidney capacities [44]. DCM-F obviously proves a change in kidney working abilities.

人们提出了各种仪器来分离、识别和评价植物中的生物碱。液相色谱-质谱联用是制药工业中广泛应用的方法之一。它巩固了流体色谱的物理分区能力和质量分析能力。采用高效液相色谱-质谱联用技术对延胡索中生物碱进行了鉴别和评价。从治疗植物和海洋资源中鉴定出200多种生物碱。它表现出不同的药理作用，例如，对疟疾运动(奎宁)有害，对疾病(长春新碱和长春碱)，抗糖尿病(小檗碱和糖苷)，镇静，α-葡萄糖苷酶和自由基搜索性能[47-50]。

在本研究中，有六种值得注意的生物碱从可行的二氯甲烷分离中得到了鉴别证明r . mucronata．Ajmalicine是一种吲哚类生物碱，据报道可降低糖尿病小鼠的血糖水平[51]。Catharanthine是一种萜吲哚生物碱，由Catharanthus roseus也叫用于治疗糖尿病。秋水仙碱镇静药物在NIDDM中的研究。秋水仙碱可以降低空腹和餐后NIDDM患者的血糖水平[53-54]。莨菪碱是颠茄生物碱中主要的抗胆碱能成分之一。它用于治疗不同胃肠问题、心脏问题的症状缓解，控制帕金森氏病的部分表现，以及在姑息治疗中控制呼吸排出物，然而，没有逐点研究来肯定它的抗糖尿病效果。利血平是一种吲哚类生物碱，是一种抗精神病和抗高血压药物。长春碱是长春碱的一种简单的成分，在IA期或IIA期霍奇金淋巴瘤[56]的化疗中占重要地位。先前的研究报告证实了公认的生物碱r . mucronata做进一步的检查，建立一个抗糖尿病专家。

计算给药方案提供了配体和受体之间的出色合作。这种方法不繁琐，明智;减少进入临床研究时的费用和反应，不像常规的药物披露方法[57]。胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)和嗜胰岛素肽(GIP)调节胰岛素释放，降低血糖水平[58]。DPP-4解除了这些肠促胰岛素激素的调控，导致高血糖。胰岛素肽激素加速胰岛素受体酪氨酸激酶。然而，PTPN1去磷酸化胰岛素受体蛋白的酪氨酸氨基酸，从根本上负责T2DM[59]的胰岛素抵抗。这样，对接的结果解释了生物碱r . mucronata与DPP-4和PTPN1受体分子结合。它能稳定肠促胰岛素，保持血糖正常。还有一些其他可能的机制也可能涉及，例如，氧化焦虑和刺激DCM-F中的靶蛋白。

结论

本研究对DCM-F的有用影响给予了强烈肯定r . mucronata非胰岛素依赖型糖尿病。100mg /kg DCM-F治疗糖尿病大鼠可刺激β细胞分泌胰岛素，改善NIDDM的抗高血糖状况。从碳水化合物、脂质、血浆胰岛素和血清标志物酶的变化可以清楚地证明这一点。此外，DCM-F鉴定的生物碱ajmalicine, catharanthine, hyoscyamine，利血平和vindoline对DPP-4, PTPN1和胰岛素受体抑制作用的有利变化通过分子对接模拟证实。总之，我们的结果强烈提示DCM-F的潜在临床益处r . mucronata用于调节2型糖尿病的高血糖状况，这种保护也与降血脂作用有关。

表5所示。分子对接识别分子与目标受体的相互作用。

配位体	结合能 (千卡每摩尔)	总分子间 能源 (千卡每摩尔)	抑制常数 Ki (μ M)在温度下 (298.15 K)	不。H键的	H键捐赠者	H键受体	裁判表示。	不。的运行
DPP-IV
Ajmalicine	-6.55	-6.82	15.91	1	TYR120: HH	LIG1:阿	129.691	10
Catharanthine	-6.61	-6.82	14.17	2	TRP216:阿 TRP305: HN	LIG1: H LIG1:阿	104.216	3.
秋水仙碱	-6.15	-6.42	31.23	1	SER212: HG	LIG1:阿	105.091	6
莨菪碱	-5.48	-6.48	96.22	1	TYR547:哦	LIG1:阿	114.112	5
Vindoline	-6.16	-6.62	30.28	1	THR156: HG1	LIG1: O, O	129.676	1
红外
Ajmalicine	-7.45	-7.73	3.45	0	＊	＊	36.021	10
Catharanthine	-6.43	-6.74	19.39	1	LYS1030: HZ3	LIG1:阿	36.988	9
秋水仙碱	-6.08	-6.26	35.08	2	GLN1208: HE22 ASN1215: HD21	LIG1:阿 LIG1:阿	29.888	3.
莨菪碱	-5.34	-6.35	121.81	1	GLN1107: OE1	LIG1: H	38.912	1
Vindoline	-5.99	-6.40	38.477	1	ASN1215: HD21	LIG1:阿	38.477	9
PTP-1
Ajmalicine	-7.04	-7.43	6.97	1	LYS58: HN	LIG1:阿	67.943	4
Catharanthine	-4.82	-5.14	295.06	0	＊	＊	46.950	3.
秋水仙碱	-7.25	-7.50	4.86	1	SER80: HN	LIG1:阿	46.387	6
莨菪碱	-5.03	-6.10	204.25	1	SER80:噩	LIG1: H	47.970	6
Vindoline	-4.93	-5.33	241.55	1	LYS73: HZ3	LIG1:阿	44.484	9

注:*表示不形成氢键

致谢

本文作者感谢印度新德里政府大学教育资助委员会(教资会参考编号)。: 39-439/2010)。作者特别感谢印度理工学院马德拉斯化学系中央仪器设施提供的HPLC-DAD-MS分析。

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