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摘要

背景本报告的目的是证明在玻璃体腔使用含有CD34+干细胞的骨髓单个核片段后，视网膜色素变性(RP)患者的功能性视网膜拯救。

案例展示:本文报告一例38岁的女性视网膜病变合并黄斑裂孔患者，经玻璃体腔注射含有CD34+干细胞的骨髓单个核片段治疗后，视野有明显改善。

结论:含有CD34 +干细胞的骨髓单个核组分可通过旁分泌作用促进视网膜功能的改善。需要更多病例和更长的随访时间的研究来进一步分析这种治疗可能性的安全性和有效性。

关键字

色素性视网膜炎，黄斑孔洞，干细胞，骨髓单核细胞，CD34 +干细胞

缩写

RPE:视网膜色素上皮;记者:色素性视网膜炎;IPS:诱导多能干细胞;跨国公司:单核细胞

背景

色素性视网膜炎(Retinitis pigment tosa, RP)是一组以周边视觉逐渐丧失和夜视困难(nictalopia)为特征，进而导致中心视觉丧失的遗传性疾病[1,2]。目前还没有明确证明或建立药物治疗来防止RP的发展和进展或视力[2]的恢复。大多数药物试图通过神经保护来减缓疾病的发展，并在其一生中保持患者的有用视力。这些策略并不能纠正PR的根本原因，而是旨在提供支持性和保守性治疗。对于PR的继发性并发症，如黄斑囊状水肿、白内障等，也可以进行辅助治疗[1,2]。几种使用干细胞的技术正在实验模型和临床研究中进行测试，以治疗退行性视网膜疾病[3-11]。

在巴西进行了三项临床研究，其中骨髓中含有CD34 +干细胞的单核部分用于RP、黄斑变性和缺血性视网膜病变患者。研究人员观察到这些细胞的活动迹象[12-15]。

案例展示

本文报告一例39岁的女性患者，有RP病史，左眼黄斑裂孔，考虑年龄(8年前)。右眼视力20/25，左眼视力20/400，双眼眼压14 mmHg。

由于黄斑裂孔的发生时间较早，并累及黄斑中心凹区RP，故不建议手术治疗。患者明确了RP细胞治疗的临床研究，并选择了治疗方法。经Beneficência葡萄牙São José do里约热内卢Preto医院伦理和研究委员会授权签署知情同意书后，患者在局部麻醉下，血液科团队通过髂嵴穿刺进行骨髓采集。骨髓样本在Biosafe Sepax (GE Healthcare, USA)中处理。

最初，患者接受以下基线检查:使用Compass系统(Centerview, Padova, Italy)进行多焦视网膜电图、光学相干断层扫描(OCT)、彩色和荧光视网膜摄影、自体荧光和自动周边背景检查。

患者行玻璃体腔注射10 × 10粒⁶表面麻醉下左眼含CD34的单核细胞(MNCs)。为期三个月的评估报告了患者视觉质量的改善。随访3个月，右眼视力20/25，左眼视力20/150。视野显示左眼有显著变化，这与患者的报告相印证(图1)。

图1所示。眼底自动视野检查比标准自动视野检查显示，在细胞治疗后3个月，左眼视网膜敏感度显著改善

多焦点视网膜电图测试的电反应也报告了左眼的改善。OCT和荧光视网膜显像均无变化。

讨论

在这个特定的案例中，与之前公布的方案不同，我们使用Biosafe Sepax系统进行细胞分离。大多数已发表的研究使用人工ficoll密度分离程序来丰富跨国公司的种群，从而丰富细胞治疗最终产品中的干细胞内容。人工修剪程序有一定的内在局限性，如技术的可变性、培训时间和由于其开放性造成的污染风险。自动化和封闭设备的最新技术发展已经取代了大多数开放式和人工细胞处理程序[16,17]。

该系统还允许比传统方法更高的跨国公司浓度，可能增加治疗效果。封闭系统的其他好处包括易于训练和更安全的细胞分离速度，因为它不是一个开放系统(污染风险较小)。此外，该系统还允许该技术的标准化，以提高临床研究[17]的可重复性。

一般来说，干细胞可以通过两种途径恢复视网膜的功能:a)细胞替换(在这种情况下，需要使用从胚胎细胞和诱导多能干细胞(iPS)中提取的视网膜色素上皮(RPE)细胞培养制备的细胞。b)拯救疗法也被称为旁分泌效应(包括本研究中使用的细胞的主要作用机制)。旁分泌效应被定义为细胞在局部细胞环境中分泌的物质所施加的作用。有些细胞与细胞之间的通讯需要细胞与细胞之间的直接接触。有些细胞可以形成连接连接，将它们的细胞质与相邻细胞的细胞质连接起来。例如，在心肌中，相邻细胞之间的沟通连接允许心脏起搏器区域的动作电位扩散，并以协调的方式引起心脏收缩[11,18]。被移植的细胞分泌的旁分泌因子包括细胞因子、趋化因子和生长因子，这些因子参与了这些细胞控制的修复过程。这一机制尚不完全清楚，许多正在进行的研究旨在确定仅注射这些因子而不注射细胞的可能性(脱细胞治疗)[11,18]。

第三个月观察到的功能改善与之前的报告相一致。治疗效果持续时间尚不确定。在另一项研究中，我们观察到治疗效果在第一年结束时下降。

OCT检查未见黄斑裂孔结构改变及其他视网膜厚度异常。

结论

含有CD34+干细胞的骨髓单个核组分可通过旁分泌作用促进视网膜功能的改善。一些临床研究正在进行中，如果细胞在退行性过程中受到影响(旁分泌效应)，而不是在细胞替代过程中受到影响，那么还需要更多的病例来确定疾病的哪个阶段对这种治疗表现出最佳反应，以及确定为了保持治疗效果而重新注射细胞的理想时间。

同意

“我们获得了患者的书面知情同意，以便发表这一病例报告和任何伴随图像。该书面同意的副本可供本刊主编查阅。”

道德和信息披露

国家研究伦理委员会批准并登记的研究项目:研究设计院:66839617.2.0000.5629.

作者的贡献

RCS和MR设计研究，PS、LC和TS收集和分析数据，并主导写作。RCS和MR设计并指导了这项研究。所有作者讨论了结果并评论了手稿。

的利益冲突

作者报告在这项工作中没有利益冲突。

资金来源

这项研究的作者没有得到任何资助。

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