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摘要gydF4y2Ba

客观的gydF4y2Ba本研究拟探讨纳米银(nAg)合成新方法对硝酸铅暴露所致白化大鼠肝毒性的可能治疗作用。gydF4y2Ba

设计与方法gydF4y2Ba大鼠分为三组。(1)正常控制。(2)大鼠注射硝酸铅。(3)大鼠注射硝酸铅后再注射纳米银/羟基磷灰石(nAg/HAp)。除了免疫状态外，还通过测量干扰素-γ (IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和白细胞介素-2 (IL-2)的水平来分析DNA片段化程度。测定各组血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性、丙二醛(MDA)含量及肝酶活性。肝热休克蛋白70 (HSP-70)、caspase-3和金属蛋白酶9的水平也被作为炎症和细胞凋亡的标志物。行肝组织病理检查。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba结果显示nAg/HAp复合物通过显著提高肝丙氨酸转氨酶(ALT)、SOD和(GPx)活性，具有修复断裂DNA和改善大部分研究参数的有效作用。相反，治疗后肝脏γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、MDA、IL-2、IFN-γ、TNF-α、基质MMP-9、HSP-70和caspase-3水平显著降低。组织病理学结果与生化结果相关，证实了铅中毒组与nag处理组之间的差异，并通过消除处理大鼠的大部分病理现象来实现。gydF4y2Ba

结论:gydF4y2Ba研究结果为nHAp载体nAg的合成和表征提供了一种具有独特化学和生物学特性并具有抗肝毒性作用的生物安全复合材料。gydF4y2Ba

关键字gydF4y2Ba

纳米银，抗肝毒性，硝酸铅，白化大鼠gydF4y2Ba

介绍gydF4y2Ba

银纳米颗粒表现出与其他生物医学纳米材料不同的独特的物理、化学、光学和生物学特性，因此可以作为许多生物医学应用的治疗平台，包括抗病毒药物、光敏剂和/或放射增敏剂以及抗癌治疗剂[1-4]gydF4y2Ba

关于nAg的有益和有害影响一直存在争论。这种矛盾的观点源于银纳米颗粒的不同合成方法、不同的尺寸、形状、表面电荷以及给药途径、持续时间和剂量[5-9]。尽管大量研究报道nAg的毒性主要与释放的Ag离子成正比[10]，但很难对其细胞毒性得出明确的共识。一些研究表明，nAg在热力学上是有利的，其毒性归因于释放的Ag离子与细胞膜、硫醇蛋白基团和DNA的相互作用和破坏[11,12]。但也有报道称，低剂量nAg对氧化性肝损伤有保护作用[13]，且对免疫、心血管、神经或生殖系统无毒[2,14,15]。因此，有必要寻找一种合适的方法，对nAg表面进行化学修饰，减少其在稳定性、生物相容性和形状等理化性质方面的不便，以降低nAg对人体细胞的潜在风险。银在医疗用途中的毒性可以通过在生物安全复合材料中捕获银离子来控制。gydF4y2Ba

在许多发展中国家和工业化国家，职业性和环境性铅暴露仍然是一个严重的问题，因为它有许多不良影响，包括神经行为、免疫、肾、肝和血液功能障碍[16]。肝脏中铅的最高水平在给药后的第一个小时内达到，反过来，通过改变脂肪酸组成和膜通透性，导致酶从细胞逃逸到血液中，增加了细胞对氧化攻击的敏感性[17]。大量的实验证据清楚地指出铅的潜在肝毒性，从简单的生化和结构改变到肝增生的分子特征。微扰介导的铅肝毒性事件包括各种代谢途径、铁转运、细胞因子介质的诱导和病理变化[18]。gydF4y2Ba

研究了银纳米复合材料的配方结构。纳米羟基磷灰石(nHAp)螯合纳米银，通过在细胞介质中捕获Ag+离子来控制其毒性。此外，静脉注射制备的nAg/HAp可缓解与硝酸铅中毒相关的肝脏生化和组织学症状。gydF4y2Ba

材料与方法gydF4y2Ba

化学物质gydF4y2Ba

用于nAg制备的化学物质有聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、氢氧化钠(NaOH)、氢氧化铵(NH)gydF4y2Ba_4gydF4y2BaOH, Mwt. 35.5g/mol, May & Baker，英格兰)。四水合硝酸钙(Ca (NO)gydF4y2Ba_3.gydF4y2Ba）gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba.4HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaO, Mwt. 236.15g/mol, Merk，德国)，邻位磷酸氢二铵(NHgydF4y2Ba_4gydF4y2Ba）gydF4y2Ba_2gydF4y2BaHPOgydF4y2Ba_4gydF4y2Ba， 132.06g/mol, S.D.精细化学有限公司孟买)，聚乙烯醇(PVAL) (Mwt)。»160000 g/mol)，硝酸银，(AgNOgydF4y2Ba_3.gydF4y2Ba169.88g/mol, Johnson Matthey)。所有这些化学物质都没有进一步的净化，所有的溶液都是用去离子水制备的。硝酸铅粉末溶于0.9%生理盐水中。gydF4y2Ba

nAg/HAp的制备gydF4y2Ba

Ag/HAp纳米复合材料的合成部分按照Díaz等[19]技术进行，并进行了一定的修改。采用聚合基质途径，将聚乙烯醇溶解在80℃的去离子水中，然后按自然比例加入硝酸钙和磷酸铵，合成nAg[20]。硝酸银分别溶解在去离子水中，并在pH控制下加入到混合物中。添加比为LD的1/5倍gydF4y2Ba_50gydF4y2Ba硝酸银。形成的复合凝胶在80℃下干燥24小时，使用扫描电镜(SEM)、EDAX单元和透射电镜(TEM)进行分析。对制备的凝胶进行干燥和表征，确认形成了nAg/Hap纳米复合材料。gydF4y2Ba

动物gydF4y2Ba

21只雄性白化鼠gydF4y2Ba家鼠gydF4y2Ba(180±20 g体重)置于标准实验室条件下，光照交替周期各12 h，温度25℃，湿度适宜。饲养的动物不受标准颗粒、食物和水的限制gydF4y2Ba随意gydF4y2Ba2周，使其适应实验室环境，然后进行实验。本研究是根据CIOHS和ICLAS《动物生物医学研究国际指导原则》(2012年)制定的指导方针进行的，并根据《实验动物护理和使用指南》(2011年第八版，由美国国家科学院出版社出版，2101 Constitution Ave. NW, Washington, DC 20055, USA)进行的。本指南经埃及开罗埃及原子能管理局国家辐射研究中心伦理委员会(NCRR- EAEA)批准。gydF4y2Ba

动物的治疗gydF4y2Ba

实验动物腹腔注射7.7 mg/kg b.wt的硝酸铅溶液。每周三次，连续两周，合起来相当于½LD50 (ASTDR, 1999)。在给药24小时后，每周静脉注射4次合成nAg，剂量为50 mg/kg b.wt。将大鼠随机分为3组，每组8只，方法如下:gydF4y2Ba

第一组:以大鼠为对照，仅给予水和食物。gydF4y2Ba

第二组:大鼠ig硝酸铅溶液;gydF4y2Ba

第3组:大鼠以硝酸铅为第2组，nAg/HAp治疗。gydF4y2Ba

末次治疗24 h后全部动物安乐死，解剖腹部，仔细分离肝脏。肝脏立即用冰冷的生理盐水清洗，然后用滤纸擦干。每只大鼠肝脏分为三部分，一部分固定在10%福尔马林溶液中进行组织病理学检查，第二部分和第三部分固定在生理盐水中保存，-80℃保存，用于DNA片段分析和生化分析。gydF4y2Ba

凋亡DNA片段化研究gydF4y2Ba

采用Bortner等人先前的方法[21]，通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段来评估治疗组和未治疗组大鼠的DNA损伤。一小块肝(0.2 g)被放在一个均质器0.8毫升的冰冷的PBS和均质1分钟。每200µL, 700µL裂解缓冲(50更易・L−1三羟甲基氨基甲烷+ 1液更易・L−1 EDTA + 150更易・L−1生理盐水+ 0.2% Triton x - 100]和50 _g・毫升−1添加蛋白酶K和孵化50°C 2 h。500µL, 100µL冰冷的5摩尔・L−1氯化钠的添加和大力漩涡,然后700µL冰冷的异丙醇的添加和再次大力漩涡。在- 20°C下，沉淀可以在夜间进行。沉淀后，在20000条件下造球10分钟回收DNAgydF4y2BaggydF4y2Ba在4℃下。丢弃上清，加入700µL 70%的冷冻乙醇，20000离心，漂洗微球gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C下放置10分钟。再次丢弃上清，去除乙醇，将DNA颗粒干燥，溶解于100µL Tris-EDTA缓冲液中。采用琼脂糖凝胶电泳法评估DNA片段的程度，凝胶电泳中含有0.5 mg·mL−1溴化乙啶，温度为5 V·cm−1，时间为1小时。将凝胶置于紫外透照器上观察DNA，并使用Image Analyzer软件(版本1.36.1)对单个大鼠肝脏中的DNA片段量进行定量。gydF4y2Ba

采用美国马特森无限系列红外光谱仪对产品进行红外分析。采用高分辨率透射电子显微镜(TEM) JEOL2100进行显微镜表征。采用德国制造的Bruker AXS-D8 Advance XRD系统对干燥和煅烧后的Ag/HAp纳米复合粉体进行了x射线衍射(XRD)分析。在荷兰Philips XL30扫描电镜上对样品进行扫描电镜(SEM)扫描。EDAX分析使用EDAX (Ametek)。gydF4y2Ba

肝脏匀浆的制备gydF4y2Ba

用溶解缓冲液(pH 7.4)或磷酸盐缓冲盐水(PBS;pH 7.4)，然后将整个匀浆在20000下离心gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C的冷却离心机中分离20分钟，得到每个样品的线粒体后细胞质部分，然后使用整个匀浆和细胞质部分。gydF4y2Ba

肝组织生化分析gydF4y2Ba

肿瘤坏死因子-α (TNF-α)采用放射免疫法测定，方法参照Teppo和Maury[22]，干扰素- γ (IF- γ)采用Staehelin等[23]的方法测定。采用夹心ELISA试剂盒(DuoSet IC，人/小鼠/大鼠总热休克蛋白70，目录号:0)检测IL-2、HSP-70、MMP-9和caspase-3水平。DYC 1663-2，美国，USCN生命科学，鼠MMP-9，目录号:生命科学，大鼠caspase-3，目录号:E90626，中国)根据制造说明书。gydF4y2Ba

采用Janknegt等[24]、Paglia和Valentine[25]、Erdelmeier等[26]的比色法，通过测定抗氧化防御系统中最重要的自由基清除剂SOD和GPx的活性以及脂质过氧化产物MDA的含量来评估肝组织的氧化/抗氧化状态。根据Reitman and Frankel[27]和Young[28]的方法分别通过肝功能检测生物标志物ALT和γ-GT来确定肝脏改变的程度。gydF4y2Ba

组织学研究gydF4y2Ba

取各组大鼠肝脏解剖标本，10%福尔马林固定24小时。在自来水中洗涤，然后连续稀释酒精(甲基、乙基和无水乙基)脱水。用二甲苯清洗标本，用石蜡包埋，在56℃的热风炉中保温24小时。制备石蜡蜂蜡组织块，用切片机在4微米处切片。将获得的组织切片收集在玻片上，用苏木精和伊红染色(Banchroft et al.， 1996)进行脱蜡和染色，在电光显微镜下进行组织病理学检查。gydF4y2Ba

统计分析gydF4y2Ba

给出的值为平均值±SE。数据分析采用单因素方差分析(ANOVA)。平均值之间的显著性水平设为p≤0.05。所有统计分析均使用SPSS软件(20.0版)进行。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

nAg的表征gydF4y2Ba

采用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)和能量色散x射线分析能谱(EDAX)对纳米复合材料进行了分析。SEM分析清楚地表明，纳米范围(75-80nm)合成的nAg在载体nHAp中分散成功(图1)。而EDAX分析检测到过滤干燥后存在nAg，其百分比为过滤后溶液的分析，未出现银离子或钙离子(图2)。另一方面，TEM显示银在载体上的团聚分布，如图3所示。XRD特征图显示，形成了摩尔比为1.67的载流子nHAp, nAg的存在并未改变nHAp的晶体结构。gydF4y2Ba

图1所示。gydF4y2Ba干燥后制备样品的SEM图gydF4y2Ba

图2。gydF4y2BanAg的EDAX分析由nHAp携带，在80°C干燥24hgydF4y2Ba

图3。gydF4y2Ba(A)低浓度nAg (B)高浓度nAg。制备的nAg的透射电镜gydF4y2Ba

DNA碎片gydF4y2Ba

铅中毒大鼠肝脏中DNA高度碎片化，两个肝脏样本中完整DNA分别减少到52.39%和54.62%，而正常对照组的DNA完整度为100%。然而，在铅中毒后，纳米银处理修复了碎片化的DNA，并将两个肝脏样本中完整DNA的比例分别提高到69.16%和68.89%(图4)。gydF4y2Ba

图4。gydF4y2Ba研究小组的DNA电泳。每组两个样本的DNA片段分析在哪里gydF4y2Ba

生化结果gydF4y2Ba

在分子标志物的评估中，硝酸铅中毒大鼠与正常对照组相比，MMP-9浓度急剧升高，HSP-70和caspase-3浓度均有中度升高。另一方面，与对照大鼠相比，铅中毒后用nAg治疗可显著降低HSP-70、MMP-9和caspase-3的水平。尽管如此，肝脏中HSP-70、MMP-9和caspase-3的含量仍明显高于正常水平，见表1。gydF4y2Ba

表1。gydF4y2BaAg/HAp对不同组大鼠肝脏分子标志物的影响gydF4y2Ba

结果均为7值的平均值±SE，不同上标间差异有统计学意义(P< 0.05)。gydF4y2Ba

与正常对照组相比，硝酸铅中毒大鼠肝脏中IL-2、TNF-α和IFN-γ含量显著升高。然而，与铅中毒大鼠相比，在铅中毒后使用nAg治疗导致IL-2、TNF- α和IFN-γ水平显著降低。同时，经治疗后IL-2、TNF-α、IFN-γ水平仍明显高于正常水平，见表2。gydF4y2Ba

表2。gydF4y2BaAg/HAp对不同组大鼠肝脏炎症因子的影响gydF4y2Ba

结果均为7值的平均值±SE，不同上标间差异有统计学意义(P< 0.05)。gydF4y2Ba

表3描述了合成nAg对中毒肝组织的影响。与对照组相比，硝酸铅诱导大鼠MDA水平显著升高，SOD和GPx水平显著降低(P≤0.05)。纳米银阻止了SOD和GPx含量的消耗，显著降低了MDA活性(P≤0.05)。gydF4y2Ba

表3。gydF4y2BaAg/HAp对不同组肝组织氧化/抗氧化状态的影响gydF4y2Ba

结果均为7值的平均值±SE，不同上标间差异有统计学意义(P< 0.05)。gydF4y2Ba

如表4所示，本研究结果显示，与正常对照组相比，铅中毒导致肝脏ALT活性显著降低，同时γ-GT活性急剧升高。与中毒组比较，nAg治疗后上述指标均明显恢复正常(P≤0.05)。gydF4y2Ba

表4。gydF4y2BaAg/HAp对不同大鼠肝酶的影响gydF4y2Ba

结果均为7值的平均值±SE，不同上标间差异有统计学意义(P< 0.05)。gydF4y2Ba

组织病理学观察gydF4y2Ba

如图5所示，对照组肝组织细胞板结构完整，细胞间边界清晰。肝细胞结构正常，核突出，中央静脉清晰，窦腔清晰。硝酸铅引起广泛的肝脏改变，变性实质肝细胞的局灶性炎症细胞聚集(m) (d)(图6)，伴有kuepfer细胞弥漫性和水肿(o)，纤维化(f)和门静脉区炎症细胞浸润，如图7所示。在退行性肝实质中，可见由上皮样细胞和巨细胞(箭头)组成的肉芽肿形成(g)(图8和9)。nAg治疗显示一些肝细胞恢复和再生，结构保留，组织学改变轻微，表现为门静脉和中央静脉扩张和充血，门静脉和肝细胞之间有炎症性Kupffer细胞浸润(图10、11和12)。gydF4y2Ba

图5。gydF4y2Ba正常大鼠肝脏切片显微照片显示肝细胞束从中央静脉(C.V)放射出来，并被血窦(S)隔开(H&E × 400)gydF4y2Ba

图6。gydF4y2Ba铅中毒大鼠肝脏切片显微照片，显示变性肝实质局灶性炎症细胞聚集(m) (d) (H&E×400)。gydF4y2Ba

图7。gydF4y2Ba铅中毒大鼠肝脏切片显微照片显示水肿(o)、纤维化(f)及门静脉区炎症细胞浸润(h&ex400)gydF4y2Ba

图8。gydF4y2Ba铅中毒大鼠肝脏切片显微照片显示变性的上皮样细胞和巨细胞(箭头)形成肉芽肿(g)gydF4y2Ba

图9。gydF4y2Ba铅中毒大鼠肝脏切片显微照片显示肉芽肿形成的上皮细胞(g)，未见巨细胞(H&E×400)gydF4y2Ba

图10。gydF4y2Ba铅中毒肝切片显微照片显示门静脉扩张(pv)伴Kuepfer细胞弥散，水肿(o)，门静脉区炎症细胞浸润(m) (h&ex400)。gydF4y2Ba

图11。gydF4y2BanAg处理大鼠铅中毒后肝脏切片显微照片显示中央静脉(cv)扩张，肝细胞(h&ex640)之间弥漫性少量库普弗细胞增殖(箭头)。gydF4y2Ba

图12。gydF4y2Ba纳米银处理大鼠铅中毒后肝脏切片显微照片显示肝细胞间有炎症细胞浸润(m) (H&E×640)。gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

纳米技术开发的纳米银具有不同寻常的物理化学性质和生物活性。关于nAg的有益和有害影响仍然存在争议。这些相互矛盾的结果可能归因于颗粒直径、结构修饰、给药途径和剂量的变化。本研究通过与nHAp螯合合成nAg，阻断主要毒性因子Ag离子的释放，并探讨其作为治疗药物在克服铅致肝毒性相关症状中的生物安全性。银离子的捕获可能是由于凝胶对银离子均匀性的影响。nHAp的制备在原位进行，并选择作为复合材料基质的原料，因为它们的化学成分类似于硬组织的矿物相。nHAp与nAg的螯合作用控制着Ag的释放gydF4y2Ba^++gydF4y2Ba在细胞内环境中。由此产生的Ag/HAp纳米复合材料允许更好的治疗策略，而不会产生诸如Ag释放之类的健康问题gydF4y2Ba^++gydF4y2Ba和/或银纳米颗粒的聚集。在本研究中，凝胶通过吸附机制相互作用。银离子没有减慢nHAp晶体达到平衡或更严格地降低晶体。此外，除了PVAL的存在外，所使用的凝胶的纳米尺寸增强了银离子的捕获能力，PVAL的存在可以作为空间夹持导致溶液中元素的完全捕获。大量文献通过不同的制备方法和多方面的分析研究了nAg的生物学作用，但对这种新合成的nAg/HAp及其克服硝酸铅对肝脏的有害作用的研究却很少。此外，对纳米颗粒静脉注射的研究也很少。因此，获得的结果往往很难与其他人进行比较。gydF4y2Ba

多项研究报道，铅诱导的氧化应激被认为是机体生理紊乱和器官功能障碍的主要原因。这些发现在本研究中得到了证实，而铅毒性的表现表现为与DNA破坏和细胞因子活性增加以及肝功能改变相关的氧化/抗氧化状态的紊乱。铅暴露诱导氧化应激和脂质过氧化，同时抑制几种抗氧化酶，这可能是其毒性作用的机制，也是铅暴露相关疾病的主要原因[29-31]。铅在给药后的第一个小时内迅速到达肝脏，并通过改变脂肪酸组成导致ROS的产生，增加细胞对氧化攻击的易感性，增加细胞质膜对有机物质的通透性，以及肝细胞质酶如ALT渗漏到血液中[17]。Hsu和Guo[11]的研究表明，铅与还原性谷胱甘肽(GSH)的巯基(SH)基团具有高亲和力，可抑制肝脏抗氧化酶，上调γ-GT活性以补偿GSH的消耗[32]。因此，γ-GT通过其在细胞膜上的位置催化胞外谷胱甘肽的降解，有利于回收细胞内谷胱甘肽再合成的组成氨基酸[33]。γ-GT的表达受细胞因子的诱导，包括TNF-α[34]和IFN-γ[35]。gydF4y2Ba

伴随着这种作用，ROS的产生诱导了与DNA损伤相关的细胞因子介质的表达，并最终导致肝细胞凋亡[36]。值得一提的是，铅具有模仿钙的作用，钙超载可能引发细胞凋亡，因为它可以通过通透性过渡孔的打开使杆状细胞线粒体去极化，从而导致细胞色素释放、caspase激活和细胞凋亡[37]。因此，铅通过双重氧化机制直接影响DNA: 1)产生ROS，通过氧化2´-脱氧鸟苷的c -8位形成DNA损伤[12]。2)诱导脂质过氧化产生羟基自由基，羟基自由基与DNA的双键结构结合和/或从DNA中提取氢原子，从而诱导单链和双链断裂，嘌呤和嘧啶碱基和脱氧核糖糖发生修饰[38]。铅也可在不可逆凋亡过程中通过激活caspase -3间接影响DNA[39]。激活的caspase-3裂解并激活DNA片段因子的45-kD亚基，进而导致DNA降解为核小体片段，这是细胞凋亡的标志。此外，铅会干扰通常为保持DNA完整性而发生的DNA修复机制，从而进一步增加DNA片段化gydF4y2Ba[40]gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

另一方面，肝脏IL-2、IFN-γ和TNF-α含量的升高与HSP-70、MMP-9和caspase-3的升高有关，这是铅中毒的一个基本结果，因为免疫系统是一个由细胞、组织和器官组成的动态网络，它们协同工作，保护身体免受入侵者的攻击[41]。然而，氧化应激激活T淋巴细胞产生IL-2作为抗炎反应。IFN-γ调节肝细胞凋亡，刺激巨噬细胞活化和细胞因子的大量分泌[42]。TNF-α被认为是MMP-9表达失活和细胞死亡的共同因素gydF4y2Ba通过gydF4y2Ba其受体[43]。MMP-9浓度的升高与非实质肝细胞的纤维化起始密切相关[44]。此外，ROS的破坏作用也延伸到蛋白质中成为未折叠的蛋白质，并在内质网中积累-应激，产生适应的分子驻留伴侣，导致肝脏HSP-70水平升高。因此，HSP-70在细胞应激后发挥着至关重要的作用，通过选择和引导异常蛋白到溶酶体降解，并通过与凋亡蛋白酶激活因子-1结合，从而阻止线粒体凋亡途径，进而将前caspase-9和前caspase-3招募到凋亡体中[45]。gydF4y2Ba

结果表明，nAg的新结构在50 mg/kg(累积剂量200 mg/kg)下对硝酸铅的肝毒性通路有明显的抑制作用。这些发现表现为氧化应激降低，GPx和SOD活性升高，MDA水平降低，同时修复DNA片段bya值超过15%，降低凋亡细胞死亡的易感性和炎症细胞因子的产生，随后肝功能改善。这些发现与[46-49]的研究结果一致。目前普遍认为，nAg具有相对的细胞毒性作用，因为它们的热力学不稳定，内体的氧化环境导致nAg的溶解和Ag的释放gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba离子[48]。Ag)gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba离子与细胞膜相互作用，导致细胞膜完整性降低，通透性增加;它们能够结合蛋白质中的巯基，导致蛋白质功能不正常;它们与DNA结合并破坏DNA，导致细胞凋亡[9]。因此，纳米-纳米aghap复合材料在热力学上并不有利，可能代表AggydF4y2Ba^+gydF4y2Ba隔离和解毒机制。这种机制可以解释当前研究中铅诱导的抗氧化酶抑制、细胞死亡和DNA破坏的潜在风险降低的原因。另一方面，nAg逆转增加的肝酶可能是由于其稳定膜的活性和防止细胞内酶的渗漏，表明肝组织的生理功能得到改善[49]。尽管许多研究将纳米颗粒的毒性联系起来gydF4y2Ba-gydF4y2Ba因此，nAg已被证明在抑制炎症方面特别有效[48,50-53]。这些化学介质的产生是启动和调节免疫反应的关键事件，减少或阻断这些物质的产生和细胞因子的有害作用是调节炎症过程的重要方面[48]。同时，nAg注射液对铅中毒大鼠il -2、TNF-α、IFN-γ及HSp-70、MMp-9的产生均有显著抑制作用，表明nAg通过调节细胞因子减少炎症反应。据其他报道，nAg对Th1和Th2细胞因子导向的免疫反应有很强的影响，这是由它们分泌炎症细胞因子IL-2、TNF-α和INF-γ的能力决定的[48,50]。此外，nAg还具有抑制炎症细胞因子表达和NF-κB活化的作用[15,54]。gydF4y2Ba

肝损伤的各种形态表现很难单独区分。因此，将生化结果与病理结果联系起来是非常重要的。铅中毒大鼠肝脏切片显示广泛的肝脏改变，如变性实质肝细胞局灶性炎症细胞聚集，伴有Kuepfer细胞弥漫性和水肿。门静脉区纤维化及炎性细胞浸润。变性肝实质内可见肉芽肿形成。肝毒性表现为细胞空泡形成，这是细胞对有害物质的一种防御机制。这些物质在液泡中分离，从而防止干扰细胞代谢。细胞质空泡化(水肿)是由于脂肪代谢紊乱和/或线粒体氧化磷酸化以及细胞膜上ATP依赖钠泵的失效造成的。因此，钠在细胞内积聚，随后水进入不同的细胞室，最终导致细胞肿胀[36]。另一方面，肝纤维化是纤维化基因表达激活介导的ROS通路的结果[55]。 The activation of Kupffer cells is an important source for induced inflammatory mediators such as TNF-α and IL-2 which in turn contribute to generation of free radicals in the liver [56].

结论gydF4y2Ba

本研究的结果说明了nHAp螯合nAg的新合成和表征。这种制备提供了一种生物安全的复合材料，具有独特的化学和生物特性，并具有抗肝毒性作用。这意味着未来发展新的或适应的方法，适合评估涉及纳米银的新药品。尽管未来的研究还需要进一步探索nAg的化学成分对各种组织中细胞和分子反应的重要性，但现有的数据表明，银纳米颗粒可以被设计成下一代生物相容性药物的一部分。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

Eman I. Abdel-Gawad、Emad M. Elsherbiny和Sameh A. Awwad分析了数据，起草了手稿，设计了研究，提供了必要的支持，并指导了实施和数据收集。gydF4y2Ba

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