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简介

在耐药性不断增加的时代，快速检测和确定与抗菌素耐药性有关的分子机制是成功治疗血流感染的关键。适当的抗菌治疗对降低死亡率至关重要，应在怀疑败血症后1小时内开始，但在耐药性机制不断变化的医院中，经验性治疗是一个挑战。利用各种创新技术实现了阳性血液培养物(bc)的快速微生物鉴定[4-7]。近年来，通过使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对直接从阳性bc中提取的样本进行病原体鉴定，结果的周转时间确实大大缩短了[8,9]。

在比萨大学医院(意大利比萨)的细菌学科室，大肠杆菌而且肺炎克雷伯菌为从bc[10]中分离到的流行种。而在我们的托斯卡纳地区大肠杆菌对大多数抗生素仍敏感，对碳青霉烯耐药的菌株k .肺炎在社区和医疗机构中发展和传播，首先是k .肺炎含有KPC碳青霉烯酶基因(KPC- kp)的菌株，以及最近含有NDM基因(NDM- kp)的菌株[11,12]。为了指导临床医生开始适当的治疗，我们使用了CarbaR分子试剂盒(GeneXpert®System, Cepheid, Sunnyvale, CA, USA)，该试剂盒已被开发用于检测碳青霉烯耐药机制(bla_KPC，bla_的NDM，bla_VIM，bla_IMP-1,bla_OXA-48基因)来自直肠拭子或细菌菌落。在本研究中，我们旨在建立一种快速的方法，能够从含有碳青霉烯酶的阳性血液培养中直接检测和分化最常见的碳青霉烯酶基因家族k .肺炎．为了达到这一目的，直接从阳性BC瓶中回收细菌颗粒，并根据先前公布的协议[10]部分用于MALDI-TOF MS鉴定(Bruker Daltonics，不来梅，德国);当细菌被鉴定为k .肺炎，将收获的颗粒分离出来，制备0.5麦克法兰悬浮液。蒸馏水中1:10稀释的20 μ l接种于Xpert®carbar - r裂解缓冲液中，剧烈涡旋1分钟。接下来，将分离液(1.7 ml)转移到Xpert®Carba-R药筒中进行检测和分化。从2016年6月至2019年5月期间在Pisa大学医院住院的患者的血液样本接种到血液培养瓶+有氧/F和+厌氧/F，或Peds + F (Becton Dickinson &Co, BD，米兰，意大利)。微生物组共收集了101.290个bc，并将其转移到Bactec FX仪器(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA)，其中10.405个呈阳性。BC阳性的瓶子中，965瓶是for肺炎。对于每个患者，只对第一个阳性BC瓶进行本研究中描述的方法处理:共406例k .肺炎MALDI-TOF MS直接鉴定时间约为30′，而碳青霉烯耐药基因的分子检测时间为48′。166个(40.9%)bc中发现碳青霉烯耐药机制。随后对所有菌株进行表型分析，结果与分子方法100%一致。如图1所示，2016年KPC-Kp生产者占比为45%，2017年为43%，2018年为31%，2019年为25%。在2016年和2017年，两种菌株k .肺炎检测到含有碳青霉烯酶的VIM基因;k .肺炎携带碳青霉烯酶OXA-48基因在2016年仅检测到1例。2016年和2017年未检测到NDM-Kp，而2018年检测到NDM-Kp的百分比为3%，2019年(1 - 5月)为20%。k .肺炎目前尚未检测到含有碳青霉烯酶的IMP-1基因。

图1所示。产碳青霉烯酶肠杆菌(CPE)血培养趋势

在北托斯卡纳，我们目睹了碳青霉烯类耐药机制随着时间的推移而逐步演变，以及NDM-Kp的强力出现。2019年7月，我们的地区卫生局发布了一项严格的感染监测和控制协议，试图阻止耐药菌株的流行蔓延。在这种情况下，一种直接从阳性bc中检测碳青霉烯类耐药分子机制的快速方法可能对感染管理至关重要。的确，根据检测到的耐药性机制，结果阳性的患者可以被迅速隔离，并以不同的方式隔离。该方法需要78′的时间进行MALDI-TOF质谱快速鉴定k .肺炎碳青霉烯耐药机制的检测与分化。综上所述，我们认为这种方法既可设计有效的感染控制措施，又可迅速实施正确的抗菌治疗，因为众所周知，使用新药物，例如。头孢他啶/阿维巴坦对NDM-Kp无效。

关键字

碳青霉烯耐药，血液培养，新德里金属-β-内酰胺酶，NDM, MALDI TOF MS

参考文献

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